目的研究b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)培养条件及细菌溶解产物制备工艺。方法比较Hib在传统培养基和改良培养基的生长情况,优化改良培养基在生物反应器中对Hib培养条件(p H值、温度、溶解氧等),研究最佳菌体细胞...目的研究b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)培养条件及细菌溶解产物制备工艺。方法比较Hib在传统培养基和改良培养基的生长情况,优化改良培养基在生物反应器中对Hib培养条件(p H值、温度、溶解氧等),研究最佳菌体细胞破碎方法及细菌溶解产物纯化制备工艺。结果改良培养基可代替传统培养基用于Hib的生产培养,且Hib在p H7.4、温度为36℃、溶解氧为25%的改良培养基中,生长迅速,菌体产量最高。高压匀浆破碎法的破碎效果明显优于超声波破碎法,破碎效果达到98%以上,纯化后的细菌溶解产物的多糖含量、总氮含量、蛋白质含量、核酸含量及细菌内毒素含量均符合《中华人民共和国药典》(三部)2010版中b型流感嗜血杆菌结合疫苗的质量标准。结论初步建立了b型流感嗜血杆菌培养及细菌溶解产物制备工艺。展开更多
目的建立AC群脑膜炎球菌与b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)联合疫苗(Men AC-Hib)多糖含量免疫速率比浊检测方法,并进行验证。方法采用免疫速率比浊法测定联合疫苗中A群、C群脑膜炎球菌及Hib多糖含量,绘制不同多糖...目的建立AC群脑膜炎球菌与b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)联合疫苗(Men AC-Hib)多糖含量免疫速率比浊检测方法,并进行验证。方法采用免疫速率比浊法测定联合疫苗中A群、C群脑膜炎球菌及Hib多糖含量,绘制不同多糖抗原含量的标准曲线,并对方法的检测低限、精密度、准确度和特异性进行验证。结果 3种不同多糖抗原浓度在2~8μg/ml之间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.98;建立的方法检测A群、C群脑膜炎球菌和Hib多糖的检测低限分别为0.847、0.043和0.507μg/ml;检测各组分多糖抗原含量的批内和批间变异系数均小于5%,平均回收率在88.30~104.40%之间;各组分特异性多糖抗体仅与各自多糖抗原反应,且各组分多糖抗原共同存在时无相互干扰。结论成功建立了准确、特异的AC群脑膜炎球菌与Hib联合疫苗的多糖含量检测方法。展开更多
目的 建立核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance,NMR）法测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）荚膜多糖中核糖含量的方法。方法 利用NMR技术中的氢核磁共振波谱（1H-NMR）的定量功能,对不同浓度的D-核糖进行...目的 建立核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance,NMR）法测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）荚膜多糖中核糖含量的方法。方法 利用NMR技术中的氢核磁共振波谱（1H-NMR）的定量功能,对不同浓度的D-核糖进行定量分析,验证该方法的精密度及准确度,并与传统化学方法进行比较。结果NMR法定量结果相对标准偏差（RSD）均小于1.0%,相对误差除最低浓度20 mmol/L为7.4%外,其余浓度均在1%-3%之间,不同浓度的样品回收率在97.2%-107%之间;化学法定量结果RSD在0.6%-7.9%之间,相对误差在3%-6.5%之间,不同浓度样品回收率在93.5%-105.3%之间;两种方法检测的3批Hib荚膜多糖中核糖含量无明显差别,均在《中国药典》三部（2010版）规定的320～410 mg/g之间。结论1H-NMR定量方法取样少,可直接定量,该方法精密度高、准确度高、重现性好,且不破坏多糖结构,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的核糖定量。展开更多
文摘通过单因素试验和Box-Behnken实验设计考察在蛋白去除过程中b型流感嗜血杆菌荚膜多糖浓度、Tween 80及(NH_4)_2SO_4含量对多糖回收率及蛋白残留含量的影响,建立回归模型.预测荚膜多糖质量浓度8.54mg/mL、Tween 80质量分数12.9%、(NH_4)_2SO_4质量分数28.12%为该方法的最佳参数组合,并通过实验进行验证其符合度分别达到93.9%和90.3%,符合度较高.研究通过实验设计(design of experiments,DOE)试验建立并优化了Hib荚膜多糖中杂蛋白的新方法,能够应用于实际的生产工艺中.
文摘目的 建立核磁共振波谱（nuclear magnetic resonance,NMR）法测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）荚膜多糖中核糖含量的方法。方法 利用NMR技术中的氢核磁共振波谱（1H-NMR）的定量功能,对不同浓度的D-核糖进行定量分析,验证该方法的精密度及准确度,并与传统化学方法进行比较。结果NMR法定量结果相对标准偏差（RSD）均小于1.0%,相对误差除最低浓度20 mmol/L为7.4%外,其余浓度均在1%-3%之间,不同浓度的样品回收率在97.2%-107%之间;化学法定量结果RSD在0.6%-7.9%之间,相对误差在3%-6.5%之间,不同浓度样品回收率在93.5%-105.3%之间;两种方法检测的3批Hib荚膜多糖中核糖含量无明显差别,均在《中国药典》三部（2010版）规定的320～410 mg/g之间。结论1H-NMR定量方法取样少,可直接定量,该方法精密度高、准确度高、重现性好,且不破坏多糖结构,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的核糖定量。
