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Pandemic A/HIN1 2009 Influenza Virus-like Particles Elicited Higher and Broader Immune Responses than the Commercial Panenza Vaccine
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作者 Naru Zhang Yongping Lin +7 位作者 Min Chen Ho Chuen Leung Chung Sing Chan Kwok Man Poon JieZhou Chung Yan Cheung Liwei Lu Bojian Zheng 《Journal of Pharmacy and Pharmacology》 2014年第1期50-58,共9页
Objectives: The aim was to construct 2009 pandemic A/HINI influenza VLPs (virus-like particles) and compare the immunogenicity and protection efficacy with the commercial Panenza vaccine in BALB/c mouse model. Meth... Objectives: The aim was to construct 2009 pandemic A/HINI influenza VLPs (virus-like particles) and compare the immunogenicity and protection efficacy with the commercial Panenza vaccine in BALB/c mouse model. Methods: VLPs derived from influenza A/Hong Kong/01/2009 (H 1N 1 ) virus were constructed by Bac-to-Bac baculovirus expression system. VLPs were purified by sucrose density gradient ultracentrifugation and then characterized by Western blotting analysis and transmission electron microscopy. After single dose vaccination with 3 lag of VLPs and equal amount of Panenza vaccine, the immune responses and efficacy of protection induced by VLPs were compared with those elicited by the Panenza vaccine in 6-8 weeks old female BALB/c mice. Key findings: VLPs could induce higher antibody titer as determined by hemagglutinin inhibition and microneutralization assay. Furthermore, we demonstrated that VLPs induced better antibody response to neuraminidase. In addition, VLP vaccinated mice had stronger cell-mediated immune response. As a result, our VLPs conferred 100% protection while the Panenza vaccine only conferred 67% protection. Conclusion: From the results, we concluded that influenza VLPs are highly immunogenic and they are promising to be developed as an alternative strategy to vaccine production in order to control the spread of influenza viruses. 展开更多
关键词 influenza virus virus-like particle Panenza vaccine BALB/c mice.
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H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒的构建
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作者 王粲 张民秀 +6 位作者 谢芝勋 李孟 罗思思 李丹 阮志华 谢丽基 谢志勤 《中国兽药杂志》 2024年第7期1-12,共12页
为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Wes... 为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Western-blot鉴定重组蛋白的免疫活性,再将rBV-HA-M1和rBV-NA以最佳感染复数比例共感染昆虫Sf9细胞,经浓缩后获得病毒样颗粒,同时进行血凝滴度测定和透射电镜观察。透射电镜观察结果显示,表达的HA-M1和NA重组蛋白可以在Sf9细胞中自组装形成病毒样颗粒,浓缩的病毒样颗粒能够凝集1%的鸡红细胞,血凝效价为1∶64。试验结果为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 病毒样颗粒 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
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以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 邓明俊 肖西志 +4 位作者 朱来华 辛学谦 郑小龙 王群 张彦明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第12期13-19,共7页
【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告... 【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告DNA分子。以金磁微球为固相吸附载体,通过亲和素-生物素的桥联作用,将含有生物素的报告DNA分子与生物素标记的抗AIVH5N1血凝素蛋白的检测抗体分子连接,H5N1AIV与检测抗体结合后,体外扩增报告DNA,间接放大低含量病毒信号,建立可有效检测微量H5N1AIV的免疫PCR方法。对建立的免疫PCR方法的最适报告DNA浓度、最适链亲和素工作浓度、灵敏度和特异性进行确定和评价。【结果】建立的免疫PCR方法最适报告DNA质量浓度为1ng/mL,最适链亲和素工作质量浓度为20ng/mL,该方法可成功检测到10-4EID50/mL的H5N1AIV,而且特异性良好。【结论】建立的以金磁微球为吸附载体的免疫PCR是一种灵敏度高、特异性好的检测微量H5N1AIV的方法。 展开更多
关键词 免疫PCR H5N1禽流感病毒 金磁微球
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应用HA、NA、M1和M2蛋白制备H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒 被引量:5
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作者 王立强 许龙 +6 位作者 周晓巍 杨志新 陆健昇 刘冰 夏炳辉 杨津 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2011年第6期759-763,共5页
目的:应用重组杆状病毒表达系统制备由HA、NA、M1和M2蛋白组成的H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒,为研究H5N1高致病性禽流感疫苗奠定基础。方法:构建能共表达A/chicken/Jilin/2003(H5N1)禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)、A/PR/8/34(... 目的:应用重组杆状病毒表达系统制备由HA、NA、M1和M2蛋白组成的H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒,为研究H5N1高致病性禽流感疫苗奠定基础。方法:构建能共表达A/chicken/Jilin/2003(H5N1)禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)、A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基质蛋白(M1)和离子通道蛋白(M2)的2个二元重组杆状病毒,共同感染HighFive细胞,同时表达HA、NA、M1和M2蛋白,使这4种蛋白在感染的细胞内自主组装成病毒样颗粒。经差速离心和蔗糖密度梯度超速离心收获病毒样颗粒,通过Western印迹鉴定病毒样颗粒的组成,透射电镜观察病毒样颗粒形态,血凝试验测定病毒样颗粒的活性。结果:HA、NA、M1、M2蛋白在昆虫细胞中共表达,并组装成病毒样颗粒;电镜观察到病毒样颗粒的形态与流感病毒一致,直径约80 nm;血凝试验显示该病毒样颗粒具有凝集鸡红细胞的活性。结论:应用该方法可以制备流感病毒样颗粒,为H5N1流感疫苗研究提供了可行方案。 展开更多
关键词 流感病毒 病毒样颗粒 杆状病毒
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含H5N1禽流感病毒核酸序列的病毒样颗粒的制备及应用 被引量:2
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作者 戚宇华 崔仑标 +5 位作者 史智扬 葛以跃 李显 张文帅 单军 汪华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期29-32,35,共5页
目的构建耐RNase酶的内含禽流感病毒H5N1亚型部分核酸序列的病毒样颗粒。方法构建中间载体pET32a-MS2,将禽流感病毒H5N1亚型的HA、NA和M基因片断连接到中间载体上,构建原核表达载体pET32a-MS2-HA,pET32a-MS2-NA和pET32a-MS2-M,分别转化... 目的构建耐RNase酶的内含禽流感病毒H5N1亚型部分核酸序列的病毒样颗粒。方法构建中间载体pET32a-MS2,将禽流感病毒H5N1亚型的HA、NA和M基因片断连接到中间载体上,构建原核表达载体pET32a-MS2-HA,pET32a-MS2-NA和pET32a-MS2-M,分别转化宿主菌,诱导表达制备病毒样颗粒。结果表达载体经PCR、酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。电镜观察到了病毒样颗粒,荧光定量RT-PCR试验表明颗粒稳定性良好。结论成功构建了含禽流感病毒H5N1部分核酸序列的病毒样颗粒且稳定性良好,可作为禽流感H5N1亚型RNA检测的标准品和质控品。 展开更多
关键词 MS2噬菌体 禽流感病毒H5N1 病毒样颗粒 原核表达
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H5N1重组禽流感病毒样颗粒免疫原性研究 被引量:3
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作者 黄晓媛 施金荣 +2 位作者 韩锡鑫 邱阿明 杨晓明 《微生物学免疫学进展》 2013年第1期7-11,共5页
目的对构建的H5N1重组禽流感病毒样颗粒(VLPs)进行初步免疫原性探讨,并与H5N1全病毒灭活疫苗(WIV)进行体液免疫和细胞免疫的比较。方法在0周和3周分别以纯化H5N1重组禽流感病毒样颗粒、H5N1全病毒灭活疫苗及pH7.2 PBS腿部肌肉注射BALB/... 目的对构建的H5N1重组禽流感病毒样颗粒(VLPs)进行初步免疫原性探讨,并与H5N1全病毒灭活疫苗(WIV)进行体液免疫和细胞免疫的比较。方法在0周和3周分别以纯化H5N1重组禽流感病毒样颗粒、H5N1全病毒灭活疫苗及pH7.2 PBS腿部肌肉注射BALB/c小鼠,于不同时间收集血清,以血凝抑制试验(HI)和血清IgG抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)评估体液免疫,CD4+、CD8+T细胞亚群及酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评估细胞免疫,并以同型毒株滴鼻攻击,观察小鼠存活率。结果病毒样颗粒各组和全病毒灭活疫苗免疫后小鼠血清ELISA IgG效价均有升高;中和抗体效价除病毒样颗粒120 ng/只免疫剂量外其他免疫小鼠HI效价均达1︰40;小鼠脾CD4+T淋巴细胞亚群分类:全病毒灭活疫苗组(600μg/只)为36.56%;病毒样颗粒组(120 ng/只,600 ng/只,2 500 ng/只)分别为26.58%,32.20%,29.25%;PBS组为26.65%;CD8+T淋巴细胞亚群分类:全病毒灭活疫苗组(600 ng/只)为10.78%;病毒样颗粒组(120 ng/只,600 ng/只,2 500 ng/只)分别为1 3.53%,14.24%,1 3.35%;PBS组为10.69%。ELISPOT试验统计学数据显示,病毒样颗粒和全病毒灭活疫苗的小鼠脾单个核细胞分泌IFN-γ细胞与PBS组有显著性差异;小鼠保护性试验结果显示,除病毒样颗粒120 ng/只免疫剂量小鼠的存活率为87.5%外,其他病毒样颗粒实验组小鼠均为100%,PBS对照组为12.5%。结论 H5N1重组禽流感病毒样颗粒能诱导体液免疫和细胞免疫,并能抵御同型病毒株的攻击,可作为H5N1人用禽流感的候选疫苗。 展开更多
关键词 H5N1禽流感病毒 病毒样颗粒 免疫原性
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一种共表达不同亚型禽流感病毒基因且形成病毒样颗粒的真核表达载体的构建与鉴定 被引量:1
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作者 于周璐 滕巧泱 +5 位作者 崔宏锐 荣广玉 李雪松 杨健美 陈鸿军 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期13-18,共6页
动物流感DNA疫苗是非常有应用前景的新型疫苗之一,本研究构建了能同时表达禽流感病毒2种血凝素H5HA和H9HA以及1种神经氨酸酶N1NA的真核表达质粒。间接免疫荧光结果表明,构建的真核表达质粒转染MDCK细胞后,同时表达出H5HA、H9HA和N1NA蛋... 动物流感DNA疫苗是非常有应用前景的新型疫苗之一,本研究构建了能同时表达禽流感病毒2种血凝素H5HA和H9HA以及1种神经氨酸酶N1NA的真核表达质粒。间接免疫荧光结果表明,构建的真核表达质粒转染MDCK细胞后,同时表达出H5HA、H9HA和N1NA蛋白;转染293T细胞上清通过血凝试验可检测到2-4血凝价;通过透射电镜观察到了病毒样颗粒。本研究用一种质粒同时表达不同亚型流感病毒蛋白并且形成了病毒样颗粒,为流感病毒多价DNA疫苗研究提供了坚实基础。 展开更多
关键词 禽流感 病毒样颗粒 H5HA H9HA N1NA
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禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗佐剂的筛选及其对鸡的免疫效果评价
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作者 周康森 顾盼 +2 位作者 王玲玲 吴胜昔 蔡家利 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2017年第5期99-104,147,共7页
为使禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗尽早投入市场,有效防控H9N2禽流感的流行,拟从油乳、ISA 206和微球佐剂中筛选出一种最适用于禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗的佐剂。首先对H9N2病毒样颗粒血凝效价及血凝素(HA)含量的测定,然后制备出禽流感H9N2... 为使禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗尽早投入市场,有效防控H9N2禽流感的流行,拟从油乳、ISA 206和微球佐剂中筛选出一种最适用于禽流感H9N2病毒样颗粒疫苗的佐剂。首先对H9N2病毒样颗粒血凝效价及血凝素(HA)含量的测定,然后制备出禽流感H9N2病毒样颗粒油乳疫苗、ISA 206佐剂疫苗、微球疫苗,并对其稳定性、无菌性和安全性等进行检验。通过溶菌酶含量、血凝抑制试验以及T淋巴细胞刺激指数等试验检测其非特异性免疫和特异性免疫水平。结果表明:微球VLP疫苗组溶菌酶含量高于其他各疫苗组(p﹤0.01),能引起非特异性免疫;微球VLPs(口服)疫苗组的血凝抑制滴度高于其他各疫苗组(p﹤0.01),抗体增长趋势与阳性对照组无显著差异(p>0.05),产生了有效的体液免疫应答;微球VLP疫苗(口服)疫苗组T淋巴细胞刺激指数最高。微球口服疫苗其免疫原性强,安全稳定,能诱导机体产生有效的免疫应答,可为新型病毒样颗粒疫苗佐剂的选择提供参考。 展开更多
关键词 H9N2禽流感病毒 病毒样颗粒 佐剂 微球
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H9N2亚型禽流感病毒样颗粒制备及免疫原性评价 被引量:2
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作者 王同燕 王玉娟 +10 位作者 仝晓丹 张盼涛 沈萌 薛景景 宋欢欢 盛东北 颜世君 李胜强 谭菲菲 刘武杰 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期34-40,共7页
H9N2亚型禽流感病毒近年来在家禽中普遍发生,可造成蛋鸡产蛋量下降,肉鸡复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本研究筛选保护谱广的H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA、NA、M1基因,以共表达的方式构建重组杆状病毒。通过血凝活... H9N2亚型禽流感病毒近年来在家禽中普遍发生,可造成蛋鸡产蛋量下降,肉鸡复合型呼吸道疾病,给养禽业造成了巨大的经济损失。本研究筛选保护谱广的H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA、NA、M1基因,以共表达的方式构建重组杆状病毒。通过血凝活性检测、Western blot杂交、电镜观察等方法对蛋白表达及病毒样颗粒的组装进行鉴定。结果表明,构建的重组杆状病毒可同时表达HA、NA和M1蛋白,且表达的蛋白具有良好的血凝活性,电镜观察可见约100 nm的病毒样颗粒。将表达的蛋白制备油乳剂亚单位疫苗并免疫SPF鸡,免疫后诱导的HI抗体与全病毒灭活疫苗的HI抗体效价水平相当,且对异源毒株具有良好的交叉保护。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感 病毒样颗粒 杆状病毒表达系统 免疫原性
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巴斯德毕赤酵母多拷贝整合表达组装禽流感病毒样颗粒 被引量:1
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作者 薛倩 马文戈 +5 位作者 沙依兰·卡依扎 汪萍 韩涛 苗书魁 夏俊 陆桂丽 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2148-2156,共9页
【目的】构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础。【方法】以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达... 【目的】构建多拷贝整合表达禽流感病毒样颗粒的重组巴斯德毕赤酵母,为H5N1亚型禽流感基因工程疫苗提供基础。【方法】以巴斯德毕赤酵母GS115株18S rRNA基因(rDNA)部分序列,插入pPIC9K载体上XbaⅠ和Bsp1407Ⅰ位点间,构建多拷贝整合表达质粒p8K。再以禽流感病毒H5N1毒株基因组RNA为模板,RT-PCR扩增HA、M和NA基因,分别插入多拷贝载体p8K,构建表达质粒p8K-HA/M/NA。表达质粒分别扩增后线性化,按比例混合,电转化GS115感受态细胞。增菌后,经遗传霉素G418抗性平板筛选、PCR鉴定携带HA、M和NA基因序列的多拷贝整合菌株。阳性菌株增菌、诱导表达、高压均质破碎后,Western-blot检测表达产物。【结果】PCR鉴定阳性的重组菌株,其细胞裂解蛋白,免疫印迹试验可检测到与HA、M_(1)和NA分子量一致的蛋白条带;电子显微镜可观察到大小约为80~120 nm的病毒样颗粒,免疫鸡能产生抗禽流感病毒中和抗体。【结论】重组毕赤酵母能够多拷贝整合、表达、组装禽流感病毒样颗粒。 展开更多
关键词 禽流感病毒 多拷贝整合 病毒样颗粒
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禽流感病毒样颗粒疫苗研究进展
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作者 张莹 王成玺 +1 位作者 王秀荣 李文超 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第22期31-35,共5页
禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染引起的一种禽类传染病,给家禽业造成了巨大的经济损失。AIV因抗原漂移和抗原转换可能会产生新的变异毒株和亚型,因此禽流感是在世界范围内需要被重点关注的禽类传染病。病毒样颗粒(... 禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染引起的一种禽类传染病,给家禽业造成了巨大的经济损失。AIV因抗原漂移和抗原转换可能会产生新的变异毒株和亚型,因此禽流感是在世界范围内需要被重点关注的禽类传染病。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)能自组装成类似天然病毒结构的蛋白颗粒,易被免疫系统识别,但无遗传物质,安全性较高,是疫苗制备的新方向。禽流感VLPs是基于AIV蛋白模拟禽流感病毒外表面而构成的蛋白颗粒,具有很强的免疫原性,用其制成的疫苗具有无传染性、稳定和不易失活等优势,是一种安全性较高的疫苗类型。笔者就禽流感VLPs疫苗的研发基础、与疫苗有关的结构蛋白及疫苗的通用性和优缺点进行综述,以期对未来禽流感疫苗的研发和防控提供理论参考。 展开更多
关键词 禽流感 病毒样颗粒疫苗 禽流感疫苗 血凝素 神经氨酸酶 基质蛋白
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表达H5N1亚型禽流感HA、NA、M1基因的重组杆状病毒的鉴定
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作者 李晶梅 陈鲁杰 +6 位作者 王焕君 李改 朱薇 张飞雁 石宝兰 漆世华 谢红玲 《中国兽药杂志》 2021年第12期9-13,共5页
为证实插入了禽流感HA、NA和M1基因的重组杆状病毒(VLP01株)能表达HA、NA和M1蛋白并自行组装成具有禽流感形态的病毒样颗粒,对VLP01株的细胞培养上清进行离心纯化或透析处理,获得的表达产物用电镜、Western Blot、ELISA进行鉴定。电镜... 为证实插入了禽流感HA、NA和M1基因的重组杆状病毒(VLP01株)能表达HA、NA和M1蛋白并自行组装成具有禽流感形态的病毒样颗粒,对VLP01株的细胞培养上清进行离心纯化或透析处理,获得的表达产物用电镜、Western Blot、ELISA进行鉴定。电镜观察表达产物,可见禽流感病毒样颗粒;以Western Blot方法用HA、NA和M1抗体分别检测表达产物,可见特异性条带;以NA多抗为捕获抗体、HA单抗为检测抗体建立双抗体夹心ELISA方法检测表达产物,结果为阳性,说明表达产物为同时含有HA蛋白和NA蛋白的病毒样颗粒。结果显示,VLP01株能够表达HA、NA和M1蛋白,并自行组装成禽流感病毒样颗粒分泌到细胞培养上清中。 展开更多
关键词 重组杆状病毒 禽流感病毒样颗粒 电镜 Western Blot ELISA
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嵌合NDV-HA病毒样颗粒的制备与鉴定 被引量:3
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作者 秦岭松 钱晶 +4 位作者 徐小洪 丁佳欣 李金斗 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1237-1242,共6页
新城疫和禽流感是严重危害养禽业的两大动物疫病,其中基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)仍是当前的主要优势流行株。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒结... 新城疫和禽流感是严重危害养禽业的两大动物疫病,其中基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)仍是当前的主要优势流行株。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒结构蛋白装配而成的空心颗粒,不携带核酸,具有良好的安全性和免疫原性。本试验将AIV HA胞外域与NDV F基因胞内、跨膜域融合构建FcH9融合序列;进一步通过利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有FcH9序列的重组杆状病毒rBV-FcH9,与实验室已构建rBV-M和rBV-HN共感染Sf9细胞,收集感染细胞上清,经蔗糖密度梯度离心法纯化嵌合VLPs。血凝血抑试验结果显示嵌合VLPs中HN和HA效价均为28;Western blot分析表明该VLPs可以与特异性阳性血清发生反应;透射电镜观察该VLPs具有典型的病毒粒子结构正,形态大小与野生型NDV相似。结果表明:本试验成功制备了包含有HN和HA蛋白的嵌合VLPs,为研制新型NDV-AIV二联疫苗候选株奠定基础,并为当前新城疫与H9N2亚型禽流感的防控提供策略。 展开更多
关键词 新城疫 禽流感 嵌合病毒样颗粒 疫苗候选株
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禽流感病毒样颗粒疫苗研究进展 被引量:6
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作者 高晓艺 王传彬 +1 位作者 石玉祥 刘玉良 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期920-928,共9页
病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由病毒的一个或几个结构蛋白组装形成的在形态上类似于病毒的颗粒,无核酸和感染性。近年来,国内外在禽流感VLPs研究领域取得了一些新进展。目前,已有H1N1、H3N2、H5N1、H5N3、H7N1、H7N9和H9N2... 病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由病毒的一个或几个结构蛋白组装形成的在形态上类似于病毒的颗粒,无核酸和感染性。近年来,国内外在禽流感VLPs研究领域取得了一些新进展。目前,已有H1N1、H3N2、H5N1、H5N3、H7N1、H7N9和H9N2等多种亚型禽流感VLPs包装成功的研究报道。禽流感VLPs作为疫苗安全性好,可刺激机体产生体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫,并且不同亚型间可提供交叉免疫保护,因此在禽流感新型疫苗创制方面具有独特优势和广阔的应用前景。本文就禽流感VLPs的研究进展作一综述,旨在为新型禽流感疫苗研发和防控等工作提供参考和借鉴。 展开更多
关键词 禽流感病毒 病毒样颗粒 杆状病毒表达系统 研究进展
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H5亚型禽流感病毒样颗粒的制备及其免疫原性的初步研究 被引量:2
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作者 高晓艺 蒋菲 +5 位作者 王传彬 王乃迪 李建峰 杨林 石玉祥 刘玉良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期961-968,共8页
本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体p FastBac1,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒。将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制... 本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体p FastBac1,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒。将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制试验、透射电镜、Western-blot等方法鉴定。利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化VLPs,选择不同剂量VLPs免疫6周龄SPF鸡,评价其免疫原性。结果显示,成功构建重组杆粒,转染的sf9细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;在细胞盲传3代后,含有VLPs的细胞上清液的血凝效价可达1∶27;Western-blot证实3个目的蛋白均成功表达;透射电镜观察结果表明,VLPs与天然禽流感病毒颗粒具有相似的形态特征;动物试验结果表明,二免后2周,血清抗体效价最高可达到1∶210,抗体亚型主要为Ig G1。本研究首次成功构建了2.3.4.4分支H5亚型禽流感VLPs,为开发新型、安全、高效的H5亚型禽流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 2.3.4.4分支 H5亚型禽流感 病毒样颗粒 杆状病毒表达系统
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高效液相尺寸排阻色谱-多角度激光散射定量检测灭活禽流感病毒抗原中完整病毒颗粒
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作者 郝建敏 刘幽燕 +2 位作者 苏志国 张松平 李正军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4295-4307,共13页
本研究旨在建立一种灭活禽流感病毒原料液中完整病毒颗粒准确定量的方法。针对直接采用高效液相尺寸排阻色谱法(high performance size exclusion chromatography,HPSEC)检测灭活禽流感病毒原液存在杂质干扰的问题,首先以H5N8型抗原为对... 本研究旨在建立一种灭活禽流感病毒原料液中完整病毒颗粒准确定量的方法。针对直接采用高效液相尺寸排阻色谱法(high performance size exclusion chromatography,HPSEC)检测灭活禽流感病毒原液存在杂质干扰的问题,首先以H5N8型抗原为对象,分别考察了聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀和离子交换色谱法(ion exchange chromatography,IEC)进行预处理。在优化条件下,经DEAE FF阴离子交换层析纯化预处理,杂蛋白去除率为86.87%,病毒血凝回收率为100%。HPSEC分析预处理后的样品,8.5–10.0 min处色谱峰样品电泳检测显示主要为H5N8病毒蛋白,动态光散射分析平均粒径为127.7nm,推测为完整病毒特征峰;在IEC预处理后的样品中加入抗体进行HPSEC检测,8.5-10.0 min处特征峰消失,显示IEC预处理有效去除了杂质干扰。通过将HPSEC与多角度激光散射技术(multi-angle laser scattering technique,MALLS)联用,可以准确获得样品中完整病毒颗粒的数量,且病毒颗粒数与色谱峰面积具有良好线性关系(R2=0.997)。建立的IEC预处理-HPSEC-MALLS检测方法应用于其他亚型(H7N9)、批次和浓度的病毒原液中完整病毒颗粒数的准确检测,均具有良好适用性,且重复性好,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)<5%,n=3。 展开更多
关键词 灭活禽流感病毒颗粒 定量检测 离子交换层析 尺寸排阻色谱
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禽流感纳米颗粒疫苗的研究进展 被引量:5
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作者 潘亮奇 李硕 +10 位作者 吴梅花 于亚南 林嘉特 孙华鹏 崔新鑫 许丰祥 刘杨 李明亮 焦培荣 廖明 孙海亮 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1572-1579,共8页
禽流感在世界范围内不断暴发,不但给养禽业造成了巨大的经济损失,而且给公共卫生安全造成了一定威胁。当前,疫苗免疫仍然是预防与控制禽流感的主要手段。而纳米疫苗具有免疫剂量小、效应时间长、定点靶向性、生物相容性好等特点,因此寻... 禽流感在世界范围内不断暴发,不但给养禽业造成了巨大的经济损失,而且给公共卫生安全造成了一定威胁。当前,疫苗免疫仍然是预防与控制禽流感的主要手段。而纳米疫苗具有免疫剂量小、效应时间长、定点靶向性、生物相容性好等特点,因此寻求和开发新型纳米疫苗用于防控禽流感具有很强的现实意义。本文从纳米疫苗的种类、疫苗抗原的类型、免疫接种途径以及应用前景方面,对禽流感纳米颗粒疫苗的研究进展进行论述,以期为新型禽流感纳米疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 禽流感 纳米疫苗的种类 疫苗抗原的类型 免疫接种途径
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H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的制备 被引量:4
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作者 孙艺学 丛彦龙 +1 位作者 李佳新 刘立军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2155-2160,共6页
病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗是近年的研究热点。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,以禽流感病毒的M1蛋白和小鼠白血病病毒的gag蛋白2种不同来源的基质蛋白作为骨架,分别构建了展示G57基因型H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的... 病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗是近年的研究热点。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,以禽流感病毒的M1蛋白和小鼠白血病病毒的gag蛋白2种不同来源的基质蛋白作为骨架,分别构建了展示G57基因型H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的VLPs。在透射电镜下,所制备的VLP-M1和VLP-gag的形态结构与野生型H9N2亚型禽流感病毒类似,其中以gag蛋白为骨架的VLPs的粒子直径约为150 nm,明显大于VLP-M1粒子。血凝试验结果显示,VLP-gag比VLP-M1提高了1个血凝滴度。Western blot鉴定进一步证实所构建的VLP-M1和VLP-gag中可以同时检测到HA和M1或gag蛋白。由此表明,VLP-gag的表面积大于VLP-M1,其表面镶嵌的HA数量多于VLP-M1。本研究为进一步比较VLP-gag和VLP-M1的免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感 病毒样颗粒 GAG蛋白
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新城疫、禽流感和禽腺病毒病三联嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定 被引量:2
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作者 冯嘉轩 陈凯楠 +6 位作者 李金斗 丁佳欣 陈铭桦 邵亚男 郭春红 邹映雪 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2368-2373,2400,共7页
采用新城疫病毒样颗粒载体平台和昆虫杆状病毒表达系统,将禽流感H9N2株HA、禽4型腺病毒Fiber2嵌合至新城疫病毒样颗粒载体表面进而构建“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)。PCR及免疫荧光检测结果显示,成功构建了重组... 采用新城疫病毒样颗粒载体平台和昆虫杆状病毒表达系统,将禽流感H9N2株HA、禽4型腺病毒Fiber2嵌合至新城疫病毒样颗粒载体表面进而构建“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)。PCR及免疫荧光检测结果显示,成功构建了重组杆状病毒rBV-cFiber2;透射电镜结果显示,ND-AI-FAdV4 cVLPs直径约为100 nm、含有囊膜的空心蛋白颗粒;免疫印迹结果显示,嵌合型病毒样颗粒各组分蛋白均正确表达。本试验为新城疫、禽流感和禽腺病毒病的安全、高效病毒样颗粒新型疫苗候选株的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫 禽流感 禽腺病毒病 病毒样颗粒 昆虫杆状病毒表达系统
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H9N2亚型禽流感嵌合病毒样颗粒的免疫效果 被引量:2
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作者 孙艺学 丛彦龙 +1 位作者 李佳新 刘立军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1395-1401,共7页
病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)是近年来病毒性疫苗研制领域的热点之一。本研究对前期所构建的2种展示H9N2亚型禽流感病毒h9.4.2.5分支HA蛋白的VLPs,即VLP-M1和VLP-Gag的免疫效果进行了比较。结果显示,这2种VLPs均可以刺激商... 病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)是近年来病毒性疫苗研制领域的热点之一。本研究对前期所构建的2种展示H9N2亚型禽流感病毒h9.4.2.5分支HA蛋白的VLPs,即VLP-M1和VLP-Gag的免疫效果进行了比较。结果显示,这2种VLPs均可以刺激商品肉鸡产生体液免疫和细胞免疫应答。在免疫剂量相同时,以小鼠白血病病毒Gag蛋白作为骨架制备的VLP-Gag的免疫保护效果优于VLP-M1,表明该嵌合型VLPs的构建策略具有广阔的研究前景,不仅能够为开发区分感染和免疫动物的标记疫苗提供技术支撑,而且也可以为响应我国绿色、安全、环保的养殖模式做技术储备。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感 病毒样颗粒 GAG蛋白 免疫效果
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