目的建立一种b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗中游离多糖含量新的检测方法。方法分别对标准蛋白溶液、多糖溶液和标加衍生多糖(AH-PRP)的结合物原液进行脱氧胆酸钠(NaDC)酸沉淀处理,观察该方法对蛋白和多...目的建立一种b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗中游离多糖含量新的检测方法。方法分别对标准蛋白溶液、多糖溶液和标加衍生多糖(AH-PRP)的结合物原液进行脱氧胆酸钠(NaDC)酸沉淀处理,观察该方法对蛋白和多糖的沉淀效果。分别采用NaDC酸沉淀法和乙醇分步沉淀法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量。结果不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC酸沉淀法处理后,沉淀中蛋白的回收率在96%～99%之间;不同浓度的多糖溶液经NaDC酸沉淀法处理后,上清中的多糖回收率在99%～106%之间;该方法对结合物中的游离多糖能起到很好的分离效果;两种方法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量差异有统计学意义(P<0.01)。结论 NaDC酸沉淀法能专一性地沉淀蛋白物质,对游离多糖无沉淀作用,该方法具有良好的重复性和准确性,可用于测定Hib结合疫苗中的游离多糖含量。展开更多
目的评价国产b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗PRP-TT的加强免疫效果。方法分别用安儿宝和呵儿贝两种Hib结合疫苗,对在广西柳州市常住儿童进行3、4、5月龄3针免疫,1年后,进行第4剂加强免疫。分别于3针免疫1...目的评价国产b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗PRP-TT的加强免疫效果。方法分别用安儿宝和呵儿贝两种Hib结合疫苗,对在广西柳州市常住儿童进行3、4、5月龄3针免疫,1年后,进行第4剂加强免疫。分别于3针免疫1年后和加强免疫1个月后采血,分离血清,采用ELISA和体外杀菌实验(Serum bactericidal assay,SBA)分别检测免疫前后血清IgG抗体浓度和加强免疫后SBA抗体滴度。结果安儿宝和呵儿贝疫苗3针免疫1年后,血清IgG抗体几何平均数浓度(Geometric mean concentrations,GMCs)分别为3.17μg/ml和3.00μg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05);其中,IgG抗体浓度在1.00μg/ml以上的血清所占的比例分别为79%(62/78)和76%(115/152),二者差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后1个月,两种疫苗免疫血清中IgG抗体GMCs分别为71.33μg/ml和65.35μg/ml,二者差异无统计学意义(P>0.05);IgG抗体浓度均能100%达1.00μg/ml以上。两种疫苗加强免疫后的血清IgG抗体浓度与各自加强免疫前比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。加强免疫后,两种疫苗免疫血清的SBA抗体滴度分别为5 263和4 637,二者差异无统计学意义(P>0.05)。两种疫苗免疫后血清IgG抗体浓度和SBA抗体滴度均具有相关性(r值分别为0.696和0.689,P<0.05)。结论 3针免疫1年后,两种疫苗免疫血清中IgG抗体仍保持较高的水平,第4剂加强免疫后,抗体水平迅速显著升高,100%达1.00μg/ml以上,且具有有效的体外杀菌功能。展开更多
目的 通过强制降解试验观察冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus in fluenzae type b, Hib)结合疫苗在高温、高湿、强光照射下的稳定性,为疫苗生产工艺、包装材料和贮存条件的确定提供科学依据.方法 分别采用40℃温度、(75±5)%相对湿...目的 通过强制降解试验观察冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus in fluenzae type b, Hib)结合疫苗在高温、高湿、强光照射下的稳定性,为疫苗生产工艺、包装材料和贮存条件的确定提供科学依据.方法 分别采用40℃温度、(75±5)%相对湿度、(4 500±500)lx光照处理冻干Hib结合疫苗,取样,按中国药典2015年版三部的要求进行疫苗的全部项目检测.结果 冻干Hib疫苗经40℃处理10d,水分由2.0%上升至2.9%,多糖分子大小(分配系数<0.2的洗脱液回收率)由94%下降至85%,但两者仍分别符合≤3.0%和>60%的质量标准;而高分子结合物含量由87%降至75%,已不符合≥80%的质量标准.(75±5)%相对湿度和(4 500±500) lx光照处理10d对疫苗的影响不明显,疫苗质量指标仍符合规定.结论 高温是影响冻干Hib结合疫苗稳定性的主要因素.展开更多
目的 建立测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus in fluenzae type b,Hib）结合疫苗游离多糖的脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）沉淀法.方法 在一定的酸性条件下,用1％DOC沉淀分离Hib结合疫苗中的结合多糖和游离多糖,测定上清和沉淀...目的 建立测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus in fluenzae type b,Hib）结合疫苗游离多糖的脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）沉淀法.方法 在一定的酸性条件下,用1％DOC沉淀分离Hib结合疫苗中的结合多糖和游离多糖,测定上清和沉淀的多糖含量,并对该法进行验证.结果 DOC沉淀法的标准曲线具有可靠的线性,决定系数＞0.999.该法的准确性和精密度良好,多糖加样回收率为103％～108％,相对标准偏差均＜10％.结论 建立的DOC沉淀法可用于Hib结合疫苗中的游离多糖测定.展开更多
目的分析b型流感嗜血杆菌(Type b Haemophilus influenzae,Hib)不同培养基发酵液中蛋白质、核酸含量及不同培养基添加物对发酵产物的影响,优化Hib发酵培养基。方法设计不同配方的Hib摇瓶培养基,经摇瓶培养,检测发酵液上清中的蛋白质及...目的分析b型流感嗜血杆菌(Type b Haemophilus influenzae,Hib)不同培养基发酵液中蛋白质、核酸含量及不同培养基添加物对发酵产物的影响,优化Hib发酵培养基。方法设计不同配方的Hib摇瓶培养基,经摇瓶培养,检测发酵液上清中的蛋白质及核酸含量,选择合适的基础培养基,并在此基础上进行发酵罐培养,检测不同添加物(磷酸盐、钠盐、金属离子等)对Hib多糖复合物收获量、菌体形态及发酵液颜色的影响,并发酵3批,进一步检测多糖复合物中蛋白质和核酸的含量。结果培养基介质不同,其发酵上清液中的蛋白质和核酸含量也不同,2号培养基(主要成分为酸水解酪素粉和酵母浸粉)发酵液蛋白质和核酸含量较低且稳定;培养基中不同添加物对Hib菌体形态、发酵液颜色及多糖复合物的收获量、质量和性状均产生不同的影响,其中b培养基发酵液菌体形态、多糖复合物收获量及质量均较好;3批发酵培养液中分别约有7%～10%的蛋白质和34%～42%的核酸被沉淀至多糖复合物中。结论选择2号培养基为Hib基础培养基,b培养基为发酵培养基,本实验为Hib疫苗培养基的优化和多糖抗原的纯化提供了实验依据。展开更多
文摘目的建立一种b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗中游离多糖含量新的检测方法。方法分别对标准蛋白溶液、多糖溶液和标加衍生多糖(AH-PRP)的结合物原液进行脱氧胆酸钠(NaDC)酸沉淀处理,观察该方法对蛋白和多糖的沉淀效果。分别采用NaDC酸沉淀法和乙醇分步沉淀法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量。结果不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC酸沉淀法处理后,沉淀中蛋白的回收率在96%～99%之间;不同浓度的多糖溶液经NaDC酸沉淀法处理后,上清中的多糖回收率在99%～106%之间;该方法对结合物中的游离多糖能起到很好的分离效果;两种方法测定结合疫苗原液中的游离多糖含量差异有统计学意义(P<0.01)。结论 NaDC酸沉淀法能专一性地沉淀蛋白物质,对游离多糖无沉淀作用,该方法具有良好的重复性和准确性,可用于测定Hib结合疫苗中的游离多糖含量。
文摘目的 建立测定b型流感嗜血杆菌（Haemophilus in fluenzae type b,Hib）结合疫苗游离多糖的脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）沉淀法.方法 在一定的酸性条件下,用1％DOC沉淀分离Hib结合疫苗中的结合多糖和游离多糖,测定上清和沉淀的多糖含量,并对该法进行验证.结果 DOC沉淀法的标准曲线具有可靠的线性,决定系数＞0.999.该法的准确性和精密度良好,多糖加样回收率为103％～108％,相对标准偏差均＜10％.结论 建立的DOC沉淀法可用于Hib结合疫苗中的游离多糖测定.
文摘目的分析b型流感嗜血杆菌(Type b Haemophilus influenzae,Hib)不同培养基发酵液中蛋白质、核酸含量及不同培养基添加物对发酵产物的影响,优化Hib发酵培养基。方法设计不同配方的Hib摇瓶培养基,经摇瓶培养,检测发酵液上清中的蛋白质及核酸含量,选择合适的基础培养基,并在此基础上进行发酵罐培养,检测不同添加物(磷酸盐、钠盐、金属离子等)对Hib多糖复合物收获量、菌体形态及发酵液颜色的影响,并发酵3批,进一步检测多糖复合物中蛋白质和核酸的含量。结果培养基介质不同,其发酵上清液中的蛋白质和核酸含量也不同,2号培养基(主要成分为酸水解酪素粉和酵母浸粉)发酵液蛋白质和核酸含量较低且稳定;培养基中不同添加物对Hib菌体形态、发酵液颜色及多糖复合物的收获量、质量和性状均产生不同的影响,其中b培养基发酵液菌体形态、多糖复合物收获量及质量均较好;3批发酵培养液中分别约有7%～10%的蛋白质和34%～42%的核酸被沉淀至多糖复合物中。结论选择2号培养基为Hib基础培养基,b培养基为发酵培养基,本实验为Hib疫苗培养基的优化和多糖抗原的纯化提供了实验依据。
