猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立

目的建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法。方法以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的最佳实验条件。用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点。并且将检测结果与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果进行了比较。结果建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果表明本方法与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题。检测结果与美国实验室BV抗体检测结果的符合率达85%。

抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊对病毒性心肌炎小鼠血清CK、LDH、cTnI的影响

目的:探讨抗柯萨奇病毒B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN)对于阿霉素(ADM)诱导小鼠心肌损伤模型的保护作用。方法:将小鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、K-CoxB-JN低剂量组、K-CoxB-JN中剂量组、K-CoxB-JN高剂量组,观察K-CoxB-JN对心肌组织病理、小鼠心脾指数、小鼠血清血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTn)I的影响。结果:K-CoxB-JN低、中、高剂量组炎性和坏死病理改变明显轻于模型组;K-CoxB-JN中、高剂量组的心脏指数与模型组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01),K-CoxB-JN中剂量组的小鼠脾脏指数与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05);K-CoxB-JN低、中、高剂量组CK和cTnI的值均降低,与模型组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01),K-CoxB-JN中剂量组LDH的值降低,与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:K-CoxB-JN对心肌损伤小鼠血清CK、LDH、cTnI有抑制作用,K-CoxB-JN对心肌具有保护作用。

猴B病毒抗体及B病毒相关抗体ELISA检测结果比较

采用以人单纯疱疹病毒（ＨＳＶ１）为抗原的ＥＬＩＳＡ法在国内外测得相同猕猴血清样本中的Ｂ病毒相关抗体阳性率分别为６５％（１３／２０）和７０％（１４／２０）。相同标本在国外测得Ｂ病毒抗体阳性率为８５％（１７／２０）。另有７０份经ＥＬＩＳＡ和酶免疫试验测得Ｂ病毒相关抗体为阴性的猕猴血清在国外检出Ｂ病毒抗体阳性者有７份。

黄芪注射液治疗柯萨奇B病毒阳性心肌炎20例

黄芪注射液治疗柯萨奇Ｂ病毒阳性心肌炎２０例阮汉权，张秀玲，彭应心，黄希正１９９３年３月～１９９６年５月，我们用核素心肌灌注显像的方法对黄芪注射液治疗柯萨奇Ｂ病毒阳性心肌炎的临床疗效进行了观察，现报告如下。临床资料４０例住院患者均符合急性病毒性心肌炎诊...

茎尖培养法脱除菊花B病毒的研究

以感染菊花B病毒(CVB)的菊花品种‘寒小白’为试材,分别切取长度小于0.3 mm、0.3～0.7 mm和0.7～1.0 mm的茎尖接种于MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的培养基中,以及第1次切取0.7～1.0 mm菊花茎尖接种于MS培养基中,培养后再切取0.3～0.7 mm的菊花茎尖接种于MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA培养基中(二次茎尖培养法),结合RT-PCR方法鉴定脱毒效果,研究茎尖长度及培养方式对茎尖诱导分化成活率和脱毒效果的影响。结果表明:茎尖大小与茎尖诱导成活率成正比,与脱毒效果成反比,即茎尖长度小于0.3 mm时,成活率最低,仅为6%,而脱毒率最高,可达66.67%;当茎尖长度为0.7～1.0 mm时,茎尖成活率最高,为90%,脱毒率最低,仅为6.67%。在一次茎尖培养法的基础上,运用二次茎尖培养法对CVB进行脱毒培养,既保证了较高的成活率(60%),又保证了较高的脱毒率(43.33%)。

RT-PCR检测菊花B病毒的研究

根据菊花B病毒 (CVB)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物 ,以感病组织和健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,结果从感病组织中扩增出与预期的 776bp大小一致的目标片段 ,而健康组织无此扩增产物 ;将PCR产物插入pGEM -T载体克隆并测序 ,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到 85 % ;将感病组织总RNA以 10x梯度稀释成不同浓度 ,测出RT -PCR检测CVB的灵敏度为 10 -4x ;PCR产物克隆作为RT -PCR反应的阳性对照 ,解决了毒源保存和传播的问题 ,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT

菊花B病毒外壳蛋白互作蛋白的筛选

采用PCR扩增菊花B病毒(CVB)外壳蛋白基因的开放阅读框,构建酵母双杂交系统所需的诱饵表达载体pGBKT7-CVBCP,测序验证后转化Y2HGold酵母菌。将酵母菌Y187/pGADT7-cDNA与酵母菌Y2HGold/pGBKT7-CVBCP进行交配转化,在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-Gal平板上筛选蓝色阳性克隆并测序pGADT7-cDNA的插入片段。结果表明:诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用,且对报告基因无自激活作用。筛选菊花cDNA文库初步得到了与CVB外壳蛋白相互作用的E3泛素连接酶ARIADNE-like蛋白和ATP结合蛋白,为进一步研究CVB外壳蛋白与寄主的互作机制奠定了基础。

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的 建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法 采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果 HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论 建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方提取物对心肌保护作用的实验研究

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方醇提物(K-CoxBJN-C)对阿霉素(ADR)诱导小鼠心肌损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取肢体Ⅱ导联心电图正常的120只昆明小鼠随机分为6组,即正常对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、水提物组(灌胃K-CoxBJN-S,5 g.kg-1)、复方65%醇提物高、中、低剂量治疗组(分别灌胃K-CoxBJN-C 1.22,.4,4.8 g.kg-1),给药1次/d,连续14 d;同时除正常对照组(隔日腹腔注射NS 3mg.kg-1)外,各组小鼠隔日腹腔注射阿霉素3 mg.kg-1,共7次,建立ADR心肌损伤模型。动态观察小鼠症状及体征、体质量变化、死亡率;末次注射ADR 24 h后取血,比色法测定血清中CK、LDH的活性;取心脏、脾、胸腺计算重量指数;取心脏观察心肌病理改变。结果 K-CoxBJN-C能显著降低小鼠血清中CK、LDH的活性(P<0.05),增加心脏、脾、胸腺重量指数,改善小鼠心功能,减少死亡率,其中醇提物高、中剂量组效果好于水煎组。结论 K-CoxBJN-C可明显减轻ADR所致小鼠的心肌损伤,其作用机制可能与减轻免疫炎性反应有关。

中药治疗柯萨奇B病毒性心肌炎的研究进展

综述了近年关于中医药治疗柯萨奇B病毒性心肌炎的实验及临床研究。研究包括单味中药(以黄芪、西洋参、人参等为主)、中药复方(中药传统方剂及自拟方)治疗本病的情况。实验研究方面从保护心肌、抑制病毒复制和免疫治疗三方面进行较深入的研究,临床研究方面从该病的分期入手论述了中药的显著疗效,同时也指出了存在的问题及今后研究方向。

猴B病毒gG蛋白的主要特性与B细胞表位预测

为了探讨猴B病毒gG基因编码蛋白作为疫苗候选抗原和ELISA试剂盒研制所需检测用抗原的可能性,本研究从Genbank数据库中获得猴B病毒gG基因序列,采用IEDB、SOSUI等在线分析系统对该基因序列的编码区进行生物信息学分析,并预测gG基因编码蛋白的理化性质、可溶性和表面可及性、跨膜区、抗原表位以及线性B细胞表位等.分析结果表明,B病毒gG蛋白为膜蛋白,具有一个跨膜螺旋,以及较为丰富的β-转角,为可溶性蛋白,蛋白序列中具有多个抗原表位和优势线性B细胞表位,有作为猴B病毒疫苗候选抗原和抗体诊断用抗原的潜力.

B病毒感染的预防和治疗方法

B病毒是一种P4级传染性病原,能引起人脑脊髓炎,其天然宿主为猕猴,B病毒侵染猕猴后无症状或症状轻微,但它却能致人死亡。人被B病毒感染途径主要包括被动物咬伤、抓伤或被B病毒污染过的材料感染,人被BV感染后,若及时采取预防和治疗措施能提高生存机率。本文综述BV预防和治疗方法。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂抗CVB_3作用

目的通过体内外实验观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊K-CoXB-JN复方新制剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用。方法体外实验用1000 TCID50的CVB3感染心肌细胞后,分别加入不同浓度的K-CoXB-JN复方新制剂和利巴韦林,并设定正常对照组和模型对照组,当细胞病变达到75%后,测定细胞上清液中肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;体内实验用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoXB-JN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水连续灌胃14 d,记录小鼠死亡数,观察药物对小鼠的死亡保护情况。结果 K-CoXB-JN复方新制剂可降低CVB3感染的心肌细胞培养上清液中CK、AST、LDH含量,降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率,给药组和模型对照组相比较P<0.05。结论 K-CoXB-JN复方新制剂对CVB3感染的心肌细胞和病毒性心肌炎小鼠具有保护作用。

柯萨奇B病毒性心肌炎、扩张型心肌病中病毒持续感染及中药干预的研究

目的 :研究柯萨奇B病毒性心肌炎、扩张型心肌病中病毒持续感染与中药干预的相关性。方法 :建立急慢性病毒性心肌炎动物模型 ,用定性及定量多聚酶链反应测脾脏白细胞中以及心肌匀浆中的柯萨奇B病毒核糖核酸 (CVB -RNA) ;对急性病毒性心肌炎及扩张型心肌病的临床病例 ,用定性的方法定期检测外周血白细胞中CVB -RNA ,观察其病毒持续状态以及用原位PCR法检测扩张型心肌病心肌活检标本中CVB -RNA ,以明确病毒持续感染与扩张型心肌病的意义 ;观察苦参中抗柯萨奇B病毒的有效成分(SFA)干预的临床价值。结果 :1 8例扩张型心肌病病人有 6例病人的外周血白细胞中CVB -RNA (+) ,占 33 .3 % ,有的已持续 3年以上 ,其中 1 3例用原位PCR检测 ,有 6例心肌细胞中CVB -RNA(+) ,占 46 .2 % ,对慢性 (2 70d)病毒性心肌炎动物模型脾脏白细胞及心肌匀浆中定量检测 ,结果均证明有持续感染的存在 ,用SFA治疗后 ,在心肌匀浆中CVB -RNA的清除率为 92 .77% ,脾脏白细胞中CVB -RNA的清除率为 89.0 4 %。结论 :扩张型心肌病与病毒性心肌炎有相关性 ,扩张型心肌病与病毒持续感染有关 ,SFA能清除CVB -RNA达 89%～ 92 %。

人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平变化规律研究

目的研究人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平变化规律,便于有效控制自繁食蟹猴的BV感染率。方法随机选取409只对不同月龄自繁食蟹猴,采用BV ELISA法进行BV抗体监测。结果新生仔猴刚出生时均携带不同程度的BV抗体,但随着月龄的增加,BV抗体水平开始下降,至5月龄时BV抗体阳性率降至最低(12.3%),之后BV抗体水平逐渐升高。结论人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平呈由高到低再升高的趋势,5月龄时断奶可最大限度地获得BV抗体阴性猴。

猴B病毒囊膜糖蛋白gD基因的克隆表达及其诊断价值评价

目的克隆表达猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段,评价其诊断价值,为猴B病毒快速鉴别诊断技术建立和疫苗研制奠定基础。方法利用PCR扩增gD胞外区基因片段,测序正确后插入原核表达载体pET28b(+)。重组质粒转化至大肠杆菌(BL21)DE3并进行诱导表达。纯化蛋白首先以His抗体和B病毒阳性血清进行鉴定,再用ELISA评价其诊断价值。结果目的蛋白为包涵体,占菌体总蛋白的35%,分子量约为48kD。Western印迹显示,重组蛋白能与猴B病毒阳性血清和His单克隆抗体发生免疫反应;32份标准阳性血清和30份阴性血清的ELISA检测结果显示,该蛋白的检出率分别为93.75%和100%。结论重组猴B病毒囊膜糖蛋白gD胞外区片段具有良好的反应原性,可作为猴B病毒血清学检测的候选抗原。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方提取物对病毒性心肌炎小鼠血清AST、LDH的影响

目的:观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方(K-CoxB-JN)提取物对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用肢体Ⅱ导联心电图正常的雄性Balb/c小鼠腹腔注射CVB3,建立实验性小鼠病毒性心肌炎模型。将120只造模成功的雄鼠随机分模型组、黄酮低剂量组、多糖中黄酮中剂量组、原方水煎组,每组30只,各组小鼠在腹腔接种CVB3稀释液半小时后即给予相应药物(模型组灌胃生理盐水);另选取10只健康雄鼠作为正常对照组,腹腔接种同体积的生理盐水后给予生理盐水。将接种病毒当天定为第实验的1天,每日给药1次,连续给药14天,于第15天处死。观察小鼠生存状态及体重的变化,统计小鼠死亡率,计算心重指数,用分离的血清检测心肌酶CK、LDH的活性。结果:K-CoxB-JN各提取物组均能显著降低小鼠血清中AST、LDH的活性(P<0.05),改善小鼠心功能及病变小鼠体重情况、减少死亡率,其中多糖中黄酮中剂量组、原方水煎组效果最佳。结论:K-CoxB-JN提取物对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞有很好的保护作用。

红面猴(Macaca arctoides)B病毒的检疫研究

以人疱疹病毒为抗原 ,用酶免疫法 (EIA)比较在不同生境中 ,红面猴 B病毒相关抗体阳性率的差异 :野外捕获组阳性率为 76 .2 % ;野外捕获后单只笼养组阳性率为 6 5.1% ;自繁分笼群养组阳性率为 13.5% .红面猴 B病毒相关抗体总阳性率为 57.1% ,不同性别相关抗体阳性率没有显著差异 ( 58.1% ,♀ 56 .2 % ) .自繁分笼群养组相关抗体阳性率与其它两组阳性率的差异极显著 (<0 .0 1) .在野外捕获组和野外捕获后单只笼养组中 ,B病毒相关抗体阳性率随着猴龄的增长而上升 .

猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达

目的研发猴B病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原。方法根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB。结果该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圆细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98kDa。实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达。结论研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对CVB_3感染小鼠的治疗作用

目的观察抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JN复方新制剂)对CVB3感染小鼠的治疗作用。方法用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别予K-CoxBJN复方新制剂高、中、低剂量,利巴韦林和纯水灌胃十四天。观察小鼠一般状态、记录死亡数,分别在第7、14天每组随机抽取小鼠标号,称体质量,取血测天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)含量活性;之后取心,脾,胸腺称重,计算脏器指数;取心脏放入10%甲醛中固定,HE染色观察心肌病理变化,记录病理积分。结果 K-CoxB-JN复方新制剂能降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率和血清中CK、AST含量,给药组和模型对照组相比较P<0.05,并能降低心脏指数和心脏病理积分,但对脾、胸腺指数影响不明显。结论 K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染的小鼠有治疗作用。