中药复方AC_(960)对人肝癌细胞p21^(ras)、bal-2、P^(53)基因表达调控作用的研究

目的：研究中药复方ＡＣ９６０对人肝癌细胞基因、抑癌基因表达的影响，探讨其抗癌作用机制。方法：ＡＣ９６０灌胃给药后，采集大鼠血清，处理人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期和ｐ２１ｒａｓ、ｂａｌ－２、Ｐ５３基因蛋白表达。结果：ＡＣ９６０具有显著抑制 ＳＭＭＣ－７７２１细胞增殖和促进细胞凋亡作用，细胞周期分析，ＤＮＡ直方图上见典型凋亡峰，２４ｈ时为２１．２５％，４８ｈ时为２７．７７％，早期（２４ｈ）Ｓ期细胞比例增加，Ｇ２／Ｍ期减少，后期（４８ｈ），Ｇｏ／Ｇ１期细胞增多，Ｓ期减少。Ｐ５３、ｂａｌ－２、ｐ２１ｒａｓ在 ＳＭＭＣ－７７２１细胞中都有不同程度表达，ＡＣ９６０处理后，Ｐ５３表达增强，ｂｃｌ－２、ｐ２１ｒａｓ表达降低。结论：抑制癌基因、增强抑癌基因表达，阻断细胞增殖周期，抑制人肝癌细胞增殖，促进癌细胞凋亡可能是ＡＣ９６０抗肝癌主要作用机制。

多形性腺瘤及恶变组织中bal-2表达

采用免疫组化方法，观察ｂｃｌ－２（Ｂｃｅｌｌｙｍｐｈｏｍａ－２）基因产物在多形性腺瘤及其恶变组织中的表达与分布，以图像分析仪进行计数分析。结果显示肿瘤组织中以导管样上皮细胞、粘液样细胞以及软骨样细胞的阳性表达较高，而鳞状上皮团块中，ｂｃｌ－２表达极低。各组阳性病例比例：对照组５例慢性诞腺炎为８０％（４／５），１５例多形性腺瘤为８０％（１３／１５），７例多形性腺瘤恶性病变为８６％（６／７）。图像分析仪计数阳性细胞显示慢性诞腺炎为５％，多形性腺瘤为４２％，而恶性病变为５７％，统计与分析表明良性及恶性多形性腺瘤与对照组比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５），而良性和恶性组间，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。

镉对16HBE细胞凋亡及Bal-2、Bax基因表达影响

目的探讨镉恶性转化人支气管上皮细胞(16HBE细胞)过程中细胞凋亡状况以及Bal-2和Bax表达变化。方法采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞不同阶段(第5、15、35代细胞及成瘤细胞)的细胞凋亡和Bal-2和Bax基因mRNA表达情况。结果 16HBE细胞和恶性转化细胞系第5、15、35代细胞及成瘤细胞的凋亡率分别为0.65%、1.14%、1.87%、3.78%和4.93%;细胞的Bal-2和Bax的mRNA表达量分别为(9.067±0.155)、(8.183±0.206)、(5.971±0.015)、(4.533±0.030)、(4.863±0.066)和(5.973±0.026)、(6.012±0.112)、(6.659±0.028)、(7.032±0.045)、(7.519±0.022),随着转化代数增加,Bal-2 mRNA表达量逐渐降低,Bax的mRNA表达量逐渐上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中能引起细胞凋亡,抑止Bal-2基因的表达和上调Bax基因表达。

大剂量甲泼尼龙对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞bcl-2、bax及凋亡的影响

目的观察大剂量甲泼尼龙治疗对大鼠受损脊髓神经细胞凋亡及凋亡基因表达的影响。方法选取48只雌性SD大鼠随机等分为二组,对照组与治疗组。按Nystrom和Berglund法造大鼠急性脊髓损伤(ASCI)模型制模,分别于伤后4h,8h,1d,3d,7d和14d时从二组中各随机选取4只动物灌注固定后取材。免疫组织化学检测损伤段脊髓内bcl-2和bax蛋白表达,TUNEL检测细胞凋亡,染色结果应用图像分析仪进行半定量分析。结果大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后4h即可见脊髓内TUNEL阳性细胞,8h表达达高峰,此后表达量逐渐下降,14d时仍可见少量阳性细胞。凋亡相关蛋白bcl-2和bax,伤后1d时达高峰,14d时仍有表达。与对照组相比,治疗组中8h,1d和3d时间点凋亡细胞数减少有统计学意义,8h和1d时bcl-2蛋白表达增高及bax蛋白表达减少有统计学意义。结论大鼠ASCI后,大剂量甲泼尼龙治疗可通过改变损伤段脊髓内凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达,从而减少神经细胞凋亡的发生。

肾衰康灌肠液含药血清对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及对Caspase-3、Bax、Bcl-2mRNA表达的影响

目的观察肾衰康灌肠液含药血清对缺氧/复氧损伤肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡的抑制作用,并探讨其对缺氧/复氧损伤HK-2细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响。方法将家兔随机分为空白组、PBS组、肾衰康组,予相应灌肠3 d后取血清,分别制备含空白血清、PBS血清、25%肾衰康灌肠液含药血清、50%肾衰康灌肠液含药血清、75%肾衰康灌肠液含药血清,利用各组血清分别处理缺氧/复氧损伤HK-2细胞。利用ROS荧光探针检测缺氧/复氧损伤情况,利用CFSE/PI、流式细胞术检测细胞凋亡情况;利用RT-PCR检测各组HK-2细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2基因表达情况。结果与造模前相比,造模后细胞内ROS荧光强度增强,提示造模成功。CFSF/PI结果显示,与模型组相比、PBS组,肾衰康各组细胞凋亡明显被抑制,呈剂量依赖性。流式细胞术结果显示,与对照组[4 h,(42.7±3.5)%;12 h,(41.9±2.2)%]、PBS组[4 h,(40.9±1.2)%;12 h,(39.8±0.7)%]比较,肾衰康各组凋亡/死亡率明显被抑制(P<0.05),低剂量组[4 h,(18.5±0.2)%;12 h,(17.3±0.3)%]、中剂量组[4 h,(13.2±2.1)%;12 h,(14.1±0.6)%]、高剂量组[4 h,(10.7±0.1)%;12 h,(12.2±0.9)%]。RT-PCR结果显示,与对照组、PBS组比较,肾衰康各组Caspase-3、Bax mRNA表达明显被抑制(P<0.05),Bcl-2mRNA表达明显增加(P<0.05),以高剂量组明显。结论肾衰康灌肠液可以有效改善HK-2细胞缺氧/复氧损伤作用,其机制与下调促凋亡基因Caspase-3、Bax表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。

羊水过少孕妇血清中表皮生长因子与胎盘Bcl-2、Bax基因表达关系的初步研究

目的探讨羊水过少病例中母血及脐血中表皮生长因子(EGF)与胎盘组织中凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的联系。方法放射免疫分析法测定羊水过少组12例母血、脐血EGF浓度,以同期正常足月妊娠12例为对照组。荧光定量PCR及免疫印迹法检测羊水过少组与正常对照组中胎盘中Bax、Bcl-2基因差异。结果①羊水过少组母血、脐血EGF浓度与对照组比较明显减少(P<0.01)。②羊水过少组胎盘中Bax的表达与正常组相比都明显上升,Bcl-2表达与正常组相比都明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);羊水过少组胎盘中的Bax与Bcl-2的比值(Bax/Bcl-2)与正常组相比明显上升,差异有统计学意义(P<0.01)。③羊水过少组母血、脐血EGF与胎盘组织中Bcl-2呈正相关,与Bax表达无相关性。结论母血、脐血EGF减少可能是引起羊水过少的原因之一。羊水过少组胎盘组织中Bcl-2表达下降,Bax表达增高,EGF可以通过上调Bcl-2的表达,抑制胎盘细胞凋亡所引起的羊水减少。

(2+1)维Zoomeron方程的新精确解

利用广义代数方法,得到了Zoomeron方程许多精确解,包括双曲函数解、三角周期解,有理函数解、雅可比椭圆函数解等.

钾离子通道开放剂二氮嗪对胰岛细胞凋亡以及凋亡相关基因的表达

目的探讨钾离子通道开放剂(二氮嗪)对糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡以及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导胰岛细胞凋亡。将实验用SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和二氮嗪治疗组(DIA组),治疗4周。观察大鼠的一般状况,监测体重(Weight)、空腹血糖(FPG),摄食量的变化、OGTT的变化。使用TUNEL检测胰岛细胞的凋亡,使用免疫组化法检测bcl-2、bax的含量。结果①与NC组比较,DM组大鼠体重明显下降(P<0.05),四周末时OGTT试验在0'、120'时血糖均上升、bcl-2的表达明显下降而bax的表达则明显升高(P<0.01),胰岛细胞的凋亡也是明显增多的(P<0.05)。②与DM组比较,DIA组大鼠体重下降(P<0.05),四周末时OGTT试验在0'、120'时血糖下降以及bcl-2的含量明显升高(P<0.01),而bax的表达则明显下降(P<0.05),胰岛细胞的凋亡也是减少(P>0.05)。结论二氮嗪通过开放钾离子通道,明显改善糖尿病大鼠的OGTT,降低体重并且上调bcl-2,下调bax,从而减少胰岛细胞的凋亡,对胰岛细胞具有保护作用。

亚低温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤后神经细胞凋亡的治疗时间窗研究

目的本研究通过观察大鼠全脑缺血-再灌注损伤后不同时间段亚低温对Bcl-2、Bax表达及二者比值的影响,探讨亚低温的保护作用及最佳治疗时间窗。方法 Wistar雄性大鼠随机分为对照组及亚低温组。亚低温组根据亚低温时点不同分为缺血后、再灌注0、6、12、24h 5个亚组。采用四条血管阻断方法(Puisinelli-4VO法)制备大鼠全脑缺血-再灌注模型,流式细胞仪对海马组织的Bcl-2、Bax蛋白的表达进行测定。结果亚低温可使大鼠海马细胞的Bcl-2表达增高、Bax表达降低,以再灌注后0 h亚低温效果最佳,随再灌注时间延长,效果下降。结论亚低温可有效干预大鼠全脑缺血-再灌注损伤后神经细胞的凋亡,且最佳治疗时间窗为再灌注后0h,但再灌注24h也有一定疗效。

亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的干预研究

目的探讨亚低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的影响。方法选取成年雄性健康清洁级Wistar大鼠42只,随机分为假手术组、对照组及亚低温组。亚低温组和对照组采用大鼠4条血管阻断全脑缺血模型(Pulsinelli-4VO法)制备大鼠全脑缺血再灌注模型,假手术组仅切开颈部皮肤和肌层暴露双侧椎动脉和颈动脉,不行椎动脉凝闭和颈总动脉夹闭。假手术组和对照组置于室温下,亚低温组给予亚低温处理。采用流式细胞仪对海马神经元Bcl-2、Bax表达进行测定。结果假手术组、对照组及亚低温组神经元凋亡百分率及增殖指数比较,差异均有统计学意义(F=142.869,P<0.01;F=153.993,P<0.01)。假手术组Bcl-2、Bax表达(均道值)微弱,在此忽略;对照组Bcl-2、Bax表达(均道值)与亚低温组比较,差异均有统计学意义(t值分别为63.747、28.803,P<0.01);两组Bcl/Bax比值比较,差异亦有统计学意义(t=9.601,P<0.01)。结论全身亚低温可有效干预大鼠全脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡,其机制与Bcl-2、Bax的表达有关,受到二者比值的调控。

过度疲劳状态模型大鼠心脏功能及心肌细胞凋亡调控因子的变化

背景:力竭运动是超出人或动物生理极限的运动,强烈的运动刺激会打破机体原有的稳态,从而引起一系列应激反应,过度应激会出现损伤和功能异常。目的:通过大鼠心肌细胞运动性疲劳模型分析导致运动性心脏猝死的相关因素。方法:130只SD大鼠购自成都达硕生物科技公司。随机选取7只大鼠作为空白组对照,其余大鼠为疲劳模型,对大鼠进行游泳训练,每36 h训练1次,连续训练致过度疲劳。建模成功后出现超量恢复的负叠加状态即为过度疲劳状态,并分别训练3×36 h,6×36 h,9×36 h后,随机处死各7只大鼠,分别记录为疲劳组A组,疲劳组B组和疲劳组C组;训练过程中或训练结束24h死亡的大鼠(排除因呛水死亡的大鼠)记为运动性猝死组。TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡;免疫组织化学方法心肌组织Bax、Bcl-2表达;苏木精-伊红染色观察细胞形态变化。结果与结论:①在猝死组中,心肌纤维与其余组相比较为纤细,部分肌纤维出现断裂,血管极度扩张,心肌出现严重坏死伴随充血出血;②疲劳组及猝死组心肌细胞凋亡指数、心肌细胞凋亡数量都出现明显的增长(P <0.05);③当处于过度疲劳状态时,大鼠心脏组织中的促凋亡蛋白数量明显增加(P <0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降(P <0.01);④结果提示,连续训练而导致大鼠处于过度疲劳状态,会引发大鼠心肌细胞形态结构方面的变化,甚至导致损害,此时心肌组织中所含有的Bcl-2和Bax蛋白会出现异常表达情况。由于心肌细胞受到损害而导致心肌细胞凋亡,数量明显减少,进而影响整体心脏的结构以及功能,最终导致心源性运动性猝死。

耳壳藻内酯对肿瘤细胞的凋亡作用及其机制的研究

目的:研究合成耳壳藻内酯诱导细胞凋亡作用及其作用机制,探讨化学合成高效海洋药物前导化合物的可能途径。方法:Western blot检测细胞周期调控因子及细胞凋亡相关蛋白的表达;通过流式细胞仪流式细胞术检测细胞周期变化;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:(±)耳壳藻内酯-1能够显著抑制Bcl-2蛋白的表达,对突变体P^(53)蛋白表达无显著影响。经(±)耳壳藻内酯-1处理细胞G_0/G_1期细胞数显著增加,且有量效依赖关系。(±)耳壳藻内酯-1经体内给药,S_(180)肿瘤细胞显示有DNA梯状分布。结论:(±)耳壳藻内酯-1能够阻滞细胞周期的进程,启动细胞自身的调控蛋白的表达,诱导细胞调亡,从而达到抗肿瘤的作用。