外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排的检测与序列分析

目的 :寻找一种敏感、特异而又快捷的方法检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H 基因重排 ,并分析 bcl- 1/Ig H 基因重排产物的序列 ,以了解 bcl- 1/ Ig H 基因重排发生的确切机理。方法 :对 2 8例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组织 ,通过半巢式 PCR检测 bcl- 1/ Ig H基因重排 ,并对 bcl- 1/ Ig H基因重排产物进行克隆和序列分析。结果 :通过半巢式 PCR测到有 bcl- 1/ Ig H基因重排者计 17/ 2 8例。而采用一步法 PCR仅 9例有此基因重排 ,两者相比 ,差异显著 (χ2 =4 .59,P<0 .0 5)。对 bcl- 1/ Ig H基因重排产物进行序列分析后发现 ,bcl- 1/ Ig H基因重排产物为 74～ 16 2 bp大小 ,融合基因连接区为 6～ 2 4 bp大小。在断裂点集中的 6 5bp范围内 ,找到 10个不同的断裂点 ,其中 5个未见文献报道。对 JH 基因序列的分析 ,发现 bcl- 1/ Ig H 基因重排时 ,JH1,JH3,JH4 ,JH5和 JH6都可能参与重排 ,其中 ,以 JH4多见 ,而 JH2则没有涉及。结论 :该半巢式 PCR方法是检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H基因重排的一种敏感而特异的方法 ,对外套淋巴细胞淋巴瘤的明确诊断和治疗都有一定的指导意义 ,而对 bcl- 1/Ig H基因重排的序列分析 ,则将为外套细胞淋巴瘤的的发病机理研究提供理论依据。

半巢式PCR方法检测外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排

目的 探讨敏感、特异而又快捷的bcl_1/IgH基因重排检测方法。方法 对28例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组织 ,分别采用半巢式PCR和一步法PCR检测bcl_1/IgH基因重排。结果 通过半巢式PCR测得有bcl_IgH基因重排者计17/28例 ,而采用一步法PCR仅9例有此基因重排 ,两者检出率差异有显著性意义 (χ2=4.59,P<0.05)。 结论 半巢式PCR方法检测外套细胞淋巴瘤中bcl_1/IgH基因重排比一步法PCR敏感而特异。

B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点与bcl-2/IgH基因重排的相关性

目的探讨B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点D18S64、D18S61与bcl-2/IgH基因重排的相关性。方法采用巢式PCR方法对37例B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排主要断裂点(MBR)进行检测,PCR-SSCP方法检测bcl-2基因内部、基因周围微卫星位点D18S64、D18S61的MSI和LOH情况。采用DNA抽提试剂盒提取石蜡包埋组织基因组DNA、全血基因组DNA-PCR扩增-变性聚丙烯酰烯酰胺凝胶垂直电泳-银染法-全自动凝胶成像系统对样本进行MSI和LOH分析。结果 37例B细胞非霍奇金淋巴瘤中,bcl-2/IgH基因重排阳性率为24.3%(9/37)。各位点MSI、LOH频率分别介于16.2%-18.9%和16.2%-21.6%。D18S61位点MSI阳性组的bcl-2基因重排阳性率均高于MSI阴性组(P<0.05),而D18S64位点则与之相反(P>0.05);D18S61位点LOH阳性组的bcl-2基因重排阳性率明显高于LOH阴性组(P<0.05),D18S64位点与之相反(P>0.05)。结论 bcl-2/IgH基因重排与微卫星位点D18S61的MSI/LOH有显著相关性,表明D18S61可能是bcl-2基因周围区域与bcl-2基因关系较为密切的微卫星位点。

实时定量PCR法检测淋巴瘤患者Bcl-2／IgH融合基因及其临床意义

本研究目的是检测滤泡性淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平,以探讨其临床意义。以SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法检测20例患者外周血和(或)骨髓bcl-2/IgH融合基因的表达水平,并对其中4例患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平进行动态监测。结果表明,在bcl-2/IgH融合基因阳性表达的病例中,骨髓和外周血bcl-2/IgH融合基因的相对拷贝数分别为4.23和2.73,统计学分析差异无显著性(p=0.107),而治疗前后融合基因的相对拷贝数均数分别为3.61和2.69,统计学分析差异有显著性(p=0.000),初诊及复发组的bcl-2/IgH融合基因表达水平明显高于缓解组(p=0.008),在4例患者的外周血bcl-2/IgH融合基因动态监测结果中,1例患者在临床复发前3个月bcl-2/IgH融合基因表达水平明显上升。结论:bcl-2/IgH融合基因表达水平与患者的疾病状态有一定的相关性,初诊及复发患者融合基因的表达水平高,而缓解患者融合基因的表达水平低,治疗后融合基因表达水平较治疗前明显下降,bcl/IgH融合基因表达水平的变化可能与临床疾病进程有关,检测外周血是比较可行的。

Bcl-2及Bag-1基因产物在肾癌组织中的表达及意义

目的 讨论基因 Bcl- 2和 Bag- 1在肾癌组织中的表达及相互关系 ,了解肿瘤增殖与凋亡的特点 .方法 采用免疫组化 SABC法对 4 1例肾癌与 10例正常肾组织的石蜡标本切片对照 ,进行产物表达的统计研究 .结果 Bcl- 2在肾癌组织中阳性表达率为 75 .6 % ,与正常肾组织 30 .0 %相比 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,但其表达与不同病理细胞类型、病理分级及临床分期无关 (P>0 .0 5 ) .Bag- 1在肾癌组织中表达率为 6 1.0 % ,正常肾组织 10 .0 %表达 . Bag- 1与肿瘤分级、分期及预后密切相关 (P<0 .0 5 ) ,随肾癌恶性程度增加 ,其表达强度也增加 .Bcl- 2与 Bag- 1的表达正相关 (r=0 .4 38) .结论 肾癌组织中 Bag- 1表达可作为预后指标 ;Bcl- 2可能参与肾组织由良性向恶性转化的过程 ,但与癌细胞恶性分化程度无关 .

非霍奇金淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排及在微小残留病变检测中的应用

目的：探索ｂｃ１ － ２ 基因重排在非霍奇金淋巴瘤（ Ｎ Ｈ Ｌ） 的发生及演变中的作用，以ｂｃ１ － ２／ Ｉｇ Ｈ 重排为克隆标志，建立敏感的检测淋巴瘤微小残留病变的方法。方法：多聚酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测ｂｃｌ－ ２／ Ｉｇ Ｈ 基因重排，系列稀释试验检测该方法的灵敏度。结果：９ 种恶性淋巴瘤细胞系中， Ｓｕ － Ｄ Ｈ Ｌ－ ４， Ｓｕ － Ｄ Ｈ Ｌ－ ６ 有ｂｃ１ － ２／ Ｉｇ Ｈ 基因重排，系列稀释试验检测该方法的灵敏度为１ ∶１０５ 。２９ 例 Ｎ Ｈ Ｌ 石蜡包埋的组织标本中，共检出６ 例有ｂｃ１－ ２ 基因重排，其中滤泡型 Ｎ Ｈ Ｌ（ Ｆ－ Ｎ Ｈ Ｌ） ４ 例（３６ ．４ ％ ） ， 弥漫型 Ｎ Ｈ Ｌ（ Ｄ－ Ｎ Ｈ Ｌ） ２ 例（１８．２ ％ ） ，全部在 Ｂ 细胞性 Ｎ Ｈ Ｌ 中检出。１６ 例 Ｆ－ Ｎ Ｈ Ｌ 患者中，４ 例外周血和骨髓中同时检出ｂｃ１ － ２／ Ｉｇ Ｈ 基因重排，化疗达 Ｃ Ｒ 后依然存在。结论：ｂｃ１－２ 基因重排主要与低度恶性的 Ｂ 细胞性淋巴瘤有关，重排方式以ｂｃ１ － ２（ Ｍ Ｂ Ｒ）／ Ｉｇ Ｈ 为主。ｂｃ１ － ２ 基因重排的检测为滤泡性淋巴瘤微小残留病变的检测提供了一个快速、敏感、特异的方法，对疾病的分期、疗效和预后的评估有一定的临?

急性白血病患者bcl-2和bax基因表达的临床意义及其与mdr-1基因表达的关系

细胞凋亡受抑作为肿瘤细胞的耐药机制 ,是急性白血病 (AL)预后不良的原因之一。bcl 2家族是目前最受重视的调控细胞凋亡的基因家族 ,本研究为探讨bcl 2和bax基因在急性白血病表达的意义 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定 70例初治AL患者及 2 0例正常人的bcl 2 ,bax ,mdr 1基因mRNA水平的表达 ,用流式细胞术检测其蛋白表达。结果表明 ,bcl 2和bax基因在AL患者广泛表达 ,bcl 2mRNA平均表达水平明显高于正常对照 (1.4 6vs 0 .71,P <0 .0 5 )。bcl 2和bax基因表达及bax bcl 2比值与AL患者的年龄、性别、血小板计数、血红蛋白水平、骨髓原始细胞百分率、FAB分型和S +G2 M %均未发现相关。Bcl 2蛋白表达 (34.6 %vs 6 9.2 %,P <0 .0 5 ) ,bax bcl 2mRNA比值 (37.1%vs 82 .9%,P <0 .0 1)决定AL对化疗的敏感性 ,与ALCR率密切相关。bax bcl 2mRNA比值还是影响总生存期的因素。bcl 2与bax基因表达和mdr 1表达两者无相关关系。

人参皂甙Rb_1对大鼠缺血再灌注心肌细胞Bcl-2、Bax、Bad、Fas基因表达的影响

目的 观察人参皂甙Rb1对缺血再灌注心肌细胞Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因表达的影响。方法 结扎 /松解Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ,免疫组化法检测Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因的蛋白表达 ,并利用图象分析系统测量蛋白阳性表达区域平均光密度值 ,进行定量分析。结果 缺血再灌注组及Rb1治疗组Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因的表达较假手术组明显增加 (P <0 0 5 ) ,Rb1治疗组Bcl 2的表达与缺血再灌注组比较无明显差异 (P >0 0 5 ) ,而Bax、Bad、Fas的表达明显下降 (P <0 0 5 ) ,人参皂甙Rb1治疗组Bcl 2 /Bax、Bcl 2 /Bad以及Bcl 2 /Fas比值均较假手术组与缺血再灌注组明显增加。结论 人参皂甙Rb1治疗可以抑制缺血再灌注心肌细胞中促凋亡基因Bax、Bad、Fas的表达 ,并使Bcl 2 /Bax、Bcl 2 /Bad以及Bcl 2 /Fas比值增加。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

脑缺血再灌流大鼠海马egr-1及bcl-2基因的表达

目的探讨脑缺血后再灌流海马结构选择性易损伤的分子机制。方法采用阻断大鼠两侧颈总动脉结合放血制备前脑缺血再灌流损伤动物模型，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交及免疫组织化学技术，检测了ｅｇｒ－１及ｂｃｌ－２基因的表达和组织学分布。结果发现易损伤的海马ＣＡ１区锥体细胞的ｅｇｒ－１及ｂｃｌ－２基因表达受抑制，而耐受缺血的海马ＣＡ３区锥体细胞则明显表达这两种蛋白，并且这两种基因表达的组织学分布具有惊人的一致性。结论提示ＥＧＲ－１及ＢＣＬ－２蛋白参与损伤神经元的修复，对神经元有保护作用；ＥＧＲ－１蛋白可能参与ｂｃｌ－２基因表达的调控。

EB病毒转化人胃上皮细胞GES-1中bcl-2基因的表达

目的研究EBV感染人胃上皮细胞系GES-1后bcl-2基因的表达状况,探讨bcl-2基因在EBV相关胃癌发生中所起的作用。方法采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV产生细胞系Akata1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,经有限稀释法克隆和G418筛选获得感染和转染细胞克隆,用pcDNA3空载体质粒转染的人胃上皮细胞系GES-1细胞作对照;采用免疫细胞化学染色(ICC)法测定EBNA1基因的表达以鉴定EBV感染细胞克隆及测定EBV感染细胞中Bcl-2蛋白的表达。结果与对照相比较,感染细胞中Bcl-2蛋白的表达阳性。结论EBV感染可使人胃上皮细胞Bcl-2蛋白表达增高,EBV对人胃上皮细胞的转化作用可能与bcl-2基因的过度表达有关。

搜风祛痰中药复方对AopE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响。方法:建立ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并设立空白组、模型组、西药组、稳斑汤低、中、高剂量组。13周后将小鼠麻醉处死,取经HE染色的主动脉组织在光学显微镜下进行病理学观察,并采用半定量RT-PCR技术检测Beclin-1和Bcl-2基因表达的变化。结果:与空白组相比,模型组Beclin-1mRNA表达水平明显下降(P<0.01);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Beclin-1mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,中药高剂量组Beclin1mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与空白组对比,模型组Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Bcl-2mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,稳斑汤高剂量组Bcl-2mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。光镜下观察西药组和稳斑汤各剂量组炎症反应均明显弱于模型组。结论:搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过上调ApoE基因敲除小鼠AS易损斑块中Beclin-1和Bcl-2的基因表达而干预AS不稳定斑块的形成及破裂,具有良好的心血管保护作用。

血管紧张素Ⅱ及血管紧张素Ⅱ1型受体反义寡核苷酸对心肌细胞bax、bcl-2基因表达

目的 探讨血管紧张素 (AngⅡ )及血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)反义寡核苷酸 (AS ODN)对心肌细胞凋亡调节蛋白bax、bcl 2的影响。方法 将培养的乳鼠心肌细胞分为正常组、AngⅡ组、AT1R AS ODN组 :AngⅡ组用 10 - 6 mol/LAngⅡ刺激 2 4小时 ;AT1R AS ODN组在转染反义寡核苷酸后也用 10 - 6 mol/LAngⅡ刺激 2 4小时 ;正常组不予任何刺激。刺激 2 4小时后用免疫细胞化学方法观察AngⅡ及AT1R AS ODN对心肌细胞凋亡调节蛋白bcl 2、bax表达的影响。结果 与正常组相比 ,AngⅡ组心肌细胞bcl 2蛋白光密度值下降显著 (0 0 72 5± 0 0 0 65vs 0 0 975± 0 0 0 83 ,P <0 0 5) ,bax蛋白光密度值增加 (0 0 941± 0 0 0 42vs 0 0 82 3± 0 0 0 2 4,P <0 0 5) ;与AngⅡ组相比 ,AT1R AS ODN组bcl 2蛋白光密度值增加 (0 0 90 0± 0 0 0 16vs 0 0 72 5± 0 0 0 65,P <0 0 5) ,bax蛋白光密度值降低 (0 0 863± 0 0 0 19vs 0 0 941±0 0 0 42 ,P <0 0 5)。结论 AngⅡ可以诱导心肌细胞发生凋亡 ,而AT1R AS ODN可以逆转AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡。

紫外线光疗对早期蕈样肉芽肿皮损组织中BCL-2/IgH融合基因表达的影响

BcL-2基因是与细胞凋亡关系密切的原癌基因之一。BCL-2／IgH融合基因可导致BcL-2蛋白的过度表达，可能是淋巴瘤发病和发展的机制之一。既往有研究显示，

硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1诱导凋亡作用及其对Bcl2l12、Bcl-2和Bax基因表达影响

本研究探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1增殖和凋亡的影响及Bcl2l12、Bcl-2和Bax基因在其中的作用。用MTT比色法观察硼替佐米对SHI-1细胞的生长抑制作用,用Annexin-V标记、线粒体跨膜电位(Δψm)和DNA凝胶电泳分析细胞凋亡,用RT-PCR方法检测0、6,12和24小时Bcl2l12、Bcl-2和Bax基因表达。结果表明,硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制SHI-1细胞生长,24小时和48小时半数抑制浓度分别为54.13 nmol/L和5.45 nmol/L;硼替佐米能够诱导SHI-1细胞凋亡,在6小时Annexin-V阳性细胞就开始增高并呈时间依赖性,Δψm减低,形态学可见明显细胞核凝聚、固缩和碎裂,DNA凝胶电泳显示DNA片段化;RT-PCR显示,Bcl2l12表达增高,Bcl-2表达减低,但Bax表达无明显改变。结论:硼替佐米抑制SHI-1细胞增殖,并可能通过上调Bcl2l12基因和下调Bcl-2基因,使线粒体膜电位下降而促使SHI-1细胞发生凋亡。

AML1-ETO融合蛋白对BCL-2基因表达的影响

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检测cleaved caspase-3蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞BCL-2 mRNA的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与BCL-2基因启动子之间直接的相互作用情况。结果表明:AML1-ETO转染细胞的凋亡率明显增加,且检测到cleaved caspase-3蛋白的表达;转染了AML1-ETO的U937细胞系和具有AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中,BCL-2的mRNA表达水平显著下调;转染细胞沉淀富集的AML1-ETO直接结合的DNA中含有BCL-2基因的启动子序列。结论:BCL-2是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调BCL-2的表达。

凋亡相关基因Bcl-2、Bag-1在宫颈上皮病变中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2蛋白和Bag-1蛋白在宫颈癌发生、发展中的表达变化以及两者的关系。方法:采用免疫组织化学SP法,分别对39例宫颈上皮内瘤变CINⅠ/Ⅱ、25例CINⅢ(原位癌4例)及36例浸润性宫颈鳞癌(ISCC)组织中的Bcl-2和Bag-1蛋白进行检测,并以20例子宫肌瘤经手术切除的正常宫颈鳞状上皮作对照进行分析。结果:Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ/Ⅱ、CINⅢ和宫颈癌组织中表达率分别为10.00%、43.57%、76.00%、66.67%,其表达在CIN和宫颈癌组织间差异无统计学意义(P>0.05),在其余各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。Bag-1在正常宫颈组织、CINⅠ/Ⅱ、CINⅢ和宫颈癌组织中的表达率分15.00%、48.72%、72.00%、83.33%,其表达在正常组织与CIN和宫颈癌之间差异有统计学意义(P<0.01),在上皮内瘤变与宫颈癌中差异也具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌中Bcl-2与Bag-1蛋白表达同时增加。结论:宫颈鳞状上皮不典型增生和鳞状上皮癌中均有Bcl-2、Bag-1过表达,表明它们在宫颈癌的发生、发展中均起重要作用。Bcl-2与Bag-1在肿瘤早期抗凋亡作用相互增强,呈正相关关系。

纤维蛋白原Bβ-249C/T和Bcl-1G/A基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的研究纤维蛋白原(Fg)Bβ-249C/T和Bcl-1G/A基因多态性与血浆Fg浓度、分子聚合活性等指标和脑梗死(CI)的关系。方法选取160例急性CI患者、114例陈旧CI患者和160例正常对照者,应用PCR方法进行Bβ-249C/T和Bcl-1G/A位点的基因多态性分析;采用微机辅助血浆Fg功能自动监测系统测定血浆Fg浓度、Fg单体聚合反应速率(FMPV)、最大光密度(Amax)、FMPV/Amax等。结果急性CI组Bβ-249C/T的CT+TT型FMPV/Amax低于CC型,Bcl-1G/A的GA+AA型Fg浓度、FMPV均高于GG型,陈旧CI组Bcl-1G/A的GA+AA型FMPV/Amax高于GG型,正常组Bcl-1G/A的GA+AA型Fg浓度高于GG型(P均<0.05)。结论FgBβBcl-1G/A变异基因型可调控血浆Fg含量,吸烟、血糖升高等因素可通过Bcl-1G/A变异基因型使血浆Fg浓度和FMPV的表达增强,Bcl-1G/A变异基因型是CI发病或复发的高危人群。