香蕉茎尖遗传转化法研究

通过对多茎尖繁殖方法和转基因研究，建立了香蕉茎尖外源基因的遗传转化方法。明确了卡那霉素或Ｇ－４１８在转化植株中所使用的合适浓度，即当使用卡那霉素时，其产梢的浓度为 １００ ｍｇ／Ｌ，导根的浓度为 １５０ ｍｇ／Ｌ；但当使用 Ｇ－４１８时，其产梢浓度则为 ２５ ｍｇ／Ｌ，其导根浓度则为 ３０ ｍｇ／Ｌ或３５ ｍｇ／Ｌ。通过基因枪和农杆菌共培养法尝试将黄瓜花叶病毒的衣壳蛋白基因转化香蕉组织，其结果表明：经过卡那霉素或Ｇ－４１８的筛选，仅有 ５％－７％的芽能够存活下来。通过选择性继代培养，最后获得了７３株转化植株；对其中的２４株进行ＰＣＲ检测，结果表明阳性率达 ８３．３％；进一步的 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表明：ＰＣＲ检测阳性的８１．８％植株含有外源衣壳蛋白基因。

葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化

葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。

烤烟栽培品种G－28、K326抗病毒遗传转化的研究

用携带植物抗病毒基因表达载体ｐＥＣ２３和ｐＲＣＰⅠ的农杆菌转化云南烤烟栽培品种Ｇ－２８和Ｋ３２６，获得了大量转基因植株，载体质粒ｐＥＣ２３上有卡那霉素抗性标记基因（ＮＰＴⅡ）和ＣａＭＶ３５ｓ启动子控制的烟草花叶病毒（ＴＭＶ）５４ＫＤ蛋白基因，ｐＲＣＰⅠ上则有卡那霉素抗性标记基因（ＮＰＴⅡ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）外壳蛋白基因、ＣＭＶ卫星ＲＮＡ基因，品种Ｇ－２８、Ｋ３２６的叶片与携带载体质粒的农杆菌共培养后，将其按品种分别转移到含６０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌＫｍ的ＭＳ＋０．２ｍｇ／ｌＮＡＡ＋２．０ｍｇｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ｌＫＴ培养基上培养筛选，２～３周后分化出芽，切下小芽分别转移到含６０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌＫｍ的ＭＳ＋０．２ｍｇ／ｌＮＡＡ的培养基上进一步筛选并使转化体生根，再对生根植株叶片进行抗性鉴定，结果表明，至少Ｋｍ抗性标记基因（ＮＰＴⅡ）已转入烤烟植株。

TYLCV外壳蛋白基因植物表达载体构建及转化番茄的研究

以"特大瑞光"番茄为受体植物,采用农杆菌介导法,将含有番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白(TYLCV-CP)基因的植物表达载体pCAMBIA3301转入番茄子叶外植体,对获得的13株草胺膦抗性番茄植株进行PCR和Southern Blot技术检测。结果表明:有10株呈阳性检测反应,说明TYLCV-CP基因已整合到番茄基因组中,阳性率为76.9%;番茄转基因植株较非转基因植株对番茄黄化曲叶病毒的抗性明显增强。