bDNA和NASBA法定量检测HIV-1病毒载量的比较研究

目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者血浆标本同时用bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量,并用流式细胞术检测患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果bDNA法及NASBA法测得HIV-1病毒载量平均值分别为(4.398±0.580)log拷贝数/ml和(4.488±0.602)log拷贝数/ml,差异无统计学意义(t=1.210,P>0.05);两种方法检测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.8004,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值均呈显著直线负相关。结论bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度一致性,在实际工作中均可选用。

bDNA技术在HIV感染早期诊断中的应用

HIV抗体检测是HIV感染病原学检测最常用的方法,但血清HIV抗体的出现一般发生于病毒急性感染后的第8d到到10周,在抗体未产生之前的这个时期称为感染后的"窗口期"[1],此期用HIV抗体检测的方法一般不能作出诊断.

人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA bDNA检测在宫颈疾病筛查中的应用

目的:评价人乳头瘤病毒E6/E7mRNA bDNA检测在宫颈疾病筛查中的应用价值。方法:本文拟选取宫颈癌筛查中疑似宫颈疾病患者,对其均进行人乳头瘤病毒E6/E7mRNA bDNA检测和TCT检测以及宫颈病理学检查,以病理学结果分为正常组、CIN1、CIN2、CIN3、宫颈癌共五组,对比HPV E6/E7mRNA bDNA、TCT两种检测方法在该五组中的准确度及假阳性率。结果:人乳头瘤病毒E6/E7mRNA bDNA检测在对宫颈癌筛查中准确度较TCT检测方法均高(P<0.05),假阳性率亦低于TCT检测方法(P<0.05),均有统计学意义。结论:人乳头瘤病毒E6/E7mRNA bDNA检测是目前宫颈癌筛查中较好的方法,具有较好的准确度,假阳性率亦低,可能更能评估宫颈癌的发病风险。

bDNA定量检测HIV-1RNA的质量控制应注意的问题

总结分析影响bNDA（核酸分支信号放大技术）检测质量的检测前、检测中及检测后的各种因素，提高检测质量。检测前要做好技术培训、仪器准备，要保持检测方法、样本种类的一致性。检测中必须根据bNDA试验特点及试剂的特殊性规范操作。检测后要注意分析试验成立的各个条件，所有条件在控时方可发出检测报告。

HIV病毒载量定量测定方法的比较研究

[目的 ] 比较不同检测方法对人类免疫缺陷病毒 (HIV )病毒载量间的一致性 ,供临床应用选择方法时参考。[方法 ] 在上海地区对HIV感染者和艾滋病 (AIDS)病人采集 91份标本 ,每份标本同时用bDNA法和NASBA法测定 ,比较两者检出率、相关性和不一致性。 [结果 ] HIV病毒载量检出率均在 80 % ,且无样本错位 ;两种方法检测的HIV病毒载量Log值呈高度线性相关 ,同时发现 7例病人两种方法测得的病毒载量存在明显差异。 [结论 ] bDNA法和NASBA法检测HIV病毒载量具有高度一致性 ,在实际工作中可任意选用 ,NASBA法在HIVRNA低浓度时敏感性更高 。

人参皂苷Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞核因子-κB的影响

目的探讨人参皂苷Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素(Adr)慢性心力衰竭(CHF)效应是否与抑制核因子-κB(NF-κB)有关。方法 Adr诱导CHF大鼠模型被随机分为Adr组(n=15)和Gs-Rbl组(70 mg.kg-1.d-1,n=17),另随机选取同龄健康大鼠作为对照(n=10);同时培养乳鼠心肌细胞并随机分为对照组、Adr组(1μmol.L-1)和Gs-Rbl组(1μmol.L-1Adr+200μmol.L-1 Gs-Rbl)。干预完毕后,检测心脏超声、NF-κB、IκBα、p-IκBα和NF-κB DNA结合活性。结果 (1)Gs-Rb1组LVEF明显改善(P=0.003);(2)在NF-κB p50和NF-κB p65方面,体内或体外的Gs-Rbl组均明显低于Adr组(P<0.001);(3)体内、体外的Gs-Rbl组NF-κBDNA结合活性明显低于Adr组(P<0.01);(4)体内、体外的Adr组IκBα蛋白明显高于对照组,而Gs-Rbl组IκBα最高(P<0.01);Gs-Rbl组p-IκBα和p-IκBα/IκBα比值明显低于Adr组(P<0.01)。结论 Gs-Rb1改善CHF效应与其抑制NF-κB活性有关。

人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的检测在宫颈癌筛查中的初步评价

目的:评价支链DNA技术(bDNA)对HPV-E6/E7 mRNA的检测及其临床价值。方法:对167例宫颈癌筛查妇女宫颈脱落细胞用液基细胞薄层涂片技术行宫颈细胞学检查,同时采用bDNA技术检测HPV-E6/E7 mRNA。另从中随机选择43例患者[11例非典型磷状上皮细胞(ASCUS)、17例低度磷状上皮内病变(LSIL)、15例高度磷状上皮内病变(HSIL)]检测HPV-E6/E7DNA。结果:①HPV-E6/E7 mRNA与HPV-E6/E7 DNA相关性分析显示:HPV-E6/E7 mRNA与HPV-E6/E7 DNA检测结果呈现显著正相关(r=0.465,P=0.002);②总体人群HPV-E6/E7 mRNA检出阳性率为43.1%,随着病理级别的升高,HPV-E6/E7mRNA阳性率(χ2=41.396,P<0.001)和copies量(H=39.350,P<0.001)均呈现趋势性升高;③HPV-E6/E7 mRNA对LSIL+诊断的灵敏度为67.1%(95%CI:56.1%-78.1%)、特异性为74.2%(95%CI:65.5%-82.9%)、准确性为71.3%(95%CI:64.4%-78.1%)、阳性预测值为65.3%(95%CI:54.3%-76.3%)、阴性预测值为75.8%(95%CI:67.2%-84.4%)。结论:HPV-E6/E7 mRNA与宫颈细胞学类型相关,其对LSIL+的诊断具有较高的效率,可能更为适用于宫颈癌的发病风险评估。

荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBV DNA的比较

目的 了解荧光定量聚合酶链反应 (PCR)法与分支链DNA信号扩增 (bDNA)法在检测血清中HBVDNA含量上的优缺点。方法 分别用这两种方法平行检测 44份乙型肝炎患者的血清标本 ,并与定性PCR检测结果比较。同时用荧光定量PCR法观察 15例乙肝患者干扰素治疗期间HBVDNA含量变化。结果 ①荧光定量PCR法和bDNA法比较 ,○a前者测出的HBVDNA含量均值为 ( 3 5 0× 10 5± 3 3 6)copies/μl ;后者为 ( 3 0 7× 10 5± 12 9)copies/μl ,两者比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。○b前者的HBVDNA阳性率 79 5 % ;后者及常规PCR定性法均为 5 9 1%。荧光定量PCR法的阳性检出率显著高于bDNA法及常规定性PCR法 (P <0 0 5 )。② 15例中 5例获完全应答的乙型肝炎患者其血清HBVDNA含量在治疗 16周内均逐渐下降至完全转阴。结论 荧光定量PCR法与bDNA法在检测血清HBVDNA含量上 ,结果大多一致 ,且敏感性强 ,检验也较简便、价廉 ,并能较好评价和检测乙肝患者抗病毒疗效 ,宜于临床推广。

恩替卡韦治疗拉米夫定失效的慢性乙型肝炎患者多中心随机双盲对照临床研究

目的 研究恩替卡韦对拉米夫定治疗失效的慢性乙型肝炎 (CHB)患者的疗效和安全性。方法 采用多中心、随机、双盲、安慰剂对照的临床试验 ,选择拉米夫定治疗失效的CHB病人 14 5例 ,按 4∶1比例随机分为恩替卡韦组 116例 ,安慰剂组 2 9例。完成为期 12周的治疗后 ,检测血清HBVDNA水平、HBeAg和肝生化功能的变化。结果 恩替卡韦组在开始治疗后即有显著的抗病毒效果 ,直至治疗结束。用聚合酶链反应 (PCR ,AmplicorCobas)定量法检测病人HBVDNA的平均下降幅度 ,恩替卡韦和安慰剂组分别为 :4.3 0对数值 (log1 0 )和 0 .15对数值 (log1 0 ) ,P值均 <0 .0 0 0 1;在 12周时 ,用bDNA方法检测 ,两组病人HBVDNA转阴率 (<0 .7mEq ml)为 74%和 10 %。丙氨酸氨基转移酶 (ALT)的复常率为 71%和 7%。两组不良事件的发生率相当 (3 3 %对 2 8% )。无 1例发生药物相关的严重不良反应。结论 用恩替卡韦治疗拉米夫定失效的病人 12周 ,1.0mg d剂量在降低HBVDNA水平和ALT复常方面明显优于安慰剂 。

重组白细胞介素-4增强日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗诱导小鼠的保护力

目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗对小鼠的免疫保护效果。方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj31)肌注免疫小鼠,设重组IL-4表达质粒、组织蛋白酶B表达质粒和2种空载体质粒对照组。免疫组化检测IL-4和组织蛋白酶B在小鼠肌细胞内的表达,末次免疫3周后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力。结果重组IL-4和组织蛋白酶BDNA均在小鼠肌细胞表达,重组IL-4和组织蛋白酶BDNA联合免疫小鼠,产生43.2%的减虫率和76.6%的减卵率,与组织蛋白酶BDNA单独免疫相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论重组IL-4能提高日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗的抗血吸虫保护力作用,具有佐剂的免疫效应。

艾滋病病毒的核酸检测法

被称为“世纪瘟疫”的艾滋病是获得性免疫缺陷综合症 (AIDS)的简称 ,人类免疫缺陷病毒 (HIV)是引起艾滋病的病原体。本文综述了艾滋病的血清学检测方法 ,尤其对现在普遍采用的三种先进的核酸检测方法PCR、bDNA和NASBA方法的检测原理进行了比较详细的介绍。

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗不同免疫途径免疫保护效果研究

目的 :观察本室所构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白BDNA疫苗在BALB/c小鼠体内的不同免疫途径的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31免疫BALB/c鼠 ,将 36只 6～ 8周龄BALB/c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )肌肉注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,实验组 (B组 )皮下注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组肌肉注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2w免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1d ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2d后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 1 5 .0 % (P >0 .0 5 )和 2 5 .0 % (P <0 .0 5 ) ,减卵率分别为 38.2 2 %和 5 4.90 % (P <0 .0 0 1 )。与皮下免疫组相比 ,VR1 0 1 2 /Sj31肌肉免疫组的减卵率分别为 2 6 .99% (P <0 .0 0 1 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用 ,肌肉注射的保护效果大于皮下注射。

HPV E6/E7mRNA检测在宫颈疾病中的临床应用探讨

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)癌基因E6/E7 m RNA检测在宫颈病变中的临床应用。方法:收集210例宫颈疾病疑似患者的宫颈分泌物标本行液基细胞学(TCT)检测,同时分别进行实时荧光定量PCR HPV DNA检测及支链DNA(b DNA)HPV E6/E7 m RNA检测,对两组检测结果进行对比。结果:HPV E6/E7 m RNA特异性高于HPV DNA。细胞学病变组的HPV E6/E7 m RNA阳性率和拷贝数均比细胞学正常组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV E6/E7 m RNA检测与HPV DNA检测相比具有较高的特异性,HPV E6/E7 m RNA检测对宫颈癌的筛查具有较好的临床应用前景。

分支链DNA信号放大技术及其在临床医学中的研究应用

分支链DNA信号放大技术（bDNA）是一种基于探针杂交信号放大的检测系统，无需对mRNA纯化和反转录即可对mRNA做精确的定量检测，有灵敏度高、线性范围宽、准确性好和结果稳定可靠等优点，具有良好的临床科研应用价值。本文就bDNA技术的原理及其在CMV、HBV、HCV和HIV等病毒定量检测、基因表达分析以及肿瘤基因分析等方面的应用作一介绍。

Bio-Plex悬浮芯片系统检测两种实验兔白介素基因的差异表达

目的采用液相悬浮芯片系统同时测定实验兔圆小囊中IL-1β、IL-1R1、IL-8、IL-8RA和IL-15各基因的表达情况,并对该方法进行评价。方法利用Affymetrix的Panomics QuantiGene Plex 2.0 Assay中bDNA信号放大和多磁珠分析技术,来同时检测两种实验兔圆小囊中多重mRNA并定量。建立实验兔免疫相关白介素基因的液相悬浮芯片检测方法。结果可同时检测IL-1β、IL-1R1、IL-8、IL-8RA和IL-15各基因的含量,并发现WHBE兔IL-15基因的相对表达量显著高于JW兔(P<0.05),IL-1R1基因的相对表达量显著高于JW兔(P<0.01),IL-8RA基因在WHBE兔中的相对表达量也高于JW兔(P<0.05)。结论建立了实验兔白介素基因的液相悬浮芯片检测方法,WHBE兔的IL-15、IL-1R1和IL-8RA基因表达量较高,可能与WHBE兔独特的免疫学特性有关。

枝状核酸信号放大定量检测系统

血液中病原体的有效定性与其相关成分的定量检测可为病毒性疾病的感染及预后判断提供可靠的指标。聚合酶链反应灵敏度较高,但易受污染,且尚无较可靠、简便的定量方法;枝状核酸信号放大检测系统则无论在定性还是在定量方面都有新的突破。本文就枝状核酸信号放大系统检测方法的建立与发展、应用以及优劣之处予以简述。

3种血浆HIV-1 RNA定量方法检测质量评价

目的:评价3种血浆HIV-1 RNA定量方法的检测质量效果。方法:120份HIV-1阳性血浆样本分别用Amplicor、NASBA和bDNA2.0试剂盒测定其HIV-1 RNA浓度,之后对其敏感性、相关性以及批内和批间重复性进行统计学分析。结果:3种试剂盒对120份血浆样本的检测敏感性分别为75.83%(Amplicor)、66.67%(NASBA)和70.00%(bDNA2.0);平均HIV-1RNA浓度(log10拷贝/ml)分别为4.12±0.92(Amplicor)、4.05±0.88(NASBA)和4.04±0.77(bDNA 2.0);相关性比较中,差异有<0.50 log10的样本百分率分别为73.96%(Amplicor-bDNA2.0)、72.41%(NASBA-bDNA2.0)和68.09%(Amplicor-NASBA);批内重复性分析中,差异<0.50 log10的样本百分率分别为96.55%(Amplicor)、85.71%(NASBA)和100.00%(bDNA2.0);批间重复性分析中,差异<0.50 log10的样本百分率分别为96.77%(Amplicor)、83.33%(NASBA)和96.77%(bDNA2.0)。结论:3种病毒载量检测试剂盒定量血浆HIV-1RNA方法可靠,敏感性接近,相关性和重复性良好。