DAZ1/DAZ2 cluster deletion mediated by gr / gr recombination per se may not be sufficient for spermatogenesis impairment： a study of Chinese normozoospermic men

Aim： To explore the possible effect of the deleted in azoospermia （DAZ） copy cluster deletion on spermatogenesis in the Chinese population, the deletion of the azoospermia factor c （AZFc） region was analyzed in 346 normozoospermic men. Methods： Three DAZ single nucleotide variant loci and seven AZFc-specific sequence-tagged sites were examined with polymerase chain reaction （PCR）-restriction fragment length polymorphism and routine PCR. Results： Five （1.4%） of the normozoospermic men were found to have deletion of grlgr-DAZ1/DAZ2. None of the men were found to have b2/b4--entire DAZ deletion. Conclusion： The presence of grlgr-DAZ1/DAZ2 deletion in five men with normozoospermia suggests that this deletion per se may not be sufficient for spermatogenic impairment in Chinese men. （Asian J Androl 2006 Mar; 8： 183-187）

性染色体与男性不育

男性不育是个全球化的问题,其包括遗传原因在内的影响因素众多。对男性而言,X染色体和Y染色体均为单个拷贝。Y染色体因为包含了许多精子发生和性腺发育的关键基因,因而成为研究的热点。Y染色体微缺失是男性精子发生障碍最常见的原因之一。Y染色体长臂的无精子症因子(AZF)区是Y染色体微缺失的好发区域。目前明确定位于AZF区域与精子发生相关的编码蛋白基因有14个,但由于通常的AZF缺失为多基因的联合缺失,因而AZF区域的特定基因在精子发生中的作用还不是很清楚。哺乳动物X染色体在精子发生中的作用因其富集着许多精子发生过程中生殖细胞特异表达基因而受到重视,如AR、USP26、TAF7L、TEX11、KAL1、AKAP4和NXF2等基因。在男性,由于X染色体为半合子状态,X连锁基因通常承受着特别的进化压力,X染色体连锁的单拷贝基因突变不会象常染色体那样被1个正常的等位基因所掩盖掉。尽管许多关于X染色体与精子发生关系的研究已经进行,但X染色体与男性不育的关系仍然还不清楚,还有待更进一步研究。

精子发生相关基因DYS1的分析

用ＰＣＲ方法检测了核型正常（４６，ＸＹ）的９５例无精子症患者和３５例严重少精子症患者基因组ＤＮＡ中的ＤＹＳ１，发现４例无精子症患者有ＤＹＳ１的丢失，严重少精子患者中发现３例有ＤＹＳ１的丢失。结果表明：应用ＰＣＲ法检测ＤＹＳ１基因片段是切实可行的，对无精子症和严重少精子症患者的病因诊断具有一定的应用价值。

男性无精子症和严重少精子症患者SPGY1基因微缺失的检测

目的 :研究Y染色体上无精子因子 (AZoospermiaFactor,AZF)的缺失与无精症和严重少精子症的关系 .方法 :应用PCR方法检测了 4 0例正常男子、4 2例无精子症和 31例严重少精子症男子基因组DNA中AZFc区的SPGY1(SPer matogenesisGenelocusontheY)基因 .结果 :无精子症患者中6例SPGY1基因缺失 (6 /42 ) ;严重少精子症患者中 5例SP GY1基因缺失 (5 /31) ;73例男性不育患者AZFc区SPGY1基因缺失率为 15 % (11/73) .4 0例已生育的正常男性对照均未检测到SPGY1基因的缺失 .结论 :Y染色体SPGY1基因缺失可能是造成男性不育的原因之一 。

DAZ及DAZH基因与精子发生的相关性分析

ＤＡＺ基因（ｄｅｌｅｔｅｄｉｎａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ）是无精子因子（ＡＺＦ）的重要候选成分，它的缺失可致无精子或严重少精子症。人第３号染色体上存在着ＤＡＺ的同源基因ＤＡＺＨ（ＤＡＺｈｏｍｏｌｏｇｕｅ），为探讨ＤＡＺ和ＤＡＺＨ基因在精子发生中的作用，我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了６６名正常生育男性和９０例原发性不育男性基因组ＤＮＡ的ＤＡＺ、ＤＡＺＨ基因。结果：原发性不育男性中１２例ＤＡＺ缺失（无精子症８例，严重少精子症４例）；正常男性ＤＡＺ无一缺失；在正常男性和不育男性中均有ＤＡＺＨ缺失。结果进一步证实ＤＡＺ为ＡＺＦ的候选成分，而ＤＡＺＨ基因与精子发生似无直接的相关性。

特发性无/少精症患者精子发生相关基因DAZ,DAZLA的微缺失

目的 :研究DAZ和DAZLA基因在特发性无精症和严重少精症患者中的微缺失 .方法 :采用聚合酶链反应(PCR)技术检测 38例特发性无精症或严重少精症患者及 2 0例正常生育男性基因组DNA的DAZ和DAZLA基因位点 .结果 :38名患者中 3例有DAZ基因缺失 (无精子症 2例 ,严重少精子症 1例 ) ,1例DAZLA基因缺失 (无精症患者 ,该患者同时伴有DAZ基因缺失 ) .2 0名正常男性中DAZ及DA ZLA基因均得到扩增 .结论 :DAZ和DAZLA基因的微缺失可能与部分无精症和严重少精症的发病机制相关 ,是造成男性不育的重要原因之一 .

无精子症和严重少精子症患者AZF/DAZ基因微缺失的分子生物学检测

目的 用分子生物学方法检测无精子症和严重少精子症患者无精子基因 (AZF)AZF/DAZ基因微缺失。 方法 应用聚合酶链反应 (PCR)技术对无精子症 4 7例、严重少精子症 4例进行Y染色体AZFa、AZFb、AZFc/DAZ、SRY的微缺失检测。 结果 5 1例患者缺失率为 35 .3% (18/ 5 1) ,其中AZFa、AZFb、AZFc的微缺失分别为 4例 (7.8% )、5例 (9.8% )和 4例 (7.8% )。无精子症患者 1例 (1.9% )为AZFa、AZFb的双重缺失 ,2例 (3.9% )为AZFb、AZFc的双重缺失 ;2例 (3.9% )为AZFa、AZFb和AZFc的三重缺失 ;5 1例SRY基因PCR扩增均为阳性。 5例已有生育的正常男性均无AZFa、AZFb、AZFc、SRY的微缺失。 结论 AZF/DAZ(包括AZFa、AZFb、AZFc/DAZ)基因的微缺失是引起无精子和严重少精子导致男性不育的重要原因之一。AZF/DAZ基因微缺失的分子生物学检测对不明原因的不育男性行胞浆内单精子注射 (ICSI)时有指导意义。

男性特发性无精症病人YRRM1基因的检测

目的 :建立对男性无精症病人YRRM1的基因缺失诊断方法。方法 :运用多聚酶链式反应对 10例男性无精症或严重少精症的患者进行YRRM1基因位点缺失检测。结果 :10例发现 1例YRRM1基因发生缺失 ,其它病例未发现。结论 :YRRM1基因位点检测特异性位点的缺失和男性无精症有一定的相关性 。

男性不育215例AZF基因检测结果分析

目的:研究Y染色体长臂的无精子因子AZF(azoospermia factor)基因的检测对诊治男性不育的重要意义。方法:对268例男性不育者进行体格检测、生殖激素六项检测、精液常规检测和染色体核型分析,选取其中染色体核型正常者215例,根据各项分析结果将其分为四组:无精症组、严重少精症组、少精症组及其他组(包括其妻反复自然流产,隐睾或严重精索静脉曲张患者)。另选健康男性20例为对照组,采用多重PCR技术对其进行AZF基因检测。结果:215例中有15例存在不同位点的AZF基因微缺失,其中无精症组6例,缺失率为14.6%,严重少精症组9例,缺失率为13.8%。无精症组和严重少精症组的缺失率与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Y染色体AZF基因缺失是严重生精障碍的重要原因之一。AZF基因筛查是一种简单有效的诊断原发性无精子症和严重少精子症的方法。

应用FISH和PCR方法对7例性发育异常患者进行分子细胞遗传学研究

目的应用FISH和PCR方法对7例性发育异常患者进行明确的遗传学诊断，分析患者性发育异常产生的原因。方法采用CEPX-Yq21双色探针及SRY特异探针进行原位杂交，分析患者X、Y染色体及SRY基因的分布情况；PCR的方法检测Y染色体短臂SRY、ZFY基因和Y染色体长臂AZF因子，确定Y染色体的完整性。结果7例患者中，有5例社会性别为男性：染色体核型为2例46，XX，2例嵌合型46，XX／46，XY；46，XX／46，XY／47，XXY、1例45，X；2例社会性别为女性：1例46，XY，SRY基因阴性；1例46，XX，SRY阴性、ZFY基因阳性。46，XX男性患者中1例SRY基因位于Xp，1例为SRY阴性；嵌合型男性患者中1例AZF多个位点缺失，另1例AZF无位点缺失；45，X男性患者为SRY阳性。结论性染色体畸变是引起性发育异常的重要原因之一，Y染色体在性别分化中起睾丸决定作用，SRY基因是性别决定的主导基因，但不是决定全部男性化的惟一因素。

男性不育症患者与其Y染色体AZF微缺失的相关性研究

目的研究男性不育症患者与其Y染色体AZY微缺的相关性。方法选择2009年10月‐2014年10月,在该院接受治疗的150例男性不育症患者,记录统计患者及其妻子的年龄等基本信息。并对其外周血DNA进行提取,进行染色体检查以及患者Y染色体AZF微缺基因的检测。结果 150例男性不育症患者中,总共检测出14例AZF基因微缺失的患者,其总缺失率为9.33%,其中,无精子症组患者中的缺失率为10.91%,严重少弱精子症组患者中缺失率为10.29%,少精子症组患者中的缺失率为3.70%。无精子症组以及严重少弱精子症组中患者的AZF基因微缺失率与少精子症组相比有大幅度提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论男性Y染色体AZF基因微缺失对其引发不育症具有直接的影响,对不育男性患者进行Y染色体AZF基因检测为其临床治疗具有重要的指导意义。

上海地区原发性男性不育症患者Y染色体AZF基因微缺失的检测

目的探讨上海地区原发性男性不育症患者无精子因子(AZF)基因微缺失情况及其微缺失特点。方法运用聚合酶链反应(PCR)结合琼脂糖凝胶电泳等方法,对上海地区269例原发性男性不育症患者(无精子症38例、严重少精子症231例)以及10名已生育的正常男性进行了AZFa、AZFb和AZFc微缺失筛查。结果 269例男性不育症患者中发现18例AZF基因STS位点存在缺失,其中14例为AZFc区存在缺失、2例为AZFb+c区存在缺失、1例为AZFa+b+c均缺失、1例为AZFa区存在缺失,总缺失率为6.7%。结论 AZFc区为原发性不育症患者AZF基因筛查的主要候选基因,临床上对原发性不育患者进行AZF基因缺失筛查仍是十分必要的。

1个Y染色体微缺失合并19号染色体臂间倒位的家系分析

目的:对1个男性不育家系进行细胞和分子遗传学分析。方法:分析不育家系中3例男性的临床症状,并采用染色体核型分析、序列标签位点-PCR(STS-PCR)和多重连接依赖探针扩增(MLPA)等方法进行检测。结果:先证者及其哥哥的染色体核型为46,XY,inv(19)(p13.3q13.1),其父亲为46,XY;3例男性均为Y染色体AZFc区缺失携带者,MLPA检测发现三者在AZFb、AZFc区有相同的基因拷贝数的减少。结论:联合应用核型分析、Y染色体STS-PCR和MLPA等多种方法,揭示了1个男性不育家系的遗传学病因。

一例45，X／46，X，Yqh-混合型生殖腺发育不全患者的临床特征及遗传学分析

目的探讨1例混合型生殖腺发育不全患者的临床及遗传学特征，为患者的临床诊疗提供依据。方法收集患者的临床资料并检测血清激素水平和外周血染色体核型，应用多重PCR检测Y染色体SRY基因及无精症因子（azoospermiafactor，AZF）a、b、c区域缺失情况、SRY全基因测序；全腹CT和肿块病理切片及免疫组化分析。结果患者血清激素检测结果均正常；染色体核型为45，X／46，X，Yqh-；多重PCR结果显示SRY、zFY及AZFa区无缺失，AZFb区和魁强c区均缺失；SRy全基因测序未见突变；全腹CT示盆腔巨大肿块，术后病理诊断为精原细胞瘤，免疫组化结果显示PLAP、CD117均阳性。结论通过对患者临床资料及遗传学的分析，初步诊断患者为混合型生殖腺发育不全；腺体发生恶变，经病理及免疫组化分析为精原细胞瘤。45，X／46，X，Yqh-患者其精原细胞瘤风险与SRY基因的存在具有相关性。

两种筛查方案在男性不育患者Y染色体微缺失检测中的应用比较

目的比较STS筛查方案与基因特异筛查方案在男性不育患者Y染色体微缺失检测中的效率。方法采用STS筛查方案与候选基因筛查方案对423例男性不育患者进行Y染色体微缺失检测。STS筛查方案依据EAA/EMQN推荐的方法进行,选择6个STS位点,分别为AZFa(SY84,SY86);AZFb(SY127,SY134);AZFc(SY254,SY255);基因特异筛查方案选择5个候选基因,分别为AZFa区(USP9Y、DBY),AZFb区(RBM1、SMCY),AZFc区(DAZ)。对实验中发现的SY84孤立缺失的病例进行验证,分析其引物序列区域的两个SNP(上游引物区域中SNP:5’+9insC和下游引物中的SNP:5’+15T>G(rs72609647))对检测结果的影响。结果两种筛查方案在423例患者均检测到30例相同的缺失,AZFc缺失21例;AZFb和AZFc共缺失为6例;AZFb缺失为1例;AZFa+b+c共缺失病例2例。STS位点筛查方案中有8例患者存在SY84位点的孤立缺失,进一步验证发现其是由于上游引物中的插入错配和下游引物序列中的SNP位点(rs72609647)变异导致其不能有效扩增导致。结论 STS筛查方案与基因特异筛查方案在Y染色体微缺失检测中,对于AZFb区和AZFc缺失检测中检测效率是一致的,但是在AZFa区缺失的检测中STS筛查方案存在假阳性。候选基因筛查方案较STS筛查方案更有利于临床推广应用。