NR2B反义寡核苷酸对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体与κ受体mRNA表达的影响

目的观察NR2B反义寡核苷酸（NR2B antisense oligonucleotide，ANR2B）对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体与κ受体表达的影响，探讨N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-asparticacid，NMDA）受体的NR2B亚基与阿片斗受体与κ受体在介导吗啡依赖和耐受过程中的相互作用。方法雄性SD大鼠，体重230g-270g。鞘内埋管成功大鼠40只，按随机数字表法分为5组，每组8只。吗啡皮下注射首日10mg／kg，每日2次，隔日每次增加10mg／kg，至第6天末次注射50mg／kg，建立吗啡依赖模型，以纳洛酮4mg／kg单次腹腔注射建立吗啡依赖催促戒断模型，观察纳洛酮催促戒断症状并评价造模是否成功。分为吗啡依赖组（A组）；相应时间点皮下注射等量生理盐水为空白对照组（B组）；末次注射吗啡后4h腹腔注射盐酸纳洛酮4mg／kg激发戒断症状为吗啡戒断组（C组）；在皮下注射吗啡的同时鞘内注射15nmolANR2B为吗啡＋ANR2B组（D组）；在纳洛酮激发前30min鞘内注射15nmolANR2B为戒断＋ANR2B组（E组）。应用RT-PCR检测吗啡依赖与戒断大鼠脊髓和脑干μ受体与κ受体mRNA表达。结果①吗啡依赖大鼠脊髓和脑干NR2BmRNA表达（0．965±0．012；0．958±0．020）较对照组（0．763±0．031）明显上调，NR2B反义寡核苷酸使其表达明显下调（0．786±0．011）。②吗啡戒断症状主要表现为湿狗样摇体、激惹、齿颤、眼睑下垂、腹泻等。鞘内注射NR2B反义寡核昔酸则明显减轻戒断症状的总评分（32±2，22±3）。③吗啡依赖大鼠脊髓和脑干中斗受体mRNA表达（0．955±0．021，0．946±0．013）较对照组升高有统计学意义。鞘内注射ANR2B则明显降低吗啡依赖大鼠脊髓和脑干中¨受体mRNA的表达（0．801±0．013；0．824±0．021）。纳洛酮激发戒断症状后1h，脊髓和脑干中“受体mRNA的表达较吗啡依赖组明显下降。激发前30rain鞘内注射ANR2B，脊髓和脑干中斗受体mRNA表达与戒断组比较变化无统计学意义。④吗啡依赖大鼠脊髓和脑干中κ受体mRNA表达（0．735±0．025；0．757±0．010）较对照组（0．974±0．016；0．982±0．013）降低有统计学意义；同时鞘内注射ANR2B则显著增加脊髓和脑干中κ受体mRNA的表达（0．875±0．012；0．854±0．016）；纳洛酮激发戒断症状后1h，脊髓和脑干中κ受体mRNA的表达较吗啡依赖组明显增高；激发前30min鞘内注射ANR2B，脊髓和脑干中κ受体mRNA表达与戒断组比较变化无统计学意义。各组中β-aetin表达量差异无统计学意义。结论脊髓和脑干中μ受体与κ受体表达的变化在吗啡依赖与戒断反应中发挥了重要作用。鞘内注射NR2B反义寡核苷酸通过有效逆转吗啡依赖与戒断大鼠脊髓和脑干中斗受体与κ受体表达的变化趋势，从而发挥其抑制吗啡依赖与减轻戒断症状的作用。

RelA反义寡核苷酸调节胰腺癌细胞对阿霉素敏感性的效果及机制

目的探讨转染核因子-κBp65(RelA)反义寡核苷酸(RelA AsODN)调节胰腺癌细胞对阿霉素敏感性的效果及机制。方法采用RelA反义寡核苷酸和对照序列转染胰腺癌细胞株Capan-2。MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测RelA AsODN作用后凋亡相关基因bcl-xL表达变化。结果 10μg/mL阿霉素单独及其与RelA AsODN联合作用24 h后的细胞存活率分别为60.9%和43.8%,凋亡率分别为6.77%和17.46%,P均<0.01。RelA AsODN作用后bcl-xL mRNA表达下降。结论 RelA AsODN可增加胰腺癌细胞Capan-2对阿霉素的敏感性,下调bcl-xL mRNA表达可能是其作用机制之一。

反义miR-19a／b抑制LN229人脑胶质瘤生长的体内实验研究

目的探讨敲低miR-19a／b表达抑制裸鼠荷人脑胶质瘤细胞LN229移植瘤生长的疗效和机制。方法原位注射miR-19a／b反义寡聚核苷酸（AS—miR-19a／b）治疗裸鼠皮下荷LN229人脑胶质瘤模型。Real—time PCR方法鉴定治疗后miR-19a／b表达水平，采用HE染色和免疫组织化学染色检测评价治疗后肿瘤增殖、凋亡等生物学性状及核心信号通路成员相关指标的变化，包括PTEN、AKT、P—AKT等；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果AS—miR-19a／b治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列组，差异有统计学意义（F=19．221，P〈0．05）；其miR-19a／b表达下调为对照组的0．187±0．025；组织病理学检测表明AS—miR-19a／b治疗后肿瘤恶性表型有所逆转。结论以miR-19a／b作为靶点治疗异种移植LN229人脑胶质瘤效果显著，miR-19a／b可作为人脑胶质瘤靶向治疗的侯选靶点。