地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质

地衣芽孢杆菌A.4041（Bacillus，licheniformisA．4041）耐高温α-淀粉酶，经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化，得到三种电泳均一的组分，α－Ⅰ，α－Ⅱ和α－Ⅲ．其相对质量分数分别为14.7％，32.2％和52.9％；等电点为5．2，5．4和5．5；相对分子质量为48000，55000和60000．酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg／mL，3．4mg／mL和2．6mg／mL．最适作用温度皆为90℃；最适pH为6.0～6.5；稳定pH范围皆为4～11．5在温度高于70℃，保温30min条件下，三组分的活力开始下降，但α－Ⅱ和α－Ⅲ在100℃，保温30min时仍分别保持15％和20％的残余活力，表明该酶的热稳定性良好．Ca2+，Mg2+，K+对酶明显激活；Cu2+，Fe3+，Zn2+，Al3+，EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制．

地衣芽孢杆菌弹性蛋白酶纯化和性质研究

用地衣芽孢杆菌发酵液制备弹性蛋白酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀和Sephadex凝胶柱层析的方法分离纯化弹性蛋白酶,并对弹性蛋白酶的酶学性质进行研究。结果表明:弹性蛋白酶粗酶液经40%～70%饱和度的硫酸铵纯化后比活力提高到120U/mg,经凝胶柱层析纯化后比活力可达到292U/mg,纯化倍数为12.6,SDS-PAGE法证实弹性蛋白酶分子质量为29.5kD。对酶学性质的研究结果表明:弹性蛋白酶最适反应温度为55℃,最适反应pH值为7.4,以刚果红-弹性蛋白为底物,米氏常数Km为9.67mg/mL。低浓度金属离子Ca2+和K+对酶活力有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Zn2+和Al3+对酶活力则有抑制作用。

地衣芽孢杆菌抗菌肽的纯化及抗菌特性分析

以研究地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)LY12所产抗菌肽特性,从发酵液中分离纯化该抗菌肽。通过超滤、离子交换层析、分子筛凝胶过滤层析、反向高效液相色谱等方法纯化该抗菌肽。结果显示:LC-ESI-MS质谱测得抗菌肽分子量为2750.785 Da,同Tricine SDS-PAGE分析结果基本一致。体外抗菌试验结果显示,抗菌肽LYF12能够抑制丝状真菌、细菌的生长。对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、副溶血性弧菌(Vibrio parachaemolyticus)的最低抑菌浓度分别为9.8、19.8、20.7、7.2、9.6、10.2、15.7μg/mL。从地衣芽孢杆菌LY12分离的抗菌肽显示出对革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌及真菌具有较好的抗菌效果,故在食品防腐中具有潜在的应用价值。

地衣芽孢杆菌胞外耐高温α-淀粉酶的研究

地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)突变株7902培养液离心后的上清液,于75℃至100℃作用,α-淀粉酶活力基本上随温度提高呈直线上升。酶液在不加 Ca^(2+)和无任何保护剂条件下于90℃处理60分钟,95℃处理20分钟,酶活力均能保留90%以上。培养液经硫酸铵分段沉淀、Sephadex G-50疑胶过滤和制备垂直平板电泳纯化,经 PAGE 鉴定为一条带,纯酶比活提高49.3倍,淀粉酶法区带定位鉴定证明提纯样品是α-淀粉酶。SDS 凝胶电泳测定分子量为68000。金属离子 Ca^(2+)、Li^+、Mg^(2+)等对酶有激活作用,而 Al^(3+)、Ag^+、Cu^(2+)、Mn^(2+)和 Fe^(2+)等有一定的抑制作用。

耐热碱性蛋白酶的纯化及其主要性质研究

由我国新疆沙漠土样中分离获得的栗褐芽胞杆菌 CPU 94 0 7(Bacilus Badium CPU94 0 7) ,能产生耐热碱性蛋白酶 ,以葡萄糖 1.0 % ,蛋白胨 0 .5% ,酵母膏 0 .5% ,Mg SO4 0 .0 2 5%为培养基 ,在 p H9.3,37℃振荡培养 4 8h,发酵液酶活力为 5796u/ml。粗酶经 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,DEAE- C(DE- 32 )两次层析 ,Sephadex G- 10 0层析 ,得到 SDS- PAGE电泳均一样品 ,比活 4 0 50 u/mg,是粗酶比活的 9倍。该酶的分子量为 2 7.5k D,最适 p H为 9.6,最适温度为 57℃ ,Cu2 +与 Ag+对其活力有明显抑制作用 ,在 50℃处理 1h后酶活力基本不变 ,50℃处理 3h后 ,酶活力降到原来的56%。

地衣芽孢杆菌JF-UN122碱性蛋白酶的分离纯化与性质

地衣芽孢杆菌JF UN12 2的发酵液 ,以硫酸铵分段盐析得粗酶 ,再经DEAE SephadexA 5 0吸附色素、CM SephadexC 5 0离子交换及SephadexG 75柱层析等步骤获得电泳纯的碱性蛋白酶。SDS PAGE测得其分子量为 31.6KDa。以酪蛋白为底物时 ,酶的Km为 5 .2 6 μg/mL ,Vm为2 0 .8μg/min。酶的最适 pH为 9.0 ,最适温度为 5 5℃ ,pH 5～ 11,5 5℃以下酶较稳定 ,对 1mol/LH2 O2 具有一定的耐氧化性。PMSF对酶抑制 ,二硫苏糖醇 (DTT)有保护作用 ,钙离子、EDTA、SDS。

沙福芽孢杆菌G7-7碱性果胶酶纯化及酶学性质研究

通过硫酸铵盐析、Mono Q阴离子交换层析技术,对1株来自沙福芽孢杆菌G7-7所产果胶酶进行分离纯化,得到分子质量为57 kDa电泳纯的果胶酶。结果显示,发酵上清液经两步分离纯化后,活力达6.6 U/mg,纯化回收率为30.3%,纯化倍数为3.7。果胶酶最适的作用温度36℃,50℃以下稳定;最适pH值9.5,pH值7~11稳定,为碱性果胶酶。纯化的果胶酶Km=8.75 g/L,Vmax=60.24μg/(min·mL)。