重组BbFGF工程菌的发酵条件(英文)

利用大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS生产重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (BbFGF) ,对此工程菌的发酵条件进行了研究 .在前期试验的基础上 ,重点探索培养基、诱导剂及葡萄糖添加方式对T7启动子指导下的bFGF合成的影响 .根据摇瓶试验和分批发酵试验结果 ,建立了一套变速流加葡萄糖的高密度补料分批发酵工艺 .在此工艺下 ,经 11h发酵 ,可得光密度为 30 .7、bFGF产量为 95mg/L的发酵产物 .两步法纯化目的蛋白 ,得到纯度为 95%的重组bFGF ,其生物活性和标准品一致 .

pET3c衍生载体的构建及应用研究

对原核表达载体 pET3c进行改建 ,消去载体上非必需的EcoRⅠ、HindⅢ限制酶位点 ,然后在克隆位点BamHⅠ处引入LacZ片段 ,经此二步改建后的载体命名为 pJN982。该载体保留了 pET3c高效表达外源基因的能力 ,同时 ,其融合克隆位点由 1个增至 7个 ,并获得以目视法筛选重组子的能力。应用该载体在E coliBL2 1(DE3)pLysS中融合表达牛碱性成纤维细胞生长因子 ,表达量占菌体总蛋白 30 0 4%。破碎菌体上清经阳离子交换和肝素亲和两步层析 ,得纯度为 95 %的重组蛋白 ,活性检测显示 ,重组蛋白具有与参照品一致的促有丝分裂活性。

牛碱性成纤维细胞生长因子在酵母系统中的表达

牛碱性成纤维细胞生长因子在酵母系统中的表达方向东陈淳谢志伟耿解萍王小宁戚正武（中国科学院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室上海２０００３１）碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）是ＦＧＦ家族...

牛碱性成纤维细胞生长因子在酵母中表达产物的纯化与鉴定

在以往工作基础上，将已经鉴定的牛碱性成纤维细胞生长因子（ｂｂＦＧＦ）基因克隆至酵母分泌型表达载体ｐＶＴ１０２Ｕ／α，并转化宿主菌Ｓ－７８。表达产物经一系列纯化后，得到ＳＯＳ－ＰＡＧＥ银染鉴定纯度＞９０％的最终产物，免疫学和细胞学检测结果表明，重组ｂｂＦＧＦ具有与天然ｂｂＦＧＦ相同的生物活性。

体外转染牛碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质干细胞增殖的影响

目的 观察牛碱性成纤维细胞生长因子 (bbFGF)基因体外转染兔骨髓基质干细胞(BMSC)的生长特性。方法 用脂质体法把pHβ bbFGF质粒导入体外分离培养的BMSC ,G41 8筛选出阳性克隆 ,建立TBMSC系 ,体外连续传代培养TBMSC ,观察生长特性。结果 在无血清Dul becco改良基础培养基 (DMEM)培养下 ,空白对照 (BMSC)、阴性对照 (BMSC/pHβ0 ) ,第 1、2天细胞分裂指数为 5‰ ,第 3天后细胞生长停滞。处理组细胞倍增时间为 2 6 .0h,分裂指数为 40‰ ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1 )。结论 将 pHβ bbFGF质粒体外转染兔骨髓基质干细胞可明显促进骨髓基质干细胞增殖 。