血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物的分离和纯化

从机采浓缩血小板中 ,应用凝胶柱刀豆素A—琼脂糖、肝素—琼脂糖亲和层析与分子筛层析法 ,分离、纯化并得到血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物。血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物由α、β两个亚单位组成 ,糖蛋白Ⅱb可还原为糖蛋白Ⅱbα(分子量为 12 5kDa)和糖蛋白Ⅱbβ(分子量为 2 3kDa) ,而糖蛋白Ⅲa为一条多肽链 ,分子量为 95kDa ,还原后为 10 8kDa。经不同凝胶亲和层析、凝胶电泳分析 ,得到血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物 ,为进一步筛选单克隆抗体和进行药物研发打下了基础。

血小板Ⅱ_b-Ⅲ_a受体拮抗剂的研究进展

血小板糖蛋白Ⅱb-Ⅲa受体与纤维蛋白原分子的结合是血小板各种激活途径的共同通路。血小板糖蛋白Ⅱb-Ⅲa受体基因多态性对其功能会产生影响。体外循环是使血小板激活的强烈因素,血小板糖蛋白Ⅱb-Ⅲa受体基因多态性因此可能与体外循环的预后有关。本文着眼于血小板糖蛋白Ⅱb-Ⅲa受体拮抗剂的临床应用新进展进行综述。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在直接经皮冠状动脉介入治疗中的应用

斑块破裂导致血栓形成过程中，血小板首先在血管壁损伤部位黏附、激活，随后通过纤维蛋白原与血小板糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa受体结合，使相邻的血小板连在一起，这是血小板聚集的共同最后通路。血小板GPⅡb／Ⅲa受体拮抗剂通过阻断纤维蛋白原与GPⅡb／Ⅲa受体结合，抑制血小板聚集，被认为是目前最强的抗血小板聚集药物。

纤维蛋白原相关药物研究进展

纤维蛋白原是凝血过程、血栓形成过程中的重要物质。高纤维蛋白原是各种血栓性疾病重要危险因素,在临床中被认为是疾病状态的标志物。纤维蛋白原及血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体等是血栓性疾病药物研究的重要作用靶点,因此本文将综述纤维蛋白原影响血栓形成的机制及其相关药物研究进展。

创新一类GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂MT3001临床前研究

MT3001是根据人纤维蛋白原与血小板糖蛋白Ⅱb-Ⅲa结合位点筛选出的受体拮抗多肽药物,对其进行了临床前系统研究,以期为急性冠脉综合症的治疗提供具有我国自主知识产权的＂1.1＂类新药.按新药研发要求规范进行MT3001的药理药效学实验研究、药学研究、非临床药代动力学研究和GLP安全性评价实验.临床前研究结果发现,＂栓瑞通＂体外抑制血小板聚集,静脉给药1min起效、血小板聚集抑制率维持在95%以上、抑制多种动物冠状动脉、股动脉等的血栓形成;受体选择性最高,副作用少,停药后5min血小板功能迅速恢复,半衰期7～15min,主要在体内分解代谢而非排泄,多次给药后无蓄积,安全剂量高.综上,MT3001安全有效、易于生产、质量可控,已获得CFDA临床受理批件,即将进行一期临床研究.

血小板GPⅡb/Ⅲa 受体抑制剂(A辅剂)在血栓弹力图血小板聚集功能检测中的应用

目的评估以功能性纤维蛋白原(功纤杯)检测结果为标准的血栓弹力图(TEG)血小板聚集功能检测中在巴曲酶杯(A杯)内加入血小板GPⅡb/Ⅲa受体抑制剂(A辅剂)对检测结果的影响。方法从2019年12月~2020年5月在本院神经内科、心内科、综合科和康复科就诊、做TEG血小板聚集功能检测的患者中收集100(人)份全血标本,根据TEG测得的A杯血块强度(MA)值(mm)将血标本分为MA<25组(n=50)和MA≥25组(n=50),2组再各细分为A杯组(各自为n=50)、A辅剂组(在A杯中加入A辅剂)(各自为n=50)、功纤杯组(各自为n=50)3个亚组,各亚组均检测2次;比较各亚组间的血小板二磷酸腺苷(ADP)与花生四烯酸(AA)途径抑制率的线性相关(R2)、血小板抑制率的差异,以及3个亚组间ADP与AA途径药物疗效判读结果的一致性。结果 1)MA<25 mm组,血小板ADP及AA途径抑制率(%)A杯、A辅剂与功纤杯3个亚组分别为32.00±17.44 vs 30.19±17.44 vs 30.07±16.18,24.3±33.53 vs 22.53±30.9 vs 22.37±31.2(均为R2>0.975);2)MA≥25 mm组,血小板ADP及AA途径抑制率(%)A杯、A辅剂与功纤杯3个亚组分别为34.34±33.59 vs 18.45±24.42 vs 18.01±24.33,23.19±39.33 vs 8.48±21.75 vs 8.31±21.7(其中A杯组与A辅剂组比较均为R2<0.8,A辅剂组与功纤杯组均为R2>0.975);3)以功纤杯组检测结果为标准,A杯组与A辅剂组间ADP和AA途径药物疗效判读正确率分别为82%(41/50)vs 100%(50/50)、84%(42/50)vs 100%(50/50)(P<0.05),而A辅剂组与功纤杯组之间2种途径药物疗效判读结果一致(P>0.05)。结论在TEG的血小板聚集功能检测中A杯内添加A辅剂可以有效抑制A杯中非特异激活的血小板,真实反映纤维蛋白原的功能,故提高了其血小板抑制率检测结果的准确性。

血小板膜糖蛋白Ⅲa PLA1/PLA2基因多态性与冠心病的相关性研究进展

血小板的主要功能是当血管壁损伤后参与生理性止血,研究[1]发现异常血小板活化与冠心病的发生、发展、治疗和预后密切相关。纤维蛋白原受体是血小板表面最为丰富的整合素,它参与整个止血过程,是血小板激活、黏附和聚集的最后共同通路。纤维蛋白原受体主要由2个亚基组成,分别是糖蛋白Ⅱb（GPⅡb）和糖蛋白Ⅲa（GPⅢa）[2]。血小板GPⅡb/Ⅲa可以促使活化后的血小板与纤维蛋白原及相关的黏附蛋白结合,导致血小板聚集,从而在血栓形成发展过程中起重要作用。

急性冠脉综合征患者LOX-1、FIB、PAI-1、AT-Ⅲ表达与病情严重程度的关系分析

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、纤维蛋白原(FIB)、血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)表达与病情严重程度的相关性。方法随机选取该院2019年10月至2020年10月收治的117例ACS患者为观察组,同期选取117例体检健康者为对照组。检测LOX-1、FIB、PAI-1、AT-Ⅲ水平,分析其表达与病情严重程度的关系。结果观察组血清LOX-1、FIB、PAI-1水平高于对照组,血清AT-Ⅲ水平低于对照组(P<0.05);与轻度、中度病变患者比较,重度病变患者血清LOX-1、FIB、PAI-1水平升高,AT-Ⅲ水平降低(P<0.05)。相关性分析结果显示,ACS患者LOX-1、FIB、PAI-1水平与病情严重程度呈正相关,AT-Ⅲ水平与病情严重程度呈负相关(P<0.05)。LOX-1、FIB、PAI-1、AT-Ⅲ为ACS发生的影响因素(P<0.05)。结论LOX-1、FIB、PAI-1、AT-Ⅲ水平变化与ACS的发生、发展相关,其可有效评估疾病进展,有望成为ACS诊断及预后评估的生物标志物。

Fib及GPⅡb/Ⅲa基因多态性与家族聚集性LAA脑梗死的相关性

目的探讨纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)及血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP)Ⅱb/Ⅲa基因多态性与家族聚集性大动脉粥样硬化性(large‑artery atherosclerosis,LAA)脑梗死的关系。方法收集家族聚集性LAA脑梗死和散发性LAA脑梗死患者各25例,分别为家族组及散发组,选择25例非心脑血管疾病患者作为对照组。75例患者均提取基因组DNA,以基因组DNA为模板对待检序列进行PCR反应,纯化PCR产物,对PCR产物直接进行测序,确定有无纤维蛋白原及血小板GP IIb/IIIa基因多态性存在。结果Fib基因多态性在3组间差异无统计学意义(P>0.05),GP IIb位点在3组之间差异有统计学意义(P<0.05),GPⅢa位点在家族组、散发组、对照组3组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在家族聚集性LAA脑梗死中有GPⅡb基因多态性异常,而Fib及GPⅢa基因型无异常。

腔内隔绝术与药物结合治疗主动脉夹层动脉瘤的疗效及对炎症状态、D-D、FDP、AT-Ⅲ水平、预后的影响

目的观察腔内隔绝术与药物结合治疗主动脉夹层动脉瘤的疗效及对炎症状态、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原降解产物(FDP)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)水平、预后的影响。方法选取2016年8月—2019年7月我院收治的主动脉夹层动脉瘤病人157例,根据治疗方案不同分为研究组(79例)和对照组(78例)。对照组予以单纯药物保守治疗,研究组在对照组基础上联合腔内隔绝术治疗。统计研究组手术情况与两组治疗前后急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、日常生活能力(BI)评分、生活质量(GQOL-74)评分、血清炎症反应指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(INF-γ)]、肝肾功能指标[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)]、D-D、FDP、AT-Ⅲ水平及治疗后1年预后情况。结果研究组79例主动脉夹层动脉瘤病人腔内隔绝术均获成功,术中即刻行主动脉造影未见支架变形与移位,术中和术后均未输血治疗。研究组治疗1个月后APACHEⅡ评分低于对照组(P<0.05),BI、GQOL-74评分高于对照组(P<0.05);研究组治疗1个月后血清AST、ALT、Cr、BUN、IL-1β、TNF-α、INF-γ、D-D、FDP水平低于对照组(P<0.05),AT-Ⅲ水平高于对照组(P<0.05)。研究组治疗后1年病死率、再次手术或介入治疗发生率均低于对照组(P<0.05)。结论腔内隔绝术与药物结合治疗主动脉夹层动脉瘤,可调节病人血清D-D、FDP、AT-Ⅲ表达,减轻炎症状态,促进病情恢复,改善肝肾功能及预后。

KD患儿急性期h-FABP、PAC-1表达与冠状动脉受损的关系

目的:探讨川崎病(KD)患儿急性期心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa纤维蛋白原受体(PAC-1)表达与冠状动脉受损的关系。方法:选取2017年1月—2019年8月治疗的KD患儿101例(观察组),其中有冠状动脉损伤者48例,同时选取健康儿童60名作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清h-FABP水平,采用流式细胞仪检测PAC-1表达。结果:观察组血清h-FABP、PAC-1表达水平分别为(19.94±4.03)ng/mL和(6.44±1.12)%,明显高于对照组(均P<0.05);观察组有冠状动脉损伤患儿血清h-FABP、PAC-1表达水平分别为(20.12±3.32)ng/mL和(6.94±1.06)%,明显高于无冠状动脉损伤患儿(均P<0.05);观察组重度冠状动脉损伤患儿血清h-FABP、PAC-1表达水平分别为(18.22±2.19)ng/mL和(6.22±1.00)%,明显高于轻中度患儿(均P<0.05);观察组血清h-FABP、PAC-1与D-D呈正相关性(r=0.433和0.501,均P<0.05);血清h-FABP、PAC-1诊断有无冠状动脉损伤的ROC曲线下面积分别为0.801和0.779(P<0.05),截断值分别为18.50 ng/mL和6.10%,灵敏性分别为80.50%和77.80%,特异性分别为78.00%和70.00%。结论:KD患儿急性期h-FABP、PAC-1表达升高,与患儿冠状动脉受损有关。

创伤性四肢骨折患者血清FIB、FDP、D-D和TAT水平与血栓形成的关系

目的探究创伤性四肢骨折患者血清纤维蛋白原(FIB)、纤维蛋白降解产物(FDP)、D-二聚体(D-D)和凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)水平与血栓形成的关系,为预防创伤性四肢骨折患者血栓形成提供参考。方法采集2018年2月至2020年1月收治的创伤性四肢骨折并发深静脉血栓46例作为DVT组,选取同期收治创伤性四肢骨折未发生DVT 46例作为非DVT组,并选取同期健康体检者46例作为对照组,均留取完整血样,DVT组、非DVT组均检测术前、术后1、3 d FIB、FDP、D-D水平及凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、TAT的变化,对照组仅入院时筛查以上指标的变化,分析创伤性四肢骨折上述指标与血栓形成的关系,受试者特征工作曲线(ROC)分析各参数预测创伤性骨折血栓形成的价值。结果 FIB、FDP、D-D、TAT比较:DVT组>非DVT组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05);DVT组术前、术后1、3 d FIB、FDP、D-D、TAT均高于非DVT(差异有统计学意义P<0.05);术前FIB、FDP、D-D、TAT均为创伤性四肢骨折患者血栓形成影响因素(P<0.05);D-D单独预测血栓形成效能最高,敏感度、特异性分别为73.17%、100.00%,其次为FDP、TAT、FIB,四者联合预测效能单独诊断,敏感度、特异性分别为97.56%、100.00%。结论创伤性四肢骨折患者FIB、FDP、D-D、TAT均较正常人高,出现DVT患者上述指标浓度高于非DVT患者,D-D预测创伤性四肢骨折血栓形成效能最高,四者联合可提高DVT早期检出率。

BRL37344对大鼠心肌成纤维细胞磷脂酰肌醇（-3）激酶-蛋白激酶B信号通路的影响

目的 探讨β3-肾上腺素能受体（β3-adrenergic receptor,β3-AR）激动剂BRL37344是否通过细胞内磷脂酰肌醇（-3）激酶-蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt）信号传导途径促进大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFbs）增殖及胶原纤维增生.方法 哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室无菌条件下剪取新生1～3 d的Wistar大鼠心脏,采用酶消化法、差速贴壁法获取CFbs.随机数字法分为5组：①空白组：不给予任何药物干预.②BRL组：给予BRL37344孵育.③LY组：给予LY294002（PI3K抑制剂）预孵育1 h后联合BRL37344共同孵育.④Akt-Ⅰ组：给予Akt-Ⅰ（Akt抑制剂）预孵育1 h后联合BRL37344共同孵育.⑤L-A组：LY294002和Akt-Ⅰ预孵育1 h后联合BRL37344共同孵育.通过MTT比色法观察细胞的增殖情况,RT-PCR法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况.组间进行单因素方差分析,组间比较采用Tukey检验.以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CFbs中存在β3-AR.②与BRL组比较,LY组和Akt-Ⅰ组增殖减低（P＜0.01）;L-A组较LY组和Akt-Ⅰ组增殖减低更明显（P＜0.01）.③与空白组比较,BRL组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达均明显增加,给药48 h增加最显著.选取48 h点为作用时间点,与BRL组比较,LY组、Akt-Ⅰ组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达减低,L-A组较LY组和Akt-Ⅰ组表达减低更显著（P＜0.01）.结论 BRL37344通过PI3K-Akt信号传导途径促进心肌成纤维细胞增殖和Ⅰ,Ⅲ型胶原表达增加.

2型糖尿病血小板活化与血糖变化的相关分析

目的探讨糖尿病患者糖化血红蛋白水平与血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物纤维蛋白原受体(PAC-1)和P选择素(CD 62P)的关系及其临床意义。方法采用流式细胞仪三色荧光标记技术来测定45例40岁以下初发的2型糖尿病患者及20名健康对照组的PAC-1、CD 62P的表达率和糖化血红蛋白A1(GHbA1)比率,同时进行治疗前后及与对照组比较。结果初发的2型糖尿病组PAC-1(12.38±3.15%)、CD 62P(8.74±2.01%)、GHbA1(9.53±2.73%),其表达分别显著高于健康对照组的2.67±1.52%(P<0.001)、1.07±1.41%(P<0.001)、6.21±1.05%(P<0.001)。降糖治疗6月后糖尿病组血糖达标,PAC-1(7.38±3.25%)、CD 62P(6.26±3.01%)、GHbA1(6.33±1.46%),与治疗前比较有显著差异(P<0.001)。结论2型糖尿病血小板活化与糖化血红蛋白水平密切相关。严格控制血糖可以抑制血小板活化,预防血栓性疾病的发生。

中老年外伤性人工髋关节置换术后深静脉血栓的早期实验诊断研究

目的探讨中老年外伤性人工髋关节置换术后并发下肢深静脉血栓(deep vein thrombosis,DVT)早期诊断的血液学指标,对其早期诊断的临床价值。方法选取华北理工大学附属骨科医院自2010年1月至2015年2月,中老年外伤性人工髋关节置换术后并发下肢深静脉血栓形成150例为病例组,选取同期没有下肢深静脉血栓形成的150例为对照组。采集空腹静脉血分别采用放射免疫分析法检测125I纤维蛋白原(iodine 125 labeled focused ion beam,125IFIB)和自动血凝仪检测D-二聚体(D-dimer,DD),酶联免疫吸附法检测血浆进行血浆纤维蛋白原(focused ion beam,FIB)、D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ(antithrombinⅢ,AT-Ⅲ)、血栓前体蛋白(thrombus precursor protein,Tp P)、凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin antithrombin complexes,TAT)检测。结果术后血浆中的125I纤维蛋白原和D-二聚体检测结果表明,血栓组明显升高,血浆中的125I纤维蛋白原和D-二聚体术后值明显高于术前值(P<0.05)。在用ELISA方法检测的指标中血浆纤维蛋白原、D-二聚体、血栓前体蛋白、凝血酶-抗凝血酶复合物和抗凝血酶Ⅲ的曲线下面积分别为88.1%、86.4%、67.4%、70.0%和64.1%。Logistic回归分析结果表明,纤维蛋白原和D-二聚体OR值分别为13.294和7.784(P<0.05)。结论血浆纤维蛋白原和D-二聚体在对人工髋关节置换术后并发深静脉血栓患者早期诊断中价值较高。

VerifyNow对比血小板聚集仪分析氯吡格雷药效

目的比较检测氯吡格雷抗血小板功能的2种实验方法的异同。方法随机收集207例门诊和住院急性冠状动脉综合征患者,其服用氯吡格雷后,抽取静脉血,同时进行光比浊法二磷酸腺苷诱导的血小板聚集实验与Ver-ifyNow抗血小板治疗监测系统实验,并进行分析。结果血小板聚集仪测得的血小板聚集率(PAgP)156例在40%～80%,占75.4%,25例<40%,占12.1%,26例>80%,占12.6%。VerifyNow分析P2Y_(12)受体的化学反应数值(PRU)126例在240～350,占60.9%,50例PRU<240,占24.2%,31例PRU>350,占15.0%。PAgP与PRU呈正相关,PAgP与抑制血小板聚集率(INHI)呈负相关,PAgP+INHI趋近于一个定值。结论 VerifyNow抗血小板治疗监测系统可作为氯吡格雷药效监测的良好实验方法 。

氯吡格雷临床疗效评价及基因影响因素研究

氯吡格雷（clopidogrel）属噻吩并吡啶类药物,是一种前体药物.口服吸收后部分经肝细胞色素（P450）酶代谢,形成活性产物,与血小板二磷酸腺苷受体（P2Y12）相互作用,不可逆阻断血小板二磷酸腺苷（ADP）与P2Y12的结合,使ADP对腺苷酸环化酶的抑制作用减弱,进一步促进扩血管物质激活磷酸蛋白的磷酸化,从而降低纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa的活化,达到抑制血小板聚集的目的.

盐酸替罗非班对活动平板运动试验ST段抬高患者TIMI血流分级的影响

目的:观察盐酸替罗非班对平板运动试验中ST段抬高患者TIMI血流分级的影响。方法:将平板运动试验ST段抬高患者35例按就诊顺序随机双盲分为受试组(n=18)和对照组(n=17),受试组在对照组给予阿司匹林、氯吡格雷、肝素等基础治疗上加用盐酸替罗非班,所有患者疗程结束后均行选择性冠状动脉血管造影(SCA)检查,观察两组患者治疗后TIMI血流情况。结果:与对照组相比,受试组应用盐酸替罗非班后TIMI血流分级提高,达2级血流者比例高于对照组(44.44%比11.76%,P<0.05);受试组完全闭塞者比例明显低于对照组(5.56%比35.29%,P<0.05)。结论:盐酸替罗非班可以改善平板运动试验中ST段抬高患者TIMI血流分级。