1种细菌型豆豉自然发酵过程中生物胺的变化

利用丹磺酰氯为衍生试剂,1,7-二氨基庚胺做为内标验证了《GB/T5009.208-2008》,以普通黄豆为原料,研究一定条件下细菌型豆豉自然发酵过程中氨基酸态氮和生物胺的变化情况。研究发现,自然发酵的豆豉中生物胺有8种,分别为:组胺、色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、酪胺、亚精胺、精胺。发酵72 h后8种生物胺中,酪胺含量最高达到488 mg/kg,且从发酵48 h起,豆豉中酪胺的含量与氨基酸态氮的含量都存在着先大幅增加再缓慢下降的趋势。对照查阅国家相关规定,发现豆豉中主要具有毒性作用的组胺和酪胺均没有超过国家最大允许范围,因此理论上不存在危害生理健康的毒性。但应注意的是,由于组胺含量一直处于上升趋势,细菌型豆豉自然发酵过程中要控制发酵时间,不然可能会因为组胺生成造成安全隐患。

细菌型豆豉发酵菌株的鉴定

为了明确细菌型豆豉发酵菌株的身份,首先采用形态及生理生化方法进行鉴定,接着提取该菌株的基因组DNA,并根据芽孢杆菌属16S rDNA序列两端的保守性片段设计引物,然后用PCR方法扩增出16S rDNA部分序列,纯化、测序,最后经BLAST搜索进行序列比对和构建系统进化树。结果表明,菌株BBDC3为革兰氏阳性芽孢杆菌,生理生化特征与枯草芽孢杆菌相符;扩增出的16S rDNA部分序列长为1344bp,与序列号为EF488171的枯草芽孢杆菌16S rDNA序列的相似度最高,为99%;系统进化树中,菌株BBDC3与枯草芽孢杆菌AB018487在同一分支。因此,菌株BBDC3属于枯草芽孢杆菌。

基于Miseq高通量测序技术对细菌型豆豉细菌类群的评价

采用Miseq高通量测序技术对6个细菌型豆豉细菌多样性进行了评价,同时使用电子舌对不同样品各滋味指标的相对强度进行了测定,进而探讨了细菌类群对产品滋味品质的影响。结果表明,Bacillus(芽孢杆菌)是细菌型豆豉中的优势细菌,其相对含量为95.26%。在分类操作单元(Operational taxonomic units,OTU)水平上,发现5个核心OTU相对含量大于0.1%,其中4个隶属于Bacillus,OTU2133(隶属于芽孢杆菌)的平均相对含量为91.91%。酸味是豆豉间差异最大的滋味指标,且Bacillus、Staphylococcus(葡萄球菌)和Lactobacillus(乳酸杆菌)与豆豉酸味的形成均呈正相关。由此可见,鲊广椒中细菌微生物主要是由Bacillus组成,且Lactobacillus和Staphylococcus对豆豉滋味的形成具有影响。

豆豉中主要分离细菌对小鼠生化指标及肠道菌群的影响

采用豆豉样品进行细菌分离培养和细菌16S rDNA基因PCR扩增、测序分析,并将分离所得细菌进行小鼠灌胃实验。结果显示,豆豉中的主要分离细菌为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、类肠膜魏斯氏菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、发酵乳杆菌、表皮葡萄球菌。并且,各菌对小鼠丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)各项生化指标基本无影响。然而,其中解淀粉芽孢杆菌DC02能极显著性地降低小鼠血糖(GLU)水平,该菌有望成为治疗糖尿病的潜在菌株。活菌计数结果表明,除表皮葡萄菌以外,豆豉中分离所得其它细菌均能改善肠道菌群结构。可见,豆豉中分离所得主要细菌对正常机体安全、无致病性。

细菌型豆豉生理活性物质的研究进展

豆豉是一种以黑豆、黄豆为主要原料,利用微生物发酵制成的一种传统调味豆制品。根据制曲发酵时参与微生物种类的不同可分为毛霉型、曲霉型、细菌型和脉胞菌型。有关研究表明细菌型豆豉除含有丰富的蛋白质、维生素、氨基酸等营养成分外,还含有蛋白酶、淀粉酶、纤溶酶、活性肽、异黄酮、低聚糖等生理活性成分,具有调理肠胃、预防骨质疏松、防癌、溶栓等保健功效。详述了细菌型豆豉在生产工艺和生理活性物质等方面的研究进展,并对我国细菌型豆豉的研究与开发进行了分析和展望。

提高细菌型豆豉纤溶酶活性的生产工艺优化

以用枯草芽孢杆菌DC-2为发酵菌株,以纤溶酶活性为指标,对提高细菌型豆豉的纤溶酶活性关键技术进行了研究。主要探讨了装料量、大豆含水量、种龄、接种量、发酵温度和发酵时间等因素对酶活力的影响。结果表明,能够提高细菌型豆豉的关键技术参数为:100L容器中装入含水量为80%的大豆40kg,然后添加2%葡萄糖,接入2%的种龄为24h的种子液,33℃培养72h。在此发酵条件下,豆豉浸提液的最大纤溶酶活力提高了270IU/mL。

中国传统细菌型豆豉溶栓酶的提取纯化技术研究

为深入开发利用中国传统发酵细菌型豆豉溶栓酶,对豆豉溶栓酶分离纯化工艺进行了研究探讨,确认了最佳的纯化条件:首先用饱和度75%的硫酸铵沉淀豆豉溶栓酶;然后利用DEAE-Sepharose FF(Diethylaminoethyl Sepharose Fast Flow,二乙基氨基琼脂糖快速凝胶)阴离子交换柱进行层析,优化的层析条件为用10 mmol/L Tris(Trishydroxymethylaminomen,三羟甲基氨基甲烷)-HCl(pH 8.7)作为上样缓冲液,采用线性梯度洗脱,洗脱液为10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.7)和0.6 mol/L NaCl,洗脱流速为1 mL/min;最后经过Sephadex G-75(葡聚糖凝胶G-75)凝胶过滤,得到纯化倍数为11.29倍的豆豉溶栓酶。利用SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulphate-polylamide gel electroresis,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳)显示经纯化后的酶无杂蛋白,初步鉴定其分子量接近31 ku。

传统发酵豆豉含盐量及盐度对豆豉品质的影响

研究首先对我国目前市场上销售的不同产地有代表性的商品豆豉的含盐量做了调查和分析,含盐量在10.000~15.000 g/100 g之间。其次采用两段式控温后发酵工艺（前期40~42℃,后期28~30℃）,厌氧密封发酵10天,对不同盐度（0%,2%,4%,6%,8%,12%,W/W）豆豉后发酵过程中优势微生物：乳酸菌、酵母菌的生长变化和pH值、总酸、氨基酸态氮等成分的变化,以及不同盐度豆豉产品的感官品质进行了研究。结果表明,低盐度（2%,4%,W/W）发酵早期促进乳酸菌的生长,乳酸菌数106~107cfu/g;后期利于酵母菌的繁殖,酵母菌数达108cfu/g,并在一定程度上抑制了腐败菌的生长;总酸含量1.3~1.6 g/100 g,氨基酸态氮含量0.7~0.8 g/100 g,感官评价产品品质较好。

对中国传统细菌型豆豉溶栓酶酶学性质的研究

试验以通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤等技术分离得到分子量在31ku的细菌型豆豉溶栓酶为研究对象，对其酶学性质进行了研究探讨，发现此酶的最适作用温度为60℃，pH7～8时酶活性最高，在pH6～10的范围内稳定性较强；该酶没有明显的金属离子激活剂，高浓度的Cu^2＋，Fe^3＋，Al^3＋对此酶有抑制作用；添加蛋白胨、明胶可以提高酶的活性；抑制剂PMSF对豆豉溶栓酶抑制率几乎达到100％，EDTA、β-巯基乙醇对酶活几乎无抑制作用。

固体发酵生产豆豉纤溶酶的研究

对细菌型豆豉的生产工艺作了深入研究。分析了影响豆豉纤溶酶产量的诸多因素,包括大豆浸泡水量、时间、大豆破碎程度、碳源、离子强度、蒸煮时间等。并对豆豉提取物的功能性进行了研究,如溶栓作用、抗氧化作用、抑菌作用等。

细菌型豆豉激酶对小鼠尾静脉血栓模型的保护作用研究

在小白鼠腰背部皮下注射1%角叉菜胶溶液诱发小鼠尾静脉血栓,通过饲喂不同剂量的细菌型豆豉激酶来研究其在动物体内的溶栓作用。实验结果发现,豆豉激酶对角叉菜胶造成的小鼠血栓形成呈现一定的剂量效应趋势,随着灌胃剂量的增大,血栓形成相对长度减小。这说明豆豉激酶对血栓形成具有预防作用。

基于高通量测序技术的贵州不同类型细菌型豆豉菌群多样性分析

该研究利用高通量测序技术探究贵州干豆豉、湿豆豉和水豆豉之间的细菌群落结构及其组成差异。通过对测序结果进行分类注释,共得到1098891条有效数据,884个操作分类单元(operational taxonomic units,OTUs),共注释获得5个门类,96个属类。在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)为主要菌门,在3类豆豉中丰度高达99.0%以上;属水平上,干豆豉中主要的细菌类群为芽孢杆菌属(Bacillus)和变形杆菌属(Proteus);湿豆豉丰度最高的为芽孢杆菌属和普罗威斯登菌属(Providencia);水豆豉则主要由芽孢杆菌属和四联球菌属(Tetragenococcus)组成。3类豆豉均以芽孢杆菌属为优势菌属,在干豆豉和湿豆豉中芽孢杆菌属的平均相对丰度为93.0%和74.3%,水豆豉中为42.3%。此外,聚类分析和主成分分析结果表明,干豆豉与湿豆豉细菌组成更为相似,而水豆豉细菌种类更加丰富。该研究拟为贵州豆豉的标准化及其安全管理提供理论依据。

乳酸菌贡献细菌型豆豉风味的研究进展

豆豉是集营养价值和保健功能于一体的大豆微生物发酵食品,风味在一定程度上可直接决定豆豉的质和消费者的可接受度。利用纯种芽孢杆菌发酵,会使豆豉风味单一,且具有不同程度氨味,加入乳酸菌(LAB)混合发酵能显著改善豆豉风味。本文综述了细菌型豆豉的主要风味物质,并且重点探讨了LAB所产主要风味物质的可能形成机制,以期为进一步改善豆豉风味、合理控制生产工艺提供理论支撑。

豆豉中生物胺含量的动态变化研究

采用高效液相色谱法对豆豉中生物胺含量进行动态检测。结果表明,纯种强化发酵和自然发酵豆豉样品中均检测出色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺。纯种强化发酵条件下生物胺总含量在前、后发酵时期都呈先上升后下降的趋势,而自然发酵条件下均呈缓慢上升趋势,且前发酵总生物胺含量高于后发酵时期。两种发酵条件下,酪胺和亚精胺为主要生物胺,苯乙胺存在纯种发酵中。纯种强化发酵豆豉总生物胺含量高于自然发酵,酪胺和苯乙胺的含量分别高出2倍和4倍,与生产环境中粪肠球菌的污染关联性较大。豆豉发酵过程和成品中总生物胺含量均<250 mg/kg,短期内不存在食品安全问题。

细菌型豆豉蜡样芽孢杆菌的动态变化研究

采用传统分离鉴定法对细菌型豆豉不同发酵时期蜡样芽孢杆菌污染情况进行动态检测。结果表明，自然发酵过程中，蜡样芽孢杆菌最高达到2.3×104 CFU/g；纯种强化发酵过程中蜡样芽孢杆菌最高达1.1×103 CFU/g，自然发酵豆豉的蜡样芽孢杆菌含量高于纯种强化发酵。豆豉成品中总蜡样芽孢杆菌数量均＜105 CFU/g，短期内不存在食品安全问题。经分析，豆豉成品中蜡样芽孢杆菌主要来源于前发酵豆豉。

云南传统发酵豆豉中细菌的分离与分子鉴定

目的:为了明确云南传统发酵豆豉中细菌的种类,对云南传统发酵的豆豉进行研究。方法:采用平板稀释法进行菌种分离,利用分子生物学方法对分离到的菌株进行鉴定。结果:随机选择的130株细菌菌株属于3个属5个种,分别是芽胞杆菌属(Bacillus)3个种、葡萄球菌属(Staphylococcus)1个种和肠杆菌属(Enterobacter)1个种。其中枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)占所分离菌株的79.23%,是云南传统发酵豆豉的优势菌。结论:分离出的枯草芽胞杆菌有望作为实现云南传统发酵豆豉纯种发酵的主要菌种。

豆豉中丁硫克百威降解菌的筛选及鉴定

以豆豉为筛选原料,采用逐步增加液体培养基中丁硫克百威的浓度对降解菌进行驯化富集,然后进行平板划线获得单菌落,采用高效液相色谱法测定降解菌株对丁硫克百威的降解率,降解率高于60%的菌进行PCR测序及序列比对,并对其降解丁硫克百威的影响因素进行研究。结果表明,筛选的14株降解率高的菌株的4株菌株降解率高于60%,其中JJ-1被鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),JJ-4鉴定为毕赤酵母(Pichia pastoris),JJ-5鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),JJ-8鉴定为柑桔青霉(Penicillium citrinum)。当pH=8时,JJ-4对丁硫克百威的降解率为50.87%,而此时丁硫克百威自身水解速率仅有5.29%,在环境温度25~40℃时,JJ-4对丁硫克百威的降解速率是丁硫克百威自身水解速率的2~3倍。菌株JJ-4降解丁硫克百威的最适pH为8,最适温度为35℃。JJ-4对丁硫克百威的降解速率符合一级动力学,拟合方程为Ct=36.189e^0.1009 d(R^2=0.9912)。

多菌混合发酵豆豉后发酵工艺优化及品质分析

为探究多菌混合发酵豆豉的发酵工艺和品质,该研究以大豆为原料,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、卡利比克迈耶氏酵母(Meyerozyma caribbica)、溜曲霉(Aspergillus tamarii)为菌种制备豆豉,通过单因素试验结合响应面试验优化多菌混合发酵豆豉后发酵工艺条件,并对其后发酵过程中的理化、微生物指标及酶活力进行分析。结果表明,最优豆豉后发酵工艺条件为食盐添加量7%,发酵温度33℃,发酵时间8 d。在该优化条件下,豆豉感官评分为86.33分。后发酵完成时,豆豉水分含量、还原糖、总糖、总酸、总游离氨基酸、氨基酸态氮含量、颜色参数L^(*)值、a^(*)值、b^(*)值分别为23.76%、2.13 g/100 g、5.40 g/100 g、0.22 g/100 g、0.319 g/100 g、0.77 g/100 g、65.03、6.10、19.83;细菌、酵母菌、霉菌、乳酸菌活菌数对数值分别为3.13、0.97、3.44、2.12;蛋白酶与淀粉酶活力分别为322 U/100 g、13 U/100 g。

基于高通量测序的江西特色发酵豆豉中微生物群落多样性及其特征分析

目的:采用高通量测序技术,研究江西特色发酵豆豉中细菌和真菌等微生物的群落多样性及特征,以了解和提高产品质量和食用安全性。方法:采集江西南昌稻香园调味食品有限公司豆豉样品,经gDNA提取,分别对细菌16S rDNA和真菌ITS区域进行PCR扩增及MiSeq测序,根据统计的测序数据进行物种注释、丰富度聚类及α-多样性分析。结果:高通量测序获得细菌Tag数目36633个,OTU数目114个,经物种注释,主要为蓝细菌门(Cyanobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes),以蓝细菌门未分类属(Cyanobacteria Chloroplast Unclassified)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)为主;真菌Tag数目47117个,OTU数目8个,经物种注释,几乎全为接合菌门横梗霉属(Lichtheimia)。结论:江西豆豉细菌具有丰富的微生物群落多样性和特色的菌群组成结构。

香辛料对豆豉低盐后酵优势菌和蛋白酶活的抑制作用

传统豆豉的食盐含量偏高,不利于人体健康。本研究采用抑菌圈法,考察了花椒、桂皮、八角等9种香辛料的水提取液和乙醇提取液对4种低盐后酵优势菌的抑制作用,并采用福林酚法考察花椒60%醇提液对低盐后酵中蛋白酶活的影响。结果表明,香辛料的60%乙醇提取液对优势菌有一定的抑制作用,尤其是花椒醇提液,对4种优势菌的抑菌圈直径分别为1.32、1.06、1.15、1.05 cm,添加花椒醇提液会降低低盐后酵中的蛋白酶活。因此,可将花椒应用于豆豉低盐发酵的深入研究中。