类细菌样念珠菌变异株真菌保守基因检测

目的揭示念珠菌类细菌样变异株的分子基础及其相应的生物学特性的分子基础。方法采用常规PCR方法，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、两株不同来源的白色念珠菌标准菌株及源自于这两株念珠菌标准酋株的类细菌样念珠菌变异株进行真菌最保守18SrRNA基因的检测。结果大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌无真菌基因表迭；两株念珠菌标准菌株真菌基因为强表达；源自于念珠菌标准菌株的类细菌样念珠菌变异株真菌基因呈极弱表达。结论念珠菌发生类细菌样变后，虽然生物学性状呈类细菌样改变，但仍部分表达真菌最保守基因。此结果也进一步证实了具有原核生物特性的类细菌样念珠菌变异株是源自于具有真核细胞特性的念珠菌。

抗白色念珠菌海洋真菌的筛选及抑菌活性初探

实验以白色念珠菌为对象,对从渤海湾不同站位分离获得的55株海洋丝状真菌进行了抗真菌活性菌株的筛选。从中筛选得到了BH431、BH515、BH531和BH09721 4株抑菌活性较高的菌株,并进一步对不同浓度发酵液的抑菌活性及代谢物性质进行了检测。结果显示,4株海洋真菌对野生型白色念珠菌SC5314均具有较强抑菌活性,其最小抑菌浓度分别为65 g/mL、19 g/mL、54 g/mL、23 g/m L;其中BH431和BH515菌株还显示出对基因敲除型菌株RM1000的抑菌活性,最小抑菌浓度分别为32 g/m L、39 g/mL。4株海洋真菌所产生的活性代谢物具有较好的酸碱适应性,活性物质分子质量<6 000 u;其中BH431菌株的活性代谢物还具有良好的热稳定性。

利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌的增效作用

目的测定利福喷丁(Rifapentine)对氟康唑(Fluconazole)体外抗耐药白念珠菌的增效作用。方法参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的M27-A2方案测定利福喷丁与氟康唑对白念珠菌的最低抑菌浓度(MIC);利用棋盘式微量液基稀释法测定利福喷丁联合氟康唑体外抗白念珠菌的效果。结果利福喷丁单药时对实验所用12株白念珠菌均无抗菌活性(MIC80>1 024μg/mL)。在氟康唑敏感白念珠菌株中,利福喷丁联合氟康唑后未表现出协同效应(FICI>0.5);在氟康唑耐药白念珠菌中,利福喷丁联合氟康唑后均表现出显著的协同作用(FICI<0.1)。结论利福喷丁单用无抗白念珠菌活性,但利福喷丁能显著增强氟康唑抗耐氟康唑白念珠菌活性。

苦楝素联合BIT对白色念珠菌的协同抑菌效果研究

探讨苦楝素与BIT分别单独及二者联合使用对白色念珠菌的浮游菌生长及其生物膜形成的影响。以预加菌液倾注平板打孔抑菌实验法测定苦楝素、BIT及二者联合使用对白色念珠菌菌体生长的抑制效果,96孔板微量稀释法培养该菌浮游菌及其生物膜,分别测定浮游菌及其生物膜的吸光度并进行比较分析,判断最小抑菌浓度(MIC),计算二者联合时的抑菌指数(FIC)。平板打孔抑菌实验结果显示,其抑菌效果依次为:二者联合>BIT>苦楝素;96孔微量稀释法结果显示:二者联合的FIC系数为0.75;二者联合抑制该浮游菌生长比单用时药效增加了20%~50%,抑制其生物膜的形成比单用时药效增加了33%~50%。苦楝素与BIT联合使用具有对白色念珠菌生长的复配增效抑制作用,不但有效抑制该菌浮游菌生长,也能抑制其生物膜的形成。

拟青霉属真菌菌丝提取物抗真菌和清除DPPH自由基活性的初步研究

通过对不同寄主或不同来源的11种29株拟青霉进行抗白色念珠菌和清除自由基的活性筛选,发现古尼拟青霉菌株RCEF0866的菌丝体乙酸乙酯提取物具有较强的抗真菌活性,在菌丝浓度为100.0 mg.mL-1时,其提取物的抑菌圈达到(18.1±1.7)mm;菌株RCEF0866和RCEF4118的菌丝体甲醇提取物还具有较强的清除自由基活性,在菌丝浓度为5.0 mg.mL-1时,其对0.4 mg.mL-1的DPPH(1,1 diphenyl-2-picryhydrazyl)自由基的清除率分别为82.75%和79.53%。对菌株RCEF0866菌丝体的乙酸乙酯提取物进行薄层抑菌试验发现,其抗真菌主要成分的Rf值为0.90,表明该抗真菌成分为低极性成分。二苯代苦味肼基自由基薄层试验结果表明,RCEF0866菌丝体的甲醇提取物中具清除自由基活性的成分的Rf值为0.80,表明该清除自由基成分也为低极性成分。

西吡氯铵含漱液对两种口腔感染真菌抗菌活性研究

目的:检测0.1%西吡氯铵含漱液对白色念珠菌、热带念珠菌及其部分临床株的抗菌活性。方法:以CLSI推荐的微量肉汤稀释法进行检测。结果:西吡氯铵对白色念珠菌、热带念珠菌均有较好的抑制效果,标准菌株的MIC均为156.25μg/m L;临床菌株的MIC在78.13μg/m L^312.5μg/m L之间。结论:0.1%西吡氯铵含漱液对白色念珠菌和热带念珠菌具有较好的抗菌效果。

利福喷丁联合氟康唑对耐药白念珠菌细胞周期的影响

目的探索利福喷丁(rifapentine)联合氟康唑(fluconazole)对耐氟康唑白念珠菌细胞周期的影响。方法将白念珠菌菌悬液与利福喷丁和(或)氟康唑共同培养12h,碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测空白对照组、利福喷丁组、氟康唑组及利福喷丁与氟康唑联合用药组DNA含量,分析利福喷丁及其联合氟康唑对细胞周期的影响。结果与空白对照组、利福喷丁组及氟康唑组相比,联合用药组G0/G1期DNA含量均减少(P<0.01),G2/M期DNA含量均显著增加(P<0.01)。说明利福喷丁与氟康唑合用时组细胞周期阻滞在G2/M期。结论利福喷丁与氟康唑联合用药时能阻断耐药白念珠菌细胞周期进程,抑制细胞的正常分裂增殖。

海洋放线菌H23-16活性代谢物的提取及其稳定性研究

[目的]为海洋放线菌中抗菌活性物质的提取提供参考。[方法]对海洋放线菌H23-16进行发酵培养,用有机溶剂提取发酵液中的活性物质,并用纸片法测定提取物的抗白色念珠菌活性。[结果]H23-16发酵提取物的抗白色念珠菌活性较强(抑菌圈直径可达21mm);所提活性物质对温度和紫外线较稳定,而对酸碱不稳定。[结论]该研究为新型抗生素的提取分离提供了新途径。

北冰洋来源白色念珠菌拮抗菌株的分离与鉴定

采用涂布平板法、对峙培养法及琼脂扩散法从北冰洋沉积物样品中分离、筛选对白色念珠菌(Canidia albicans)具有良好拮抗作用的菌株,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其抑菌谱进行研究。结果表明,从北冰洋沉积物样品中共分离纯化出314株菌株,其中,4株菌株对白色念珠菌具有明显拮抗作用,且菌株56#拮抗效果最好,抑菌圈直径为(32.14±0.72)mm。菌株56#被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其对大肠杆菌、副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌、屎肠球菌、金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌都有一定的抑制作用,是一株广谱抗菌的海洋微生物。

白念珠菌CaFIG1基因缺失突变株的构建

[目的]研究Ca FIG1基因除参与有性生殖过程外,是否还参与细胞钙稳态等其他功能,对Ca FIG1进行基因敲除。[方法]采用2种方法分别敲除Ca FIG1的2个等位基因,一种通过PCR扩增HIS1敲除盒,另一种通过克隆的手段构建URA3敲除盒。[结果]从白念珠菌RM1000中成功敲除了Ca FIG1双等位基因。[结论]该敲除策略同样适用于其他基因的敲除,提高了基因敲除的效率。

穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散的影响

随着真菌感染日渐增多,白念珠菌的防治成为当前抗真菌感染的重点。该研究拟探讨中药单体穿心莲内酯(AG)对白念珠菌生物膜分散的影响。实验以微孔板结合医用导管片构建白念珠菌生物膜模型,分别通过XTT减低法和平板法发现1 000,500,250 mg·L^(-1)AG能不同程度的影响白念珠菌生物膜分散细胞的活性;以扫描电镜观察导管片残余生物膜形态结构,发现1 000,500,250 mg·L^(-1)AG能剂量依赖性的诱导白念珠菌生物膜的分散,且分散出的细胞以酵母相为主;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测发现AG使HSP90表达上调,使UME6和PES1表达下调。该研究表明AG能一定程度的诱导白念珠菌生物膜分散。

穿心莲内酯衍生物炎琥宁对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响

目的:探讨穿心莲内酯(AG)衍生物炎琥宁(YHN)对大鼠体内白念珠菌生物膜的影响。方法:构建白念珠菌生物膜大鼠皮下导管模型,采用YHN(40,20,10,5,2.5 mg·kg-1)腹腔注射治疗,设氟康唑(FLC)阳性对照组(80 mg·kg-1),7d后计数导管的菌落形成单位(CFU),XTT代谢法评估YHN对体外白念珠菌生物膜的影响;扫描电镜(SEM)观察YHN干预大鼠体内生物膜的形态变化;采用实时荧光定量PCR法检测白念珠菌黏附相关基因ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量。结果:YHN组导管片上CFU明显少于空白组;XTT代谢活性也显示YHN组低于空白组,且呈剂量依赖性;扫描电镜照片显示YHN能显著减少白念珠菌对大鼠体内导管的黏附;qRT-PCR结果显示,YHN可下调ALS1,ALS3,HWP1,EAP1和MP65的表达量。结论:YHN能抑制大鼠体内白念珠菌生物膜。

家蝇抗真菌肽衍生物MAF-1C抗白色念珠菌活性研究

[目的]探究家蝇抗真菌肽衍生物MAF-1C结构特点及抗白色念珠菌活性。[方法]采用氨基酸替代法设计MAF-1A衍生肽MAF-1C,生物信息学分析其理化特性,微量液体稀释法、菌落计数法检测体外抗白色念珠菌活性,扫描电镜观察对菌细胞结构的影响。[结果]MAF-1C为非跨膜阳离子线状多肽,带8个正电荷,二级结构以α螺旋为主。对白色念珠菌具有抗菌活性,MIC、MFC值分别为0.2 mg/m L和0.5 mg/m L,2×MIC浓度的MAF-1C从作用一开始就发挥抗菌作用,其作用后白色念珠菌细胞表面出现明显的凹陷、裂痕,之后细胞皱缩、裂解死亡,并且菌细胞损伤程度与肽浓度及作用时间呈正相关。[结论]MAF-1C结构参数及对白色念珠菌的抗菌活性均显著优于模板肽,对比模板肽改造后的肽阳离子电荷增加了6个,总平均疏水值(GRAVY)由-1.081升高到0.588,不稳定系数由42.27降低到5.83,MIC由0.6 mg/m L降低到0.2 mg/m L,MFC由0.7 mg/m L降低到0.5 mg/m L,其可通过破坏白色念珠菌细胞结构发挥抗菌作用。

穿心莲内酯对白假丝酵母菌菌丝的影响

目的探讨中药有效成分穿心莲内酯(Andrographolide,AG)对白假丝酵母菌菌丝的影响。方法利用稀释涂布法观察AG对固体培养基上白假丝酵母菌菌落形态的影响;倒置显微镜观察AG对白假丝酵母菌芽管及菌丝形态的影响;采用XTT还原法评价AG对白假丝酵母菌菌丝活性的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白假丝酵母菌菌丝形成相关基因SUN41、CSH1以及CaPDE2表达量变化。结果 AG能影响白假丝酵母菌菌落的形态;倒置显微镜观察表明AG能够抑制白假丝酵母菌菌丝及芽管的形成;qRT-PCR检测显示AG能使SUN41和CSH1基因表达下调和使CaPDE2上调。结论穿心莲内酯可能通过影响SUN41、CSH1与CaPDE2基因的表达而抑制白假丝酵母菌菌丝的形成。

念珠菌血症中白假丝酵母的分子流行病学研究

目的探讨念珠菌血症中白假丝酵母的基因分型,了解其流行病学特征。方法收集患者血培养阳性,经科玛嘉显色培养基进行菌株的初步筛选;用扩增真菌的转录间隔间区(ITS区)和核糖体大亚基(26rRNA、D1/D2区)、基因测序对初筛的菌株进行标准的分子生物学鉴定;利用白假丝酵母的七对管家基因多位点序列分型,利用软件分析其亲缘关系。结果各管家基因的等位基因的同一位点可出现多次碱基变异;在管家基因中ACC1基因的碱基变异位点最少,仅4个,而SYA1基因的碱基变异位点最多;16株白假丝酵母可分为10个群,其中一个群由5个菌株构成,2个群都是由2个菌株构成,其他的群都是由一个菌株单独构成。结论白假丝酵母的二倍体序列型都为新发的基因型,未发现流行的克隆株。

5-溴-4-氯吲哚-3-基-N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖苷的合成

首次报道了以β-溴代四乙酰半乳糖和N-乙酰基-5-溴-4-氯-3-羟基吲哚为原料,经过7步化学反应,合成了用于检测白色念珠菌的N-乙酰胺基半乳糖苷酶底物5-溴-4-氯吲哚-3-基-N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖苷,并通过核磁、质谱以及生物测定确证其结构。