异种神经基膜管桥接周围神经缺损的初步研究

目的 探索经化学萃取的去细胞神经基膜管支架用于异种移植桥接周围神经缺损的可行性。方法 SD大鼠 30只 ,随机分为 5组 ,分别制作预溃变 2周 (溃变支架桥接组 )和新鲜的兔胫神经进行化学萃取 ,形成去细胞神经基膜管支架 (异体支架桥接组 ) ,兔新鲜胫神经束 (异种神经移植组 ) ;切取自体神经 15 mm原位移植 (自体神经移植组 ) ,修复大鼠坐骨神经长 15 mm的缺损。坐骨神经切断后不作移植修复 ,为对照组。术后 6个月行坐骨神经功能指数 (SFI)测定和疼痛试验 ,用美蓝染色、免疫组织化学、透射电镜等方法对吻合口、移植体中央和远侧神经段的再生神经纤维进行形态学观察 ,并对再生有髓纤维的数量、直径及髓鞘厚度等进行量化分析。结果 术后 3个月 ,仅有溃变支架桥接组、支架桥接组和自体神经移植组动物患肢行走逐渐恢复。 6个月时 ,针刺患足可引起背部肌肉收缩和下肢屈曲反应 ;术后 6个月行 SFI检测 ,溃变支架桥接组为 - 36 .2 %± 9.7% ,支架桥接组为 - 30 .7%± 6 .8% ,自体神经移植组为 - 33.9%±11.3% ,各组间比较无统计学意义 (P>0 .0 5 )。组织学观察见溃变支架桥接组与支架桥接组移植体中央横切面再生神经呈微束状分布。透射电镜观察见再生神经纤维具有正常的形态和结构。图像分析结果显示溃变支架?

多囊卵巢综合征患者卵泡基底膜超微结构的研究

运用透射电镜观察多囊卵巢综合征(PCOS)组及正常妇女组卵泡的形态,用体视学方法测量两组各级卵泡基底膜的厚度。结果显示:两组原始卵泡的基底膜厚度相似,但随着卵泡的发育卵泡基底膜逐渐增厚,PCOS组增厚更明显,对照组初级卵泡基底膜的平均厚度是0 293±0 204μm,PCOS组是0 463±0 287μm,两组比较有统计学差异(P<0 05)。对照组次级卵泡基底膜的平均厚度为0 542±0 298μm,PCOS组为1 234±0 345μm,两组比较有统计学差异(P<0 05)。两组原始卵泡的前颗粒细胞的超微结构相似,随着卵泡的发育,PCOS组的颗粒细胞内参与蛋白质合成的细胞器明显较对照组丰富;正常组窦前卵泡的颗粒细胞出现分化现象,PCOS组却未见分化现象。结果提示:PCOS患者卵泡基底膜屏障的增厚可能使卵泡刺激素FSH进入卵泡困难,颗粒细胞不能正常分化,"FSH 颗粒细胞轴"功能低下,导致不孕症。

2型糖尿病患者支气管黏膜超微结构的病理变化

目的探讨2型糖尿病患者支气管黏膜组织超微结构的病理变化。方法对2型糖尿病合并肺部肿瘤或结核患者,行支气管镜检查时于不同肺段支气管取非病灶支气管黏膜及黏膜下组织,行超微病理检查。结果支气管黏膜下微血管基板弥漫性增厚,多呈洋葱皮样、卷云状改变,基板周围有蛋白质沉着;毛细血管周围可见不规则高电子密度物质沉着,血管管腔狭窄甚至闭锁;内皮细胞及周细胞有暗细胞变,粗面内质网池扩张,大吞噬体(囊泡)形成。结论支气管黏膜及其周围组织均显示特征性糖尿病性病理改变,支气管亦为糖尿病“攻击”的靶器官。

牦牛角的形态发生及Shh和β-catenin的时空表达

研究对象为Ed（Embryonic days）60-240,0.5-5岁公牦牛角（原）基。采用石蜡切片、HE染色和免疫组化的方法研究牦牛角的形态发生过程,检测Shh（Sonic hedgehog）和β-catenin的时空表达与互作规律。结果表明,牦牛角的形态发生按照角（原）基毛囊和角质外鞘发生与否分为5个阶段：角原基前期（Ed≤60）表皮增厚,无毛囊发生;角原基中期（Ed60-140）表皮持续增厚,有少量毛囊发生;角原基后期（Ed140-250）表皮变薄,大量毛囊发生;肉角期（≤0.5 a）真皮乳头发生;成角期（≥0.5 a）形成角质外鞘。角原基期的顶部和角边缘处基底层Shh与β-catenin表达趋势相同,均为强-弱-强过程;肉角期的角边缘处基底层Shh与β-catenin同时表达,顶部仅β-catenin表达;成角期的角边缘处基底层Shh与β-catenin同时表达,顶部均无表达。结果提示：Shh在牦牛角的形态发生中负责表皮基底层形态分化,β-catenin则起着维持细胞分化状态并促进细胞增殖的作用。

改良萃取法制备脱细胞神经支架的去髓鞘效果评价

【目的】评价改良化学方法制备脱细胞神经支架的去髓鞘与脱细胞效果。【方法】12只成年SD大鼠(230～280g),取双侧坐骨神经,随机分为3组,每组8例,分别采用不同的处理方法。正常对照组:不作任何处理;Hudson组:采用Triton X-200、磺基三甲铵乙内酯-10(SB-10)、磺基三甲铵乙内酯-16(SB-16)处理;改良组:采用Triton X-200、SB-10、SB-16联合脱氧胆酸钠(SDC)及过氧乙酸(PAA)处理。处理后行HE染色、甲苯胺蓝染色及透射电镜检查,观察脱细胞、去髓鞘程度及基底膜保存情况。【结果】形态学检查显示,与对照组相比,Hudson组中的细胞核结构完全消失,甲苯胺蓝染色为散在同心圆状的髓鞘结构,透射电镜下显示髓鞘板层成分保留,但有崩解断裂,轴突依然存在;改良组细胞核完全去除,与Hudson组不同的是,甲苯胺蓝染色显示为不规则多孔状结构,髓鞘成分消失,透射电镜下显示髓鞘及轴突成分彻底去除,基底膜管壁结构清晰并完整保留。【结论】改良萃取法制备脱细胞神经支架能够有效地去除细胞和髓鞘成分,同时基底膜管结构保留完整。

电针双向调节白细胞数量的作用与脾血窦基膜小孔活动的关系

目的:探讨脾脏血窦基膜小孔参与电针双向调节外周血白细胞的过程。方法:实验家兔75只,随机分成5组:白增治疗组、白增对照组、白减治疗组、白减对照组和正常对照组,每组15只。家兔耳缘静脉分别注射大肠杆菌菌液和环磷酰胺,复制白细胞增多症模型和白细胞减少症模型,每天耳缘静脉采血,测外周血白细胞计数。治疗取"大椎"、双侧"足三里"、双侧"膈俞",电针20 min,每天1次,共5 d。治疗结束后,切取脾脏,制作脾脏的电镜标本,扫描电镜下观察脾血窦基膜小孔,显微图像分析软件计算脾血窦基膜小孔口径面积。结果:两治疗组与各自模型对照组比较,白细胞数恢复较快(P<0.05,P<0.01);白减治疗组较白减对照组脾血窦基膜小孔口径增大(P<0.05);白增治疗组较白增对照组脾血窦基膜小孔口径缩小(P<0.05)。结论:外周血白细胞数量降低或升高时,电针可以调整白细胞数量趋向正常水平,该作用与脾脏血窦基膜小孔相应的增大或缩小有关。

肌基膜管移植及神经生长因子对脊髓横断性损伤的修复作用

目的 :对神经生长因子 (NGF)及其结合肌基膜管 (MBL)修复脊髓横断性损伤进行组织学评价。方法 :以雌性家犬为实验对象 ,手术将其脊髓横断 ,随机分为 3组 :( 1) 7只行MBL移植结合注射NGF(A组 ) ;( 2 ) 6只单纯注射NGF组 (B组 ) ;( 3) 4只为对照组。 6个月后用免疫组化对神经轴突和胶质细胞网格框架结构进行特异染色 ,并用图像分析方法对脊髓横断处的远、近端横截面神经纤维进行定量研究。结果 :各组间远端神经纤维数量均有显著性差异 ;MBL移植物中有神经纤维通过 ,对照组断端为坏死空腔。电镜证实横断远端存在新生神经纤维。结论 :MBL移植结合NGF修复脊髓横断性损伤 ,神经轴突能越过移植区到达远端 ;

大鼠严重烧伤早期心肌细胞膜阴离子位点改变的研究

目的：探讨严重烧伤后早期心肌细胞膜结构损伤的分子病理学基础。方法：以聚乙烯亚胺（ＰＥＩ）为阳离子探针，运用透射电镜观察大鼠严重烧伤早期心肌细胞膜基板阴离子位点的变化，并进行心肌硝酸镧示踪观察，同时测定心肌组织含水量变化。结果：正常心肌细胞表面ＰＥＩ颗粒沿基膜外呈较规则的点阵式、线性排列分布。烧伤后１ｈＰＥＩ颗粒已开始有所减少，烧伤后６ｈＰＥＩ颗粒进一步减少，并可见心肌细胞基膜与质膜分离，基膜缺损或质膜断裂。伤后１ｈ镧颗粒穿过心肌细胞膜进入细胞内。伤后３ｈ心肌组织含水量增加（Ｐ＜０．０１）。结论：证实严重烧伤后早期心肌细胞膜基板阴离子位点减少可导致肌膜通透性增加，心肌组织水肿加剧，膜保护屏障功能下降。

肌基膜管植入对大鼠脊髓半横断损伤模型的血管化作用

目的:观察肌基膜管移植治疗大鼠脊髓损伤的血管生成情况,为在脊髓损伤中应用肌基膜管作为组织工程支架提供理论和实验依据。方法:利用冻融法将大鼠骨骼肌制备成肌基膜管,将其移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中,分别于术后3、5、7、14和28 d取材,利用碱性磷酸酶染色观察各个时间点支架中血管生成情况,比较不同时间点(3、5、7、14和28 d)血管生成数量。结果:肌基膜管在移植入大鼠脊髓损伤区后,血管由脊髓和肌基膜管交界处长入肌基膜管内部,最终在肌基膜管内部形成血管网。新生血管面积比5 d组高于3 d组(P<0.05),7 d组高于5 d组(P<0.01),14 d组高于7 d组(P<0.01),28 d组高于14 d组(P<0.05或P<0.01)。结论:肌基膜管移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中具有良好的血管化作用,有望成为修复脊髓损伤理想的组织工程材料。

至生胶囊对人食管癌细胞Eca-109侵袭作用的影响

目的:探讨人食管癌细胞Eca-109对重组基底膜的侵袭作用及至生胶囊对其侵袭能力的影响。方法:取12只健康日本大耳白兔,随机分为至生胶囊高剂量组、低剂量组、复方斑蝥胶囊对照组、生理盐水空白组4组,每组3只,连续给药3d,末次给药后2h内分别从耳中央动脉无菌采血,制备含药血清,采用Transwell细胞培养小室建立人肿瘤细胞体外侵袭模型,光学显微镜观察侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力。结果:至生胶囊高剂量组、低剂量组对人食管癌细胞Eca-109有明显的抑制作用,与对照组、空白组比较,组间有显著性差异(P<0.05)。结论:至生胶囊能明显抑制人食管癌细胞Eca-109对重组基底膜侵袭能力。

人工神经桥接体修复神经缺损的研究

目的:观察冷冻处理后的兔胚胎施万细胞(Schwann cells,SCs)种植到去细胞基膜管中移植对周围神经缺损再生的影响,寻求修复周围神经缺损较为理想的方法。方法:取成年雄性兔88只,建立左侧上臂正中神经20 mm缺损模型,随机分为4组,每组22只,分A组:自体神经移植组,B组:去细胞基膜管桥接体组,C组:去细胞基膜管种植未冷冻处理胎兔SCs的桥接体组,D组:去细胞基膜管种植两步冷冻处理胎兔SCs的桥接体组,4组修复兔正中神经缺损。于16周内不同时间段行大体观察,光、电镜组织学观察及形态定量学分析(再生有髓神经纤维密度、髓鞘平均厚度、有髓纤维直径),检查各组桥接体运动神经传导速度,称指浅屈肌肌肉湿质量;术后8周行辣根过氧化物酶(horseradish peroxi-dase,HRP)逆行示踪标记,观察神经功能恢复。结果:C组和D组神经再生及功能指标(再生有髓神经纤维密度、髓鞘平均厚度、有髓纤维直径、运动神经传导速度、肌肉湿质量恢复率)与A组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。6周时C组存在单核细胞浸润情况较D组严重,胶原纤维形成稍多。8周行HRP逆行示踪标记,A、B、C、D 4组背根神经节和脊髓前角运动神经元均可见深蓝色或蓝黑色阳性细胞,B组阳性细胞数(5.00±2.16)个与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.05),D组(12.5±3.87)个﹑C组(11.75±2.16)个与A组(13.50±4.20)个比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用两步冷冻法处理后的兔胚胎SCs种植到去细胞基膜管中制备人工神经桥接体,经培养后桥接修复兔正中神经缺损能提高神经再生质量,很少发生免疫排斥反应,为神经修复提供了一种新方法。

经额底纵裂-终板入路切除颅咽管瘤

目的探讨经额底纵裂-终板入路切除颅咽管瘤的手术方法和疗效。方法回顾性分析2008年10月—2010年10月18例经额底纵裂-终板入路手术的颅咽管瘤患者的临床资料。评价该手术入路、显微操作技术的优缺点。结果 18例均顺利完成手术,肿瘤全切除16例(88.9%),次全切除2例;保留垂体柄17例(94.4%),未保留1例。视力改善13例。术后并发症主要为多尿及电解质紊乱。结论经额底纵裂-终板入路是治疗颅咽管瘤安全有效的手术路径。

大鼠液压脑损伤后早期脑微血管基底膜成分改变及MMP-9表达的实验研究

目的研究大鼠液压脑损伤后早期脑微血管基底膜成分的改变及MMP-9的表达并探讨其临床意义。方法成年健康SD雄性大鼠64只,以侧位液压冲击法建立大鼠脑损伤模型(8只),随机平均分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)及颅脑损伤后3h、6h、12h、24h、48h、72h亚组(每亚组8只)。应用光镜、透射电镜及免疫组化法观察大鼠脑损伤后不同时间点脑微血管结构、Ⅳ型胶原及MMP-9表达。结果颅脑损伤后脑微血管外细胞间质水肿,基底膜节段性溶解、缺损,有红细胞漏出;脑微血管基底膜Ⅳ型胶原明显减少;MMP-9的表达逐渐增强。结论液压脑损伤后脑微血管基底膜缺失是导致继发性脑水肿及脑缺血的主要病理基础,而脑微血管壁和管外间质MMP-9高表达可能是引起微血管损害的主要机制之一。

经额底纵裂终板入路切除鞍后、鞍上区及第三脑室前部肿瘤

目的总结经额底纵裂终板入路切除鞍后、鞍上区及第三脑室前部肿瘤的治疗经验。方法回顾性分析32例鞍后、鞍上区及第三脑室前部肿瘤病人的临床资料,其中颅咽管瘤28例,生殖细胞瘤1例,垂体瘤3例。均经额底纵裂终板入路切除肿瘤。结果肿瘤全切除21例,次全切除6例,大部分切除5例;双侧嗅神经均保留29例,垂体柄保留24例。随访30例,时间2个月～2年,仅2例肿瘤大部分切除病人复发再次手术。结论经额底纵裂终板入路适合于切除向鞍后、鞍上区及第三脑室前部生长的肿瘤,术野显露充分,便于保留下丘脑、垂体柄等重要结构,肿瘤全切率高,并发症少,疗效好。

复合bFGF及肝素的外周神经桥接体在神经修复中的作用

目的:探讨bFGF和肝素与外周神经桥接体复合后在兔正中神经缺损修复中的作用。方法:成年雄性新西兰兔48只,建立左侧上臂正中神经30mm缺损。随机分为4组,分别用不同神经桥接体修复神经缺损,即A组为去细胞基膜管种植雪旺细胞并复合bFGF及肝素的桥接体、B组为去细胞基膜管种植雪旺细胞的桥接体、C组为去细胞基膜管复合bFGF及Hep桥接体、D组为自体神经作为对照。于术后1月、3月分别取材行HE及Masson’s三色染色,光镜观察神经再生、神经内胶原纤维形成及血管形成;3月检测各组桥接体运动神经传导速度,并行透射电镜检查,称量指浅屈肌肌肉湿重,观察神经功能恢复。结果:复合bFGF及肝素的桥接体组(A组、C组)神经再血管化及神经胶原形成与自体神经差异无统计学意义(P>0.05),与B组比差异有显著统计学意义(P<0.01)。A组神经再生数据(再生有髓神经纤维密度、平均髓鞘厚度、有髓纤维直径及运动神经传导速度、肌肉湿重恢复率)与自体神经移植(D组)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:bFGF及肝素用于组织工程神经桥接体修复神经缺损,能提高神经桥接体再血管化水平,减少胶原纤维形成,促进轴突生长有利于神经再生质量的提高。

大鼠坐骨神经去细胞基膜管的组织形态学研究

目的:观察采用化学萃取法和反复冻融法制备大鼠坐骨神经去细胞基膜管的组织形态学变化。方法:雌性Sprague-Dawley鼠坐骨神经16条随机分为化学萃取法(chemicalextractednerve,CEN)和冻融法(freeze-thawednerve,FTN)两组,每组18条。分别予Trinton-100化学萃取、-196℃～20℃反复冻融处理后,光镜、电镜观察其组织、形态学变化。结果:(1)CEN组基膜管管壁完整、贯通,无细胞结构,可见管状神经轮廓。(2)FTN组基膜管管壁破损、管腔堵塞,轴突、髓鞘、雪旺细胞及小血管变性、坏死,可见大量细胞碎片。结论:两种方法均能保持周围神经正常的三维空间结构,CEN制备的周围神经去细胞基膜管更具有组织形态学优势。

去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞的相容性

背景:去细胞肌肉生物支架联合人脐带间充质干细胞移植将是治疗脊髓损伤的一项重要措施。但两者是否具有良好的相容性,人脐带间充质干细胞能否在去细胞肌肉生物支架中长期存活并均匀分布,尚未得到证实。目的:观察大鼠去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞的相容性。方法:改良化学法制备大鼠去细胞肌肉生物支架,将第3代人脐带间充质干细胞Hoechest33342荧光标记后分为3组进行实验,细胞+支架组、细胞+支架大鼠体内组和单纯细胞组。分别应用苏木精-伊红、Masson染色方法观察去细胞肌肉生物支架的组织形态,以荧光倒置相差显微镜和扫描电镜观察人脐带间充质干细胞的吸附和生长情况。结果与结论:人脐带间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架充分附着,生长增殖活跃,细胞在支架内分布均匀。细胞+支架体内组与细胞+支架组相比在移植后1-7d人脐带间充质干细胞数量差异无显著性意义(P>0.05),在移植14d细胞+支架体内组人脐带间充质干细胞数量大于细胞+支架组(P<0.05)。提示去细胞肌肉生物支架与人脐带间充质干细胞有较好的相容性,体内环境更有利于细胞增殖和两者融合。

大鼠坐骨神经去细胞基膜管异体移植的比较研究

目的:探讨化学萃取法(CEN)、冻融法(FTN)制备的异种鼠坐骨神经去细胞基膜管移植术后8、13、23天神经再生轴突距离、Schwann细胞迁入、再血管化及炎症反应异同。方法:将36只雌性Wistar鼠随机配对,分为CEN组与FTN组,每组18只,分别桥接移植两种方法制备的SpragueDawley鼠坐骨神经去细胞基膜管。观察术后8、13、23天移植物物理性状及组织形态学变化。结果:术后8、13、23天,神经轴突再生距离、近和远端Schwann细胞数、再血管化及炎症反应差异有显著性(<0.05),CEN组优于FTN组。结论:化学萃取法制备的异种周围神经去细胞基膜管较冻融法能更快、更好地修复周围神经缺损,亦应有更大的临床实用价值。

糖尿病骨骼肌微血管基底膜超微改变图像分析

本文对年龄相近的糖尿病病人及正常人各10例的股四头肌穿刺材料进行了透射电镜观察及其微血管基底膜厚度和面积体视学的平均值检验及方差检验,结果发现糖尿病组肌肉微血管基底膜明显增厚,与正常组在统计学上有显著性差异。作者认为骨骼肌活检透射电镜观察可以作为临床辅助诊断和判定预后的简易手段。

乳腺良、恶性疾病中的基质改变

对84例良、恶性乳腺病变的基质作超微结构对比分析。结果表明存在两型基板/基质相互关系:良性疾患和非侵袭性乳腺癌的基板完整,基质全由成纤维细胞(fibroblast,FB)组成,无肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)存在;在侵袭性癌中,基板大多有缺陷或完全消失,基质中均可存在单个或成群的MFB。原位癌周围的MFB增生是癌性浸润的早期信号,对精确诊断非浸润性癌有价值。对MFB增生程度与肿瘤类型的关系、诱发浸润癌中MFB增生的可能原因及其意义等问题进行了讨论。