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重组牛碱性成纤维细胞生长因子纯化工艺的研究
1
作者
冯秀萍
杨洪存
+1 位作者
曲红艳
杨倩
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2004年第1期34-36,共3页
对大肠杆菌表达的重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)进行了纯化工艺的研究。 3批纯化后的终产品经SDS PAGE检测 ,其纯度为 99.3% ,经HPLC(高效液相 )检测 ,其纯度为 10 0 % ,分子质量为 17.8ku ,其平均比活性为 2 .8× 10 6AU/m...
对大肠杆菌表达的重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)进行了纯化工艺的研究。 3批纯化后的终产品经SDS PAGE检测 ,其纯度为 99.3% ,经HPLC(高效液相 )检测 ,其纯度为 10 0 % ,分子质量为 17.8ku ,其平均比活性为 2 .8× 10 6AU/mg ,其表达量为 97.5mg/ml.。
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关键词
重组牛碱性成纤维细胞生长因子
纯化
比活性
表达量
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职称材料
可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在E.coil中的表达、纯化及其生物学活性
2
作者
王少华
郑海锋
+2 位作者
王宇涛
杨利军
杨涛
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2015年第10期1028-1032,共5页
目的表达纯化可溶性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand,TRAIL)蛋白,并测定其生物学活性。方法利用E.coli中表达C-端带有6×His标签的可溶性TRAIL蛋白,并优化诱导时间(...
目的表达纯化可溶性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand,TRAIL)蛋白,并测定其生物学活性。方法利用E.coli中表达C-端带有6×His标签的可溶性TRAIL蛋白,并优化诱导时间(4、6和8 h)和诱导剂IPTG的浓度(0.06、0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)。表达产物经Ni亲和层析和离子交换层析纯化后,采用MTT法测定不同浓度TRAIL(终浓度分别为100、200、400 ng/ml)的活性,并检测亲和层析过程中两种洗脱方式(洗脱液4℃留柱过夜后进行洗脱和洗脱液进柱后直接收集流出液)及纯化过程中两次透析的时间(均为24和48 h)对TRAIL活性的影响。结果最佳诱导时间为6 h,最佳IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L。表达产物的表达量占菌体总蛋白的20%,相对分子质量为20 000,可与兔抗人TRAIL单克隆抗体发生特异性结合。TRAIL终浓度为100、200和400 ng/ml的实验组的抑制率分别约为36%、53%和73%。亲和层析的两种洗脱方式的TRAIL活性差异无统计学意义(P>0.05),透析48 h比透析24 h获得的TRAIL活性显著降低(P<0.05)。结论 TRAIL蛋白成功在E.coli中表达,具有抑制肿瘤细胞生长的作用,优化后的TRAIL诱导条件和纯化方法可进一步大量生产高TRAIL蛋白的活性,满足了TRAIL的基础及临床相关研究的要求。
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关键词
可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
大肠埃希菌
基因表达
纯化
生物学活性
原文传递
sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究
3
作者
王世奇
刘婧莹
+4 位作者
刘晨浪
李纯
胡晓凤
夏立秋
张友明
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1-7,共7页
目的:从HL-60细胞中获得了sTrail基因片段,优化蛋白表达条件,并研究其抗肿瘤活性。方法:培养HL-60细胞,提取总RNA,通过RT-PCR扩增sTRAIL蛋白基因片段,并将目的基因克隆至原核表达载体p ET28a上,并电击转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达...
目的:从HL-60细胞中获得了sTrail基因片段,优化蛋白表达条件,并研究其抗肿瘤活性。方法:培养HL-60细胞,提取总RNA,通过RT-PCR扩增sTRAIL蛋白基因片段,并将目的基因克隆至原核表达载体p ET28a上,并电击转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,Ni-IDA柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱鉴定。纯化后的重组蛋白作用HUVEC,He La,Hep-3B,HCT-116,MDA-MB-231,H460细胞检测蛋白生物学作用。结果:DNA测序结果证实成功构建了重组质粒p ET28a-sTrail,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱检测显示成功表达sTRAIL蛋白,MTT法和流式细胞术结果显示,sTRAIL蛋白对肿瘤细胞包括He La,HCT-116,MDA-MB-231,H460,Hep-3B细胞有良好的生物活性,对正常的HUVEC细胞无毒性。结论:成功构建可以高效表达sTRAIL蛋白的原核表达载体,优化蛋白的表达和纯化后所得sTRAIL蛋白具有良好的抗肿瘤生物活性,为研究和发展利用sTRAIL蛋白作为临床治疗抗肿瘤药物提供了重要基础。
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关键词
肿瘤坏死因子相关凋亡配体
基因克隆
原核表达
蛋白纯化
抗肿瘤活性
原文传递
题名
重组牛碱性成纤维细胞生长因子纯化工艺的研究
1
作者
冯秀萍
杨洪存
曲红艳
杨倩
机构
长春长生基因药业股份有限公司
长春生物制品研究所
广州暨南大学医药生物技术研究开发中心
出处
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2004年第1期34-36,共3页
文摘
对大肠杆菌表达的重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)进行了纯化工艺的研究。 3批纯化后的终产品经SDS PAGE检测 ,其纯度为 99.3% ,经HPLC(高效液相 )检测 ,其纯度为 10 0 % ,分子质量为 17.8ku ,其平均比活性为 2 .8× 10 6AU/mg ,其表达量为 97.5mg/ml.。
关键词
重组牛碱性成纤维细胞生长因子
纯化
比活性
表达量
Keywords
bfgf
,
purification
,
relative activity
,
expressed quantity
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在E.coil中的表达、纯化及其生物学活性
2
作者
王少华
郑海锋
王宇涛
杨利军
杨涛
机构
山西医科大学生物化学与分子生物学教研室细胞生理学省部共建教育部重点实验室
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2015年第10期1028-1032,共5页
基金
山西省自然科学基金(2012011041-5)
国家自然科学基金青年基金(81101895)
+1 种基金
山西省高等学校优秀青年学术带头人支持计划[晋教科(2012)10号]
国家科技部重大新药创制计划(2012ZX09103301-010)
文摘
目的表达纯化可溶性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand,TRAIL)蛋白,并测定其生物学活性。方法利用E.coli中表达C-端带有6×His标签的可溶性TRAIL蛋白,并优化诱导时间(4、6和8 h)和诱导剂IPTG的浓度(0.06、0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)。表达产物经Ni亲和层析和离子交换层析纯化后,采用MTT法测定不同浓度TRAIL(终浓度分别为100、200、400 ng/ml)的活性,并检测亲和层析过程中两种洗脱方式(洗脱液4℃留柱过夜后进行洗脱和洗脱液进柱后直接收集流出液)及纯化过程中两次透析的时间(均为24和48 h)对TRAIL活性的影响。结果最佳诱导时间为6 h,最佳IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L。表达产物的表达量占菌体总蛋白的20%,相对分子质量为20 000,可与兔抗人TRAIL单克隆抗体发生特异性结合。TRAIL终浓度为100、200和400 ng/ml的实验组的抑制率分别约为36%、53%和73%。亲和层析的两种洗脱方式的TRAIL活性差异无统计学意义(P>0.05),透析48 h比透析24 h获得的TRAIL活性显著降低(P<0.05)。结论 TRAIL蛋白成功在E.coli中表达,具有抑制肿瘤细胞生长的作用,优化后的TRAIL诱导条件和纯化方法可进一步大量生产高TRAIL蛋白的活性,满足了TRAIL的基础及临床相关研究的要求。
关键词
可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
大肠埃希菌
基因表达
纯化
生物学活性
Keywords
TNF-related apoptosis-inducing ligand(TRAIL)
E.coli
Gene expression
purification
Biological
activity
分类号
Q255 [生物学—细胞生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究
3
作者
王世奇
刘婧莹
刘晨浪
李纯
胡晓凤
夏立秋
张友明
机构
湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1-7,共7页
基金
国家国际合作项目(2011DFA32610)
国家"973"计划专项(2012CB722301)
+1 种基金
国家"863"计划(2011AA10A203)
湖南省协同创新中心项目(20134486)资助项目
文摘
目的:从HL-60细胞中获得了sTrail基因片段,优化蛋白表达条件,并研究其抗肿瘤活性。方法:培养HL-60细胞,提取总RNA,通过RT-PCR扩增sTRAIL蛋白基因片段,并将目的基因克隆至原核表达载体p ET28a上,并电击转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,Ni-IDA柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱鉴定。纯化后的重组蛋白作用HUVEC,He La,Hep-3B,HCT-116,MDA-MB-231,H460细胞检测蛋白生物学作用。结果:DNA测序结果证实成功构建了重组质粒p ET28a-sTrail,SDS-PAGE蛋白电泳,胶内酶解质谱检测显示成功表达sTRAIL蛋白,MTT法和流式细胞术结果显示,sTRAIL蛋白对肿瘤细胞包括He La,HCT-116,MDA-MB-231,H460,Hep-3B细胞有良好的生物活性,对正常的HUVEC细胞无毒性。结论:成功构建可以高效表达sTRAIL蛋白的原核表达载体,优化蛋白的表达和纯化后所得sTRAIL蛋白具有良好的抗肿瘤生物活性,为研究和发展利用sTRAIL蛋白作为临床治疗抗肿瘤药物提供了重要基础。
关键词
肿瘤坏死因子相关凋亡配体
基因克隆
原核表达
蛋白纯化
抗肿瘤活性
Keywords
TNF-related apoptosis inducing ligand
purification
Antineoplastic
activity
Gene cloning Prokaryotic expression Protein
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组牛碱性成纤维细胞生长因子纯化工艺的研究
冯秀萍
杨洪存
曲红艳
杨倩
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2004
0
下载PDF
职称材料
2
可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在E.coil中的表达、纯化及其生物学活性
王少华
郑海锋
王宇涛
杨利军
杨涛
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2015
0
原文传递
3
sTRAIL蛋白原核表达载体的构建、表达及抗肿瘤活性研究
王世奇
刘婧莹
刘晨浪
李纯
胡晓凤
夏立秋
张友明
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
原文传递
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