19种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病菌的杀菌活性评价

瓜类细菌性果斑病是由西瓜噬酸菌引起的一种种传病害,在生产上的危害极为严重,可造成大面积的减产甚至绝产,但目前在生产中还缺乏有效的防治药剂。为筛选出高效防治细菌性果斑病的杀菌剂,在室内筛选了19种杀菌剂的离体活性成分,并对高活性杀菌剂进行毒力评价和活体盆栽验证。室内研究结果表明,0.3%四霉素水剂等8种杀菌剂离体杀菌活性显著,毒力强度依次为0.3%四霉素水剂>1%申嗪霉素悬浮剂>5%噻霉酮悬浮剂>20%辛菌胺醋酸盐水剂>20%丙硫唑悬浮剂>4%春雷霉素水剂>0.4%蛇床子素水剂>0.5%小檗碱水剂。活体盆栽试验结果表明,0.5%小檗碱水剂、20%丙硫唑悬浮剂、4%春雷霉素水剂和5%噻霉酮悬浮剂这4种药剂对甜瓜细菌性果斑病有较好的防治效果,其中0.5%小檗碱水剂对甜瓜细菌性果斑病的保护和治疗作用最强,在供试质量浓度为100 mg·L^(-1)时的保护和治疗防效分别为79.66%和73.24%。上述研究试验表明,0.5%小檗碱水剂、20%丙硫唑悬浮剂、4%春雷霉素水剂和5%噻霉酮悬浮剂可作为田间防治甜瓜细菌性果斑病的有效候选药剂。

海南省东方市甜瓜细菌性果斑病病原鉴定

细菌性果斑病严重影响甜瓜生产,为确定其病原菌种类,从海南省东方市种植基地采集大量疑似细菌性果斑病的甜瓜样本,进行病原菌分离纯化,并按柯赫法则对获得的菌株进行致病性测定。通过菌落形态观察、生理生化测定及16S rDNA序列比对分析,对分离病原菌进行鉴定。结果表明,大田采集的所有甜瓜病果中均分离到培养性状一致的细菌,细菌分离率为100%;所有分离菌株均对甜瓜果实具有致病性,该病原菌革兰氏反应呈阴性,其菌落形态及生理生化测定结果与已报道的西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)一致;BLAST比对与A. citrulli菌株的同源性可达100%,系统发育分析也进一步证实该病菌为A. citrulli。研究结果确定了甜瓜果斑病的致病菌,为该病的有效防治提供了依据。

哈密瓜细菌性果斑病病原菌鉴定

20 0 0年在内蒙古和新疆的哈密瓜上发现一种新细菌病害—哈密瓜细菌性果斑病 ,从病叶和病果上分离到 33个细菌菌株 ,接种哈密瓜、西瓜和甜瓜后 ,发病症状与自然发病症状完全一致 ,而且从接种病株上又重新分离到了此病原细菌 ,这 33个细菌菌株经柯赫法则证明均为该病的致病菌。各菌株致病力无明显差异。经革兰氏染色反应、菌体形态、培养性状、生理生化反应、细胞化学成分分析(糖、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、mol% G+ C)、DNA- DNA杂交 ,确认该病原菌为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp. citrulli Willems et al. 1992 ) =类产碱假单胞菌西瓜亚种 (Pseudomonaspseudoalcaligenes subsp.citrulli Schaad et al.1978)。该病菌除侵染哈密瓜外 ,人工接种尚能侵染多种葫芦科及番茄。

哈密瓜细菌性果斑病菌快速检测方法的建立

【目的】哈密瓜细菌性果斑病在中国为新发生的病害,其病原菌为燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.Citrulli),危害瓜果造成品质下降。该病为典型的种传细菌性病害,因此种子检疫成为防治此病害的重要手段。【方法】通过实验,将生物学、免疫学和分子生物学检测技术有机结合,建立了一套针对哈密瓜果斑病的种子带菌检测方法Bio-IMS-Real-timePCR。【结果】经过人工模拟种子带菌检测实验,结果表明该方法可成功地检测出1000粒种子中的1粒带菌种子(带菌量约为1.04×105CFU/种子,经计算,可以检测的最初浓度为2CFU·ml-1ASCM培养液),且信号较强。【结论】该检测方法的建立,大大提高了对哈密瓜细菌性果斑病菌检测的精度,也为生产实践中哈密瓜果斑病的防治提供了重要的技术支持。

药物浸种处理防治西瓜嫁接苗细菌性果斑病试验

【目的】筛选防治西瓜嫁接苗细菌性果斑病（BFB）的种子处理有效药剂,为防治BFB提供科学依据。【方法】先以17种药剂的200倍液对西瓜种子进行浸种处理,依据嫁接苗BFB的发病率初步筛选防治BFB的有效药剂;以初选有效药剂进行不同浓度、不同混合组合及不同浸种方法处理对嫁接苗BFB的防治效果试验。【结果】初试结果表明,2%春雷霉素处理西瓜嫁接苗BFB病株率较低,可用于下一步试验。复试结果表明,2%春雷霉素100、200、300、400、500倍液浸种处理有籽西瓜种子,嫁接后12d嫁接苗BFB发病率分别为1.0%、36.7%、94.3%、95.7%、98.1%;2%春雷霉素200倍＋乐无病、72%农用链霉素、72%农用硫酸链霉素800倍液浸种处理有籽西瓜种子,嫁接后12d嫁接苗BFB发病率为1.0%~2.4%;2%春雷霉素100、200、300、400倍液处理西瓜干种子,嫁接后12d有籽西瓜嫁接苗BFB发病率为0.5%~5.7%,无籽西瓜嫁接苗BFB发病率为8.1%~11.4%;2%春雷霉素400倍＋乐无病、72%农用链霉素、72%农用硫酸链霉素1000倍液处理西瓜干种子,嫁接后12d有籽西瓜嫁接苗BFB发病率为1.0%~2.0%,无籽西瓜嫁接苗BFB发病率为6.7%~9.5%。【结论】2%春雷霉素可作为防治西瓜嫁接苗BFB的首选特效药,推荐浓度为2%春雷霉素400倍或以2%春雷霉素400倍搭配其他杀菌剂使用。

哈蜜瓜种子带细菌性果斑病菌检测技术的研究

哈蜜瓜细菌性果斑病是世界性的检疫对象之一 ,主要以种子带菌进行远距离传播 ,本文通过温室育苗、室内分离和PCR(聚合酶链式反应 )技术对哈蜜瓜种子带菌情况和主要带菌部位进行了检验 ,结果表明 :3种方法都可以对种子带菌情况进行检测 ,分离检测和PCR检测还可以确定种子的带菌部位 ,PCR技术具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等特点。另外检测结果也表明种子带菌以种皮为主 ,种仁的带菌量较少。

广西甜瓜细菌性果斑病病原鉴定及16S rDNA序列分析

【目的】对广西区内疑似甜瓜细菌性果斑病的病原菌进行分离鉴定,明确引起该病害的病原菌,为甜瓜细菌性果斑病的抗病育种及综合防治提供理论依据。【方法】分别采集南宁市和贺州市疑似甜瓜细菌性果斑病的病叶(编号:WM0922)和病果(编号:XD0611)样品,对样品进行分离纯化,并通过测定分离菌株的致病性、观察菌落形态和培养性状、测定其生理生化性状及比对分析16S rDNA序列,对供试病原菌进行鉴定。【结果】从编号WM0922的病叶上分离得到5株菌株,经致病性测定有3株菌株(WM0922-2、WM0922-3和WM0922-4)具有致病性;从编号XD0611的病果上分离得到8株菌株,经致病性测定有4株菌株(XD0611-5、XD0611-6、XD0611-7和XD0611-8)具有致病性;择优选取具有代表性的菌株WM0922-3和XD061 1-7进行后续试验,发现二者均可侵染葫芦子叶,革兰氏反应均为阴性,培养性状及生理生化测定结果一致,对比分析16S rDNA基因序列,与Acidororax citrulli的相似性均在99%以上。【结论】引起甜瓜细菌性果斑病的病原菌为燕麦嗜酸菌西瓜亚种(A.avenae subsp.citrulli)。

海南甜瓜细菌性果斑病病原菌鉴定

通过田间采集病样,分离到致病性细菌菌株LD101206,采用柯赫氏法则对分离物进行致病性测定,通过对其形态学、培养性状、生理生化性状和16S rRNA基因序列分析,将菌株LD101206鉴定为燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli Willems)。

干热处理对甜瓜种子活力和细菌性果斑病抑制能力的影响

以厚皮甜瓜品种‘哈密绿’种子为材料,在70℃、75℃和80℃温度下分别处理24h、48h和72h,研究不同干热处理对甜瓜种子活力萌发和生理生化指标变化及细菌性果斑病的防治效果。结果显示:(1)随着处理温度的升高和时间的延长,干热处理甜瓜种子发芽指标和成苗率显著下降,而70℃处理24h和48h对种子发芽指标(活力指数除外)和成苗率无显著影响。(2)与对照相比,干热处理种子胚芽中的SOD活性、可溶性糖和脯氨酸含量升高,在同一温度处理下,SOD活性和可溶性糖含量随着处理时间的延长基本呈增长趋势,脯氨酸含量则随着处理时间的延长呈下降趋势,POD和APX活性以及可溶性蛋白含量变化随着温度的升高和处理时间的延长呈下降趋势;与对照相比,胚芽中CAT活性在70℃处理下降低,而在75℃和80℃处理下升高,但其随着处理时间的延长呈下降趋势;胚芽中O-·2产生速率在70℃和75℃处理下与对照接近,而在80℃处理下随着处理时间的延长呈上升趋势,且均显著高于对照。(3)随着处理温度的升高和时间的延长,甜瓜接菌种子幼苗细菌性果斑病发病率较对照显著降低。研究表明,适宜干热处理温度和时间诱导甜瓜种子中抗氧化酶活性增强,渗透调节物质含量增加,超氧阴离子产生速率降低,种子活力和出苗率有效提高,‘哈密绿’种子有效、安全的干热处理组合为70℃、48h。

不同药剂对海南省甜瓜细菌性果斑病病原菌的室内药效测定

采用含毒介质法对引起甜瓜细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch of melon)的病原菌西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)进行了室内药效测定,评价测定的8种药剂对海南省5个甜瓜主栽区(昌江县、东方市、乐东县、陵水县和三亚市)细菌性果斑病病原菌的抑菌效果,试验结果表明,8种药剂对细菌性果斑病病原菌的抑菌效果各不相同,且相同药剂对不同地区的病原菌抑菌效果也不同,其中,噻霉酮对细菌性果斑病病原菌的抑菌效果最好,抗生素类药剂的抑菌效果普遍较好,如农用链霉素、中生菌素和春雷霉素,而氢氧化铜和琥胶肥酸铜等铜制剂室内效果最差。该试验筛选的对西瓜嗜酸菌(A.citrulli)抑菌效果较好的药剂,可为细菌性果斑病的防治提供参考。

云南省瓜类细菌性果斑病的鉴定

瓜类细菌性果斑病(BFB)是严重危害葫芦科作物的细菌病害。2009—2010年,通过田间调查,发现云南西双版纳州和普洱市部分地区的西瓜(Citrullus lanatus)和甜瓜(Cucumis melo)上出现疑似瓜类细菌性果斑病病害发生。通过菌株分离纯化、菌体形态和菌落形态特征、革兰氏染色、致病性测定、微生物鉴定系统测定、分子鉴定等方法进行诊断鉴定,结果表明获得的yn2和yn3菌株与西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli)的特征一致。确定了云南省已有瓜类细菌性果斑病分布,为云南省首次报道。

甜瓜细菌性果斑病生防菌株BW-6的筛选和鉴定

甜瓜细菌性果斑病是由西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli Schaad et al.)引起的一种毁灭性病害。本研究以西瓜嗜酸菌为指示菌,采集97个土样,采用土壤稀释平板法和对峙培养进行拮抗菌的分离和筛选,获得19株细菌可以抑制西瓜嗜酸菌生长。通过离体叶片、盆栽试验进行生测,BW-6菌株对甜瓜果斑病的生防效果最好,且比较稳定,防效达80.3%。在甜瓜叶面进行室外定殖试验表明,BW-6菌株可以在甜瓜叶面上大量定殖,但随着时间的推移菌数逐渐减少。根据菌株BW-6的形态特征、生理生化特性以及16SrDNA序列分析综合考察,鉴定其为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis Cohn)。

精制山杏壳木醋液对甜瓜细菌性果腐病的防治效果

以精制山杏壳木醋液为试材,采用抑菌圈法与盆栽验证法,测定了不同浓度精制山杏壳木醋液对甜瓜细菌性果腐病菌的防治效果。结果表明:5.0%精制山杏壳木醋液不仅可以有效抑制甜瓜细菌性果腐病病原菌,而且可促进甜瓜幼苗的生长;10.0%的精制山杏壳木醋液与硫酸链霉素0.33mg·mL^(-1)对甜瓜种子萌发和杀菌效果相当,而高浓度精制山杏壳木醋液浸种会产生药害。

甜瓜细菌性果斑病病原菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析

从新疆昌吉甜瓜实验田中采集发病甜瓜样品12份,对甜瓜细菌性果斑病病原菌进行分离纯化,并根据形态观察、致病性测定得到甜瓜细菌性果斑病病原菌1株。以该菌总DNA为模板,采用细菌16S rDNA通用引物进行聚合酶链式反应扩增,并克隆到pGM-T载体,测序结果表明:克隆的16S rDNA序列长度为1 493 bp,通过GenBank上序列比对搜索工具分析,并构建系统发育树,对该菌株进行鉴定,结果表明该菌属于Acidovorax avenae subsp.citrulli Willems(Aac),即燕麦嗜酸菌西瓜亚种。

甜瓜种子细菌性果斑病菌PCR检测方法的研究

以携带细菌性果斑病菌(Acidovoras avenae subsp.citrulli)的甜瓜种子为材料,比较了不同引物、不同种子处理方式、不同浸提液及不同提取时间对细菌性果斑病菌PCR及实时荧光定量PCR检测结果的影响.结果表明:以完整带菌种子浸提液为模板进行PCR扩增,操作最简单且特异条带亮度最高,“种壳+种仁”处理次之,而以磨碎种子浸提液为模板,未能扩增出特异条带.以无菌水作为浸提液的PCR扩增效果明显优于磷酸缓冲液和液体KB培养基,浸提时间以3-12 h为宜.实时荧光定量PCR检测结果与普通PCR一致.在3对特异引物中,引物BX-L1/BX-S-R2的普通PCR扩增效果最佳,引物SEQID4m/SEQID5更适用于实时荧光定量PCR检测.

瓜类细菌性果斑病菌突变体文库的构建及群体感应信号分子突变株的筛选

利用三亲杂交的方法将带卡那抗性的Mini-Tn5转座子随机插入瓜类细菌性果斑病菌xjl12基因组DNA中,构建插入不同位点的突变体文库,通过信号分子高效检测菌株JZAI,筛选群体感应信号分子失活突变株。挑取2株野生株和筛选出的4株突变株,进行Southern杂交,结果表明,转座子Mini-Tn5以单拷贝随机诱变瓜类细菌性果斑病菌获得成功;对筛出的4株突变株进行了致病性和烟草过敏反应测试,发现突变株明显降低了致病性,且2株突变株(5-17,2-57)在烟草上无过敏反应。瓜类细菌性果斑病菌突变体文库的成功构建及筛选到不同突变位点的群体感应信号分子失活突变株,对从基因水平研究瓜类细菌性果斑病菌致病分子机理及群体感应相关基因奠定了基础。

防治甜瓜细菌性果斑病种传病原菌的杀菌剂筛选

选择16种杀菌剂对甜瓜细菌性果斑病菌进行抑菌环试验,筛选到5种具有不同程度抑菌效果的杀菌剂,并选用其中抑菌效果较好的3种杀菌剂(杀菌剂1号200倍液、萎锈·福美双100倍液和0.3%四霉素250倍液)处理甜瓜带菌种子。结果表明:杀菌剂处理后,PCR检测结果仍为阳性,但在杀菌剂1号200倍液处理的甜瓜带菌种子中未分离到致病活菌,0.3%四霉素250倍液处理后种子的带菌量明显减少,而萎锈·福美双100倍液则无明显杀菌效果。杀菌剂1号200倍液和0.3%四霉素250倍液处理对种子发芽无明显影响,而苗期发病率与对照相比均显著降低。

不同药剂对瓜类幼苗细菌性果斑病防治效果比较

以甜瓜和籽用西瓜为试材,设2种自主研发配制的新型杀菌剂BX6、九醋酮和3种有抑菌作用的药剂苏纳米(Tsunami)、过氧乙酸、双氧水为处理,采用人工接种细菌性果斑病菌后喷施药剂和喷施药剂后再人工接菌2种处理方式,调查研究供试药剂防治后瓜类幼苗的发病情况及防治效果,为农业生产中预防和防治瓜类细菌性果斑病提供参考依据。结果表明:双氧水(1∶25)对甜瓜和籽用西瓜幼苗细菌性果斑病均具有较好的抑菌效果,保护和治疗作用较好,2种处理方式的防治效果分别为87.4%、84.5%和60.5%、74.5%;苏纳米(1∶25~1∶75)、过氧乙酸(1∶25~1∶50)对甜瓜和籽用西瓜幼苗期均具有较好的预防保护效果;2种处理防治效果最高分别为78.3%、80.4%和63.5%、81.6%;BX6(1∶8)对甜瓜和籽用西瓜幼苗具有较好的治疗效果,防治效果分别为61.3%和66.9%。

海南甜瓜细菌性果斑病田间药效试验

进行了5种药剂防治甜瓜细菌性果斑病田间药效试验。试验结果表明，第二次施药后7d,5种药剂处理中以20％二氯异氰尿酸钠可湿性粉剂750倍液的防效最好，为65．47％，其次为53．8％可杀得（氢氧化铜）2000干悬浮剂800倍液，防效为56．45％；25％叶枯唑可湿性粉剂750倍液、72％农用链霉素可溶性粉剂3000倍液和12％松脂酸铜乳油800倍液3个处理的防效分别为51．60％，50．86％和50．20％。上述药剂在生产上可轮换使用，5d1次，连续2—3次。

干热处理甜瓜、籽瓜细菌性果斑病种子对幼苗发病的影响

为了筛选出对防治甜瓜、籽瓜细菌性果斑病有效、安全的干热处理方式,对人工接种细菌性果斑病的甜瓜、籽用西瓜种子进行不同温度及不同时间的干热处理,经种植鉴定,观测比较了不同处理的出苗率、果斑病病情指数及防治效果。结果显示:对甜瓜带菌种子有较好的防治效果的处理是60℃处理6、8 d,防治效果为85.6%;65℃处理6 d,防治效果为85.0%。对籽用西瓜带菌种子防治效果较好的处理是60℃处理12 d,防治效果为86.5%;65℃处理12 d,防治效果为83.0%。