Review on hepatitis B virus precore/core promoter mutations and their correlation with genotypes and liver disease severity

Of 350 million people worldwide are chronically infected with hepatitis B virus(HBV)and are at risk of developing cirrhosis and hepatocellular carcinoma(HCC)later in life.HBV is the most diverse DNA virus,and its genome is composed of four open reading frames:Presurface antigen/surface antigen gene(preS/S),precore/core gene(preC/C),polymerase gene(P),and theχgene(χ).HBV produces quasispecies naturally or in response to antiviral agents because of the absence of proofreading activity amid reverse transcription and a high replication rate.The virus has 10 genotypes(A to J)with different geographical distributions.There are various HBV mutations in the HBV genome,including preC/C mutations,preS/S mutations,P gene mutations,andχgene mutations.The core promoter region plays a vital part in the replication,morphogenesis and pathogenesis of the virus.The precore region also plays a crucial role in viral replication.Both core promoter and precore mutations rescue the virus from host immune surveillance and result in the formation of mutated strains that may have altered pathogenicity.preC/C mutations are associated with liver disease progression.Precore mutations stop hepatitis B e antigen(HBeAg)production and basal core promoter mutations downregulate HBeAg production.Mutations in the basal core promoter are also associated with increased HBV replication and an increased incidence of advanced liver diseases such as cirrhosis and HCC.The emergence of antiviral-resistant mutations is the main reason for treatment failure.This review focuses mainly on preC/C promoter mutations and their correlation with genotypes and liver disease severity.Thorough perception and knowledge of HBV genetic variety and mutants could be vital to discover techniques for the prognosis and control of HBV infection.

HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变与GGT/ALT联合分析对HBV-HCC的早期诊断价值研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因核心启动子(BCP)区1762/1764和前C区1896基因突变与血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)联合分析对HBV相关性肝细胞癌(HBV-HCC)的诊断价值。方法收集2015年9月至2018年6月经该院确诊(HBV DNA≥1000 IU/mL)的HBV相关疾病患者159例,其中慢性乙型肝炎(CHB)63例,肝硬化50例,HBV-HCC 46例;比较各组患者GGT与ALT水平;采用扩增阻滞突变系统荧光PCR(ARMS-PCR)法检测HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变。结果HBV-HCC组患者的血清GGT水平和GGT/ALT比值均高于肝硬化组和CHB组,差异均有统计学意义(P<0.01)。HBV-HCC组、肝硬化组、CHB组的HBV基因BCP区1762/1764突变率分别为91.30%、84.00%、22.22%,HBV-HCC组与CHB组比较差异有统计学意义(P<0.05),而HBV-HCC组与肝硬化组比较差异无统计学意义(P>0.05);HBV基因前C区1896突变率分别为84.78%、64.00%、39.68%,HBV-HCC组与CHB组和肝硬化组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HBV基因BCP区1762/1764突变型与未突变型和前C区1896突变型与未突变型的GGT/ALT比值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。诊断HBV-HCC的受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,BCP区1762/1764突变检测联合GGT/ALT比值时,诊断灵敏度为71.70%、特异度为83.20%;前C区1896突变检测联合GGT/ALT比值时,诊断灵敏度为87.00%、特异度73.50%;BCP区和前C区突变检测联合GGT/ALT比值时,诊断灵敏度为93.50%、特异度为74.30%。结论HBV基因BCP区1762/1764突变、前C区1896突变和GGT/ALT比值均与HBV-HCC发生相关,三者联合分析对HBV-HCC的早期诊断具有临床应用价值。

HBV PC区和BCP区变异与Peg-IFNα-2b疗效的关系及治疗前后的变化

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)前核心区(PC区)G1896A和基本核心启动子区(BCP区)A1762T/G1764A突变与聚乙二醇化干扰素α-2b(Peg-IFNα-2b)治疗应答的关系及相关变异在治疗前后的变化。方法:69例HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者,接受48周Peg-IFNα-2b治疗并随访24周。PCR扩增每位患者第0周和第72周HBV PC和BCP区并测序分析突变情况,同时监测患者第0、4、8、12、24、36、48、60和72周HBsAg、HBeAg、丙氨酸转氨酶(ALT)和HBV的DNA水平。结果:共14例患者检测为野生型(20.29%),55例患者检测为突变型(79.71%)。野生型较突变型HBeAg基线水平更高(P=0.024)。患者基线和72周时野生型、PC突变型、BCP突变型和PC+BCP突变型所占构成比发生明显变化(P=0.004)。野生型、PC突变型、BCP突变型和PC+BCP突变型患者在72周的HBeAg血清转换率和联合应答率差异均无统计学意义。结论:PC区和BCP区突变对HBeAg阳性B/C基因型CHB患者Peg-IFNα-2b治疗应答无明显影响,但治疗前后各突变所占构成比发生明显变化。

HBV慢性感染者PC/BCP区变异特点及血清检测指标临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者前核心区(precore,PC)和基本核心启动子(basalcore promoter,BCP)变异特点以及变异株血清乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)、乙肝病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙肝病毒脱氧核酸(HBV-DNA)检测的临床意义。方法采集138例慢性HBV感染者清晨空腹血,以免疫化学发光法检测血清HBeAg、HBsAg,并同时采用磁珠法检测HBV-DNA,应用半巢式聚合酶链反应检测PC/BCP区基因突变。结果 101例未经抗病毒治疗的慢性HBV感染者中,HBeAg阴性组PC、BCP、PC+BCP变异率高于HBeAg阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。37例服用核苷类药物一年以上组PC、BCP、PC+BCP检出率要高于未经抗病毒治疗的HBeAg阳性HBV感染者组(P<0.05)。HBeAg阴性HBV感染患者其PC、BCP和PC+BCP的变异率随着病程的增加而增加(P<0.01)。PC、BCP和PC+BCP变异株组与野生株比较,慢性HBV感染者HBeAg含量减少(P<0.05),DNA复制活跃、HBsAg含量增加(P<0.01)。结论变异的发生使HBeAg阴性的慢性HBV感染患者越来越多,服用核苷类抗病毒药物和长的疾病病程可能是变异相关因素。对于HBeAg阴转的慢性HBV感染患者观察DNA、HBsAg含量,可了解体内病毒是否确实已被免疫清除。

乙型肝炎病毒基因组C区启动子突变位点新型检测方法的建立、验证及初步应用

目的 利用错配扩增和荧光PCR技术,建立一种针对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）基因组C区启动子（basal core promoter,BCP）1762/1764突变位点的新型检测方法,并对该方法进行验证及临床评价。方法 根据NCBI登录的HBV A-H型基因序列（以GenBank号为AB033556.1的C基因型作为标准参考序列）合成野生型和突变型标准品序列,测序后连接至pMD-18T载体上,构建质粒标准品,设计引物、探针及合适的突变检测体系,确定检测的线性范围;对建立的方法进行灵敏度、重复性、特异性、稳定性验证;分别用本实验建立的ARMS-PCR法和基因Sanger测序法（金标准）检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本的基因位点是否发生突变,并分析ARMS-PCR法的灵敏度和特异度。结果ARMS-PCR法能检测1 × 10^2- 1 × 10^9 copies/ml的野生型和突变型质粒;野生型和突变型样本检测的Ct差值（驻Ct）在7以上,且能检出最低达1%突变含量的混合质粒和样本;该方法灵敏度较高,重复性、特异性、稳定性良好;其检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本1762/1764位点突变阳性率为41.7%,明显高于Sanger测序法检测结果（P〈0.05）。结论 建立的ARMS-PCR法能很好地用于评估乙肝患者患肝癌的风险,且较Sanger测序法检测精度更高,更适合于临床推广。

内江市东兴区乙型肝炎病毒基因型、基本核心启动子和前C区变异分析

目的了解内江市东兴区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染者中的HBV基因型和基本核心启动子(basal core promoter,BCP)、前C(Precore,PC)区变异。方法从慢性HBV感染者血清标本中提取病毒DNA,进行核苷酸测序,构建进化树确定基因型,分析BCP和前C区位点变异。结果S基因序列进化树分析显示,64份标本为B基因型,7份为C基因型,1份为I基因型;获取的53份BCP和PC序列标本中,25份标本发生A1762T/G1764A或G1896A变异;7份C基因型标本中6份发生A1762T/G1764A变异;B基因型标本以G1896A变异为主,并与A1762T/G1764A联合变异,HBeAg阳性组和阴性组之间G1896A和A1762T/G1764A变异率有差异(P均<0.05)。其他包括HBeAg前体启动子变异、1846位点核苷酸缺失等。结论内江市东兴区慢性HBV感染者以B基因型感染为主,1例为I基因型。B基因型HBV以G1896A变异最常见,并与A1762T/G1764A联合变异,C基因型HBV更容易发生A1762T/G1764A变异;BCP区的A1762T/G1764A变异和PC区的G1896A变异与疾病严重程度、肝硬化和肝癌发生相关。通过对HBV基因型和变异分析,能为病情诊断和治疗提供帮助。