厚朴中总鞣质提纯工艺及抗菌活性研究

通过响应面设计优化厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)中总鞣质的提取工艺,并进一步纯化。结果表明,厚朴中总鞣质的最佳提取工艺为料液比1∶13、提取时间100 min、乙醇浓度80%、超声功率80 W,厚朴总鞣质提取量为0.1810 mg/g,与理论值0.1888 mg/g差距小。利用正交试验考察明胶溶液沉淀法对厚朴总鞣质的最佳纯化工艺为浓缩液比重1.5 mg/mL、明胶溶液浓度4%、明胶溶液添加量8 mL/100 mg,厚朴总鞣质提取量为2.743 mg/g。利用最小抑菌浓度测定法比较总鞣质对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抗菌活性,表明厚朴中总鞣质具有一定的抗菌活性。

高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚

建立了高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚的新方法,溶剂系统为石油醚乙酸乙酯甲醇1%醋酸(5∶5∶7∶3,V/V),上相为固定相,下相为流动相。从100mg厚朴粗提物制得和厚朴酚33.3mg,厚朴酚19.5mg,经高效液相色谱分析,纯度均大于99.5%,其化学结构由1HNMR和13CNMR鉴定。

湖北恩施产厚朴ISSR指纹图谱构建

目的:构建湖北恩施产厚朴的ISSR指纹图谱。方法:采用ISSR标记技术对厚朴基因组DNA进行PCR扩增。结果:2个ISSR引物即可构建恩施产厚朴的ISSR指纹图谱。引物ISSR826的扩增产物中可见构建恩施产的厚朴特征带,分子量为950 bp及550 bp。结论:ISSR标记技术可用于区分厚朴药材产地和品种。

凹叶厚朴中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的成分

凹叶厚朴是四川省人工栽种的一种用途广泛的常用中药.在发现凹叶厚朴乙醇提取物具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性基础上,通过活性跟踪,对该提取物进行了分离,发现其中的生物碱显示了较强的抑制活性.通过溶剂萃取、树脂吸附和反复硅胶柱层析等分离方法从凹叶厚朴乙醇提取物中分离得到6个生物碱,用质谱和核磁共振等波谱方法分别鉴定为木兰箭毒碱,木兰花碱,鹅掌楸碱,蕃荔枝碱,罗默碱和Lysicamine,并应用小肠α-葡萄糖苷酶模型测定了它们对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.其中,番荔枝碱和木兰箭毒碱的抑制活性较好,分别为60%和62%;其它4个生物碱成分活性几乎相当,鹅掌楸碱为46%,罗默碱为51%,Lysicamine为49%,木兰花碱为51%.

四川规模化栽培区产厚朴有效成分含量的影响因素研究

目的:研究厚朴有效成分含量与胸径、树高、树皮厚、海拔、经度之间的关系,为厚朴良种选育提供理论基础。方法:以四川西南地区规模化栽培区产厚朴的树皮为研究对象,采用HPLC法检测厚朴酚与和厚朴酚含量,比较不同地区间的质量差异,同时统计分析影响厚朴有效成分含量的关键因素。结果:5个栽培区产厚朴的厚朴酚含量在1.72%~2.70%之间,和厚朴酚含量在1.42%~3.23%之间,总酚含量最高的地区为都江堰(5.16%),最低的地区为汶川(3.69%);厚朴有效成分含量与其胸径、树高、树皮厚、海拔、经度均具有一定相关性。结论:四川西南地区规模化栽培区产厚朴品质较好,其有效成分含量较高;厚朴总酚含量与胸径、树高、树皮厚呈正相关;厚朴酚与海拔呈正相关,和厚朴酚与海拔、经度呈负相关。

川厚朴愈伤组织培养的初步研究

采用川厚朴顶芽、茎段、叶柄、叶片为外植体,采用正交设计研究不同激素及浓度组合对外植体的影响,筛选出最佳启动培养基为B5+2,4 D3 0mg·L-1(单位下同)+NAA0 5mg·L-1。川厚朴顶芽为最佳取材外植体。继代培养基配方为B5+2,4 D3 0mg·L-1+NAA0 1mg·L-1。

厚朴内生真菌的研究(Ⅰ):菌种分离及其鉴定

从两个不同来源的厚朴Magnolia officinalisRehd.etW ils.的茎中,分离获得内生真菌48株,经显微形态观察,鉴定为1纲、3目、6科、16属。不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异。

厚朴过氧化物酶的纯化、性质及清除双酚A特性研究

厚朴为鄂西南道地药材,其药用部位主要为干皮和枝皮,在其漫长生长过程中产生的大量叶片不能实现经济价值;我们前期研究发现厚朴叶片具有较高过氧化物酶活性,而过氧化物酶在酚类物质生物降解途径中能够发挥重要作用。为充分开发厚朴叶的经济价值,进一步提高资源综合利用效率,我们对厚朴叶过氧化物酶进行了纯化并初步研究了其性质;在此基础上,进一步研究了厚朴叶过氧化物酶在降解环境污染物双酚A上的特性。结果显示,经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析,从厚朴叶中分离提纯过氧化物酶,纯化倍数为52.8倍,回收率为14%。该酶的比活力为184140 U/mg蛋白,最适p H为6.0,对H_2O_2的Km值为4.23mmol/L,对愈创木酚的Km值为57.86 mmol/L,最适温度为80℃,热稳定性较好,75℃以下不易失活。其活性受到硫酸亚铁明显抑制。厚朴叶POD对BPA具有良好清除能力,在p H 4～9,温度25～65℃,H_2O_2/BPA浓度之比为0.8条件下,经过3 h,4000 U/L POD对0.2 mmol/L BPA清除率可达95%以上,MLP在酚类物质生物降解途径中具有潜在的重大利用价值。

不同遮光处理对平茬后厚朴萌蘖株部分形态及生理指标的影响

以自然光照(遮光率0.0%)为对照,对遮光率20.0%、52.5%和78.6%条件下平茬后厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils)萌蘖株的部分形态和生理指标进行比较。结果表明:随遮光率提高,3个遮光处理组萌蘖株的株高呈现逐渐增大的趋势,萌蘖株叶中的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素和总叶绿素含量也基本上呈现逐渐增大的趋势,但萌蘖株的地径却呈现逐渐减小的趋势。萌蘖株的冠幅,单桩的萌蘖株数、叶片总数和叶芽总数,叶长和叶宽,单叶的干质量和叶面积,叶中叶绿素a含量与叶绿素b含量的比值(Chla/Chlb)和可溶性糖含量均在遮光率52.5%条件下最大,但仅冠幅、单桩叶片总数、单叶面积和叶中可溶性糖含量显著大于对照,分别较对照增加156.21%、28.18%、129.02%和64.31%;并且,多数指标在遮光率20.0%条件下居中、在遮光率78.6%条件下最小。然而,萌蘖株的叶长宽比、比叶质量及叶的相对含水量和可溶性蛋白质含量则在遮光率52.5%条件下最小,但仅比叶质量显著小于对照,较对照减少37.43%;并且,多数指标在遮光率20.0%条件下居中、在遮光率78.6%条件下最大。研究结果显示:适当的遮光处理能够促进平茬后厚朴萌蘖株的生长,遮光率52.5%为最优的遮光处理条件。

厚朴的任意引物PCR指纹图谱分析

目的 鉴别中药材厚朴、凹叶厚朴及其常见的伪品和混淆品。方法 采用任意引物 PCR (arbitrarilyprim ed PCR,AP- PCR)技术扩增植物基因组 DNA样品。结果 AP- PCR技术获得清晰可靠的 DNA指纹图谱 ,根据琼脂糖凝胶上显示的 DNA带型差异可迅捷地区分厚朴、凹叶厚朴及其伪品、混淆品。结论 为应用 AP- PCR技术在分子水平上鉴别中药材厚朴 ,保证引种的准确性奠定了基础。

凹叶厚朴扦插繁殖的生根机理研究

为了探索凹叶厚朴扦插生根的方法及其生根机理,促进凹叶厚朴优良无性系的快速推广栽培。以半木质化枝条为插条,依据单因素试验结果,设计L9(34)正交试验,优化扦插生根配方;定期采集插条下段,测定其韧皮部内的营养物质的含量及氧化酶的活性变化;定期采集插穗下部制作石蜡切片,观察生根部位及发生过程。凹叶厚朴的最佳扦插生根配方为:以泥炭土:珍珠岩:黄沙(1:1:1)为基质,用KIB A1000mg/L浸泡30min,生根率可达94.4%;生根过程中,用KIBA浸泡的插条与对照相比,其内的营养物质含量及PPO及POD活性的变化规律相同,但试验组各项峰值到达的时间比要对照早10天,对应的生根时间也早10天;PPO及POD活性最高值达到时间与生根时间相符;凹叶厚朴的不定根产生有潜伏型根原基和诱导型根原基两种类型,潜伏型根原基存在于幼茎的皮层外方,诱导型根原基存在于皮层叶隙维管束的外方,不定根的形成主要以诱导型根原基为主。

基于代谢组学的厚朴与枳实配伍减毒机制分析

目的利用1H NMR为基础的代谢组学研究厚朴及厚朴配伍枳实的肝肾毒性。方法 18只大鼠随机分成3组:空白组、厚朴组和厚朴枳实组。以1H NMR为基础的代谢组学分析空白组、厚朴组和厚朴枳实组大鼠尿液和血清样品代谢轮廓,同时进行肝、肾组织病理学检查。结果厚朴组和空白组样品代谢轮廓具有明显差异,厚朴枳实组的代谢轮廓同空白组样品接近,肝、肾组织病理学检查同时证实了数据分析。结论厚朴与枳实配伍使用能够有效减少厚朴对肝肾所产生的毒性。

厚朴离体叶片衰老过程的生理生化测定

随着厚朴叶片离体衰老时间的延长,蛋白质,叶绿素含量明显下降,质膜透性增加。与自由基代谢有关的超氧物歧化酶活性在叶片衰老过程中不断下降,表明自由基代谢失调引起的膜脂过氧化的加剧是厚朴叶片衰老的重要原因之一。高温加速厚朴叶片的衰老进程,而营养液则延缓了厚朴叶片的衰老。

高效液相色谱法测定厚朴中7种代谢产物含量

[目的]采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定厚朴(Magnolia officinalis Rend.et Wils.)中7种代谢产物含量。[方法]色谱条件:Shim-pack CLC-ODS色谱柱(150mm×6mm,5μm);检测波长:320和294nm;流动相:A相为乙腈,B相为0.1%甲酸,采用梯度洗脱。[结果]峰面积(y)对绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、厚朴酚和和厚朴酚对照品溶液浓度(x)的回归方程分别为:y=1E+05x-306360(r=0.9998)、y=5E+04x-79920(r=0.9994)、y=5E+04x-55280(r=0.9999)、y=5E+04x-60530(r=0.9999)、y=2.5E+04x-57010(r=0.9998)、y=2E+04x+7102(r=0.9999)和y=2E+04x+11028(r=0.9999),各对照品溶液在3.125～100.00μg/ml内与峰面积有良好的线性关系。绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、厚朴酚和和厚朴酚对照品的加样回收率分别为103.98%、101.65%、99.17%、103.59%、103.59%、102.44%、104.62%,RSD分别为3.37%、2.86%、3.02%、2.89%、2.86%、1.18%、3.67%。厚朴中各部位7种化合物含量存在一定的差异,在叶中,7种代谢产物均有积累,其中和厚朴酚、厚朴酚和槲皮苷的含量较高,金丝桃苷和槲皮素的含量较低。[结论]该研究建立的HPLC法简捷、方便,稳定性和重复性好,可为进一步开发利用厚朴提供依据,并为同时测定黄酮类化合物及酚类化合物提供新的方法。

厚朴水蒸气蒸馏和超临界CO_2提取物化学成分的比较研究

采用水蒸气蒸馏和超临界CO2提取与气-质联用技术对厚朴药材中的化学成分进行了研究。结果表明超临界CO2提取的厚朴化学成分比用水蒸气蒸馏的化学成分少,而厚朴酚与和厚朴酚的相对含量却较高。超临界CO2提取的主要成分为新木脂素类化合物如厚朴酚与和厚朴酚;而水蒸气蒸馏的主要成分为倍半萜和氧化倍半萜类化合物如α-桉醇、十氢-α,,α4 a-三甲基-8-亚甲基-2-萘甲醇。水蒸气蒸馏和超临界CO2提取物中均含有咕吧烯、石竹烯、桉叶二烯、α-依兰油烯、1,2,3,5,6,8 a-六氢-4,7-二甲基-1-异丙基萘、1,2,3,4,4A,5,6,8 a-八氢-8-四甲基-2-羟甲基萘。除文献已报道的化合物外,一些化合物如桉叶二烯、1,2,3,5,6,8 a-六氢-4,7-二甲基-1-异丙基萘、α-白檀油烯醇、4-亚甲基-1-甲基-2-(2-甲基-1-丙烯)-1-乙烯基-环庚烷、4,5,6,6 a-四氢-2(1H)-并环戊二烯酮、十氢-α,,α4 a-三甲基-8-亚甲基-2-萘甲醇,β-人参烯和苍术醇也被鉴定出来。

紫油厚朴叶提取物对马铃薯青枯病菌的抑制作用及防病效果

采用快速萃取法提取了紫油厚朴叶中的有效成分,用其提取物对马铃薯青枯病菌进行了抑菌作用及马铃薯青枯病的盆栽防治试验研究。结果表明:紫油厚朴叶提取物在浓度为含厚朴总酚0.6、0.3、0.2、0.1 mg/mL时对马铃薯青枯病菌均表现较强的抑菌活性;厚朴叶提取物对受试的马铃薯青枯病菌的最低抑菌浓度(MIC)为厚朴总酚0.1 mg/mL;盆栽防治试验效果亦很好。

凹叶厚朴愈伤组织的超低温保存

采用单因子比较和均匀设计法，研究凹叶厚朴（Magnoliabiloba（RehdetWils）Cheng）愈伤组织超低温（－196℃）保存的影响因素。结果表明：超低温保存的适宜材料是4周龄的愈伤组织。经4～6℃低温下预培养12天的愈伤组织抗冻能力最强。较好的冷冻保护剂是12．5％DMSO＋5％Suc＋0．25％LH。较佳的冷冻程序是以0．5℃／min的降温速度从0℃降到－30℃，停留1h，然后浸入液氮中贮存。30℃水浴中化冻与自来水流水（18．5±1℃）冲洗化冻效果一样良好。化冻后的愈伤组织在黑暗中培养生长较好，存活率高。

厚朴叶对家兔离体主动脉环张力的影响及其机制研究

目的研究厚朴叶对家兔离体主动脉环张力的作用,并探讨其可能机制。方法采用离体血管环灌流模型,观察厚朴叶不同提物对基础状态家兔离体血管环张力的影响。结果厚朴叶70%乙醇总提取物和三氯甲烷萃取物对内皮完整和去除内皮的家兔离体动脉环有收缩作用,并呈现一定的剂量依赖性,二者的收缩作用可被10-5mol.L-1维拉帕米和酚妥拉明阻断。结论厚朴叶总提取物和三氯甲烷萃取物对主动脉有非内皮依赖的收缩作用,其收缩机制可能是通过激活α受体,使Ca2+通道开放,细胞内Ca2+浓度增加而引起血管收缩。

火焰原子吸收光谱法对不同产地厚朴中六种微量元素的测定

用浓硝酸微波消解样品，火焰原子吸收光谱法直接测定厂不同产地厚朴中Fe、Cu、Mg、Ca、Mn、Zn 6种微量元素含量。结果表明，厚朴中含有丰富的人体必需微量元素，回收率在94．0％～105．0％之间，方法简单、准确，结果令人满意。

紫外光谱法鉴别厚朴及其伪品救必应

目的 建立厚朴及其伪品救必应的紫外光谱鉴别方法。方法 采用中药鉴别紫外谱线组法进行实验。结果厚朴及其伪品救必的紫外谱线组图像、最大吸收峰数目及峰位值具有明显差异。结论 本法简便 ,准确、灵敏 。