新型BCL-2抑制剂的设计、合成及活性评价

通过研究BGB-11417与靶蛋白结合的相互作用,创造性的在P2口袋引入并环,合成了6个结构新颖的BCL-2抑制剂,产物经1H NMR和MS确证。以时间分辨荧光共振能量转移法(TR-FRET)测定目标化合物对BCL-2蛋白及BCL-2突变蛋白G101V和D103Y的体外抑制活性。活性结果表明化合物A、化合物B和化合物D对BCL-2及其突变蛋白G101V和D103Y有较好的抑制活性,可为合成活性更高的BCL-2抑制剂提供参考。

急性B淋巴细胞白血病BCL-2抑制剂耐药细胞系的构建及耐药机制研究

目的:利用急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞系RS4;11构建对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系,并探讨其可能的耐药机制。方法:采用BCL-2抑制剂navitoclax和venetoclax小剂量低浓度递增的方法间歇诱导RS4;11细胞系,构建RS4;11/Nav和RS4;11/Ven耐药细胞系,通过MTT法检测不同药物浓度下细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,转录组测序技术(RNA-seq)检测RS4;11耐药细胞系和亲本细胞系中的差异表达基因(DEGs),RRT-PCR检测耐药细胞系与亲本细胞系中差异表达基因的mRNA表达水平,Western blot检测耐药细胞系和亲本细胞系中BCL-2家族抗凋亡蛋白的表达水平。结果:成功构建了对BCL-2抑制剂耐药的耐药细胞系RS4;11/Nav和RS4;11/Ven,RS4;11/Nav对navitoclax的耐药指数为328.655±47.377,RS4;11/Ven对venetoclax的耐药指数为2 894.027±300.311。流式细胞术检测细胞凋亡发现,相比耐药细胞系,RS4;11亲本细胞系明显被BCL-2抑制剂抑制,而耐药细胞系的凋亡率基本未受药物的影响。Western blot检测结果表明,BCL-2家族抗凋亡蛋白在耐药细胞系中的表达无明显增多。RNA-seq、RT-PCR和Western blot检测发现EP300在耐药细胞系中的表达较亲本细胞系明显增高(P<0.05)。结论:小剂量低浓度递增间歇诱导法可成功构建对BCL-2抑制剂耐药的B-ALL细胞系,并且其耐药机制可能与EP300的表达上调有关。

新型大环Bcl-2抑制剂的设计合成及生物活性评价

目的 为克服Bcl-2的基因突变引起的耐药问题,设计并合成一系列新型Bcl-2抑制剂,并分别评价其对Bcl-2以及G101V、D103Y两种突变的抑制活性,探讨初步构效关系。方法 通过大环化设计,合成了一系列新型Bcl-2抑制剂,并通过^(1)H NMR和ESI-MS进行结构确证。采用时间分辨荧光共振能量转移技术(TR-FRET)和MTS法测定化合物对激酶和肿瘤细胞的抑制活性。结果 合成了1个阳性化合物和9个新型大环Bcl-2抑制剂。抑酶活性结果表明化合物28c、28d、28e、28f具有较强的抑制Bcl-2以及G101V、D103Y两种突变激酶的活性。结论 合成的新型大环Bcl-2抑制剂中部分化合物(28c、28e、28g和28i)对肿瘤细胞的增殖具有一定的抑制活性。

BCL-2抑制剂联合用药治疗老年急性髓系白血病的临床研究

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell Lymphoma-2,BCL-2)抑制剂联合用药在治疗老年急性髓系白血病中的治疗效果,为老年急性髓系白血病的治疗提供实践依据。方法选取甘肃省酒钢医院肿瘤血液科于2020年1月—2023年10月收治的30例老年急性髓系白血病患者作为研究对象,按照随机数表法分为对照组(15例)和干预组(15例)。干预组采用BCL-2抑制剂联合用药治疗,对照组采用常规治疗方法。比较两组治疗后的效果和不良反应发生率。结果治疗后,干预组的好转率(86.67%)显著高于对照组(46.67%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.400,P<0.05)。治疗后,干预组的血液学指标显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预组的免疫学指标优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预组不良反应总发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BCL-2抑制剂联合用药在治疗老年急性髓系白血病患者中,能有效改善患者的血液学指标和免疫学指标,促进疾病的好转,降低不良反应发生率。

BCL-2抑制剂治疗多发性骨髓瘤的研究进展

在过去的几十年里,多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)的治疗取得了重大进展,患者的生存率有了明显改善。然而,由于耐药性等其他问题,MM仍然无法治愈。B细胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)家族与细胞凋亡密切相关,在各种血液系统恶性肿瘤中异常表达,BCL-2靶向治疗成为一种有前景的治疗MM的方法。本文回顾了BCL-2靶向治疗MM的研究进展,以更好地了解这一治疗策略的前景。

Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响

目的:观察Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响。方法:取体外原代培养8 d的海马神经元,随机分为6组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂(无菌去离子水)对照组、Bcl-2抑制剂组和Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖,各组均于复氧复糖后24 h进行指标检测:采用细胞免疫化学染色法观察细胞形态和caspase-3阳性细胞率,Western blotting法检测海马神经元Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白的表达,RTPCR法检测海马神经元caspase-3 mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型组细胞caspase-3阳性率、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA表达均明显增强(P<0.05);与模型组相比,黄芪注射液组Bcl-2表达明显增加,细胞caspase-3阳性率、cleaved caspase-3蛋白及caspase-3 mRNA表达均明显降低(P<0.05);而黄芪注射液溶剂对照组、Bcl-2抑制剂组及Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组则无明显差异;黄芪注射液溶剂对照组Bcl-2表达较正常对照组无明显变化,而Bcl-2抑制剂组及Bcl-2抑制剂+黄芪注射液组显著下降(P<0.05)。结论:Bcl-2抑制剂可对抗黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的作用,黄芪注射液通过Bcl-2发挥对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的抑制作用。

Bcl-2抑制剂对黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨黄芪注射液(AI)对Bcl-2抑制剂(TW-37)作用下的缺氧缺糖/复氧复糖(H/R)大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取原代培养8 d的胎鼠海马神经元,随机分为6组:正常对照组、H/R组、AI组、AI溶剂对照组、Bcl-2抑制剂(TW-37)+H/R组、TW-37+AI+H/R组。除正常对照组外,各组均进行缺氧缺糖0.5 h,再于复氧复糖后七个时间点(0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h、120 h)分别进行指标检测。采用MTT法检测细胞活性,western blot法和RT-PCR法检测海马神经元Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果与正常对照组比,除0 h外,H/R组海马神经元活性明显降低(P<0.05),Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达均明显增强(P<0.05);与H/R组相比,除0h外,AI组海马神经元活性明显增高(P<0.05),Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05);而AI溶剂对照组、TW-37+H/R组及TW-37+AI+H/R组则无显著差异(P>0.05)。结论黄芪注射液可通过激活Bcl-2抗凋亡机制增强H/R大鼠海马神经细胞活性、降低Caspase-3表达,Bcl-2是黄芪注射液抑制H/R大鼠海马神经元凋亡的重要靶点之一。

Bcl-2抑制剂S1通过内质网途径对小鼠黑色素瘤B16细胞移植瘤生长抑制作用

目的建立小鼠黑色素瘤B16细胞移植瘤模型,探讨Bcl-2抑制剂S1对其生长的影响及其作用机制。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞种植至小鼠腋下,14天后开始用药物治疗,隔天给药。实验分为对照组、S1组(0.6mg/kg),28天后处死。测量移植瘤的重量。并采用免疫组化法检测内质网应激、凋亡相关蛋白等蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,S1处理组能够明显降低移植瘤体积、重量,差异有统计学意义(P<0.05);应用S1后移植瘤中Caspase3表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少、内质网应激相关蛋白GRP78以及内质网应激-凋亡相关蛋白CHOP表达水平明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小分子化合物S1可以抑制小鼠黑色素瘤B16细胞移植瘤的生长,其作用途径可能同内质网凋亡信号通路相关。

Bcl-2抑制剂维奈克拉联合去甲基化药物治疗老年急性髓系白血病8例效果观察

目的 :观察Bcl-2抑制剂维奈克拉联合去甲基化药物治疗老年急性髓系白血病(AML)的临床效果和不良反应。方法:老年急性髓系白血病患者8例,其中6例为复发/难治AML,2例为初治AML,予以维奈克拉联合去甲基化药物(4例地西他滨,4例阿扎胞苷)治疗,观察临床疗效及不良反应。结果:2个疗程后获得完全缓解(CR)3例,骨髓完全缓解(mCR)1例,部分缓解(PR)2例,疾病进展(PD)1例,死亡1例,客观缓解率(ORR)为75.0%,缓解率为50.0%。8例患者均出现骨髓抑制,其中Ⅱ度骨髓抑制3例,Ⅲ度骨髓抑制2例,Ⅳ度骨髓抑制1例,Ⅲ~Ⅳ度骨髓抑制发生率为37.5%。经积极输注成分血、预防感染、升血细胞等处理后,骨髓抑制改善。感染发生率为50.0%,Ⅲ~Ⅳ度胃肠道反应发生率为12.5%,经对症处理后好转。结论:维奈克拉联合去甲基化药物为不能耐受高强度化疗和造血干细胞移植的老年AML患者提供了一种新的治疗选择,临床疗效和患者耐受性较好,不良反应可控。

BCL-2抑制剂Venetoclax治疗急性髓系白血病的研究进展

Venetoclax(维奈托克)是一种BCL-2选择性抑制剂,在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中具有良好的耐受性。近些年来,Venetocla x的使用愈加普遍,大部分AML患者对基于Venetocla x的联合用药方案反应良好。临床上一般将Venetocla x与低剂量阿糖胞苷或去甲基化药物联合使用,均取得了比单药治疗更高的缓解率,且患者耐受性良好。如今,靶向治疗药物发展迅速,Venetoclax联合各种靶向药物的临床试验正在进行中,希望可以指导AML的临床治疗。但Venetocla x疗效并不持久,极易产生耐药,进而复发。Venetocla x耐药机制错综复杂,尚未完全阐明,因此在Venetoclax的应用过程中应关注其耐药的产生。

BCL-2抑制剂维奈托克在较高危组骨髓增生异常综合征中的治疗进展

较高危组骨髓增生异常综合征(HR-MDS)具有高度向急性髓系白血病转化的风险,患者的预后往往较差。当前HR-MDS的标准治疗手段仍以去甲基化药物、异基因造血干细胞移植为主。近年来,BCL-2抑制剂的应用使HR-MDS的治疗快速发展。BCL-2抑制剂与多种药物联合治疗HR-MDS均显示了高缓解率和可接受的不良反应率。本文就近年来维奈托克在HR-MDS中的治疗进展进行综述。

Bcl-2抑制剂TW37联用紫杉醇对EC9706细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察Bcl-2抑制剂TW37和紫杉醇联用对食管癌EC9706细胞增殖、平板克隆形成及细胞凋亡的影响。方法:MTT法考察单用0.20~50.00μmol/L紫杉醇、单用0.20~50.00μmol/L TW37及联用后食管癌EC9706细胞的增殖抑制率;平板克隆形成实验考察0.8μmol/L紫杉醇、0.8μmol/L TW37单用及联用对细胞克隆形成的影响;流式细胞术检测单用及联用对细胞凋亡的影响。结果:MTT结果显示,Bcl-2抑制剂TW37联合紫杉醇作用可以抑制食管癌EC9706细胞增殖。细胞平板克隆形成实验证实,0.8μmol/L紫杉醇和0.8μmol/L TW37都可以抑制克隆形成,2个化合物联用,能进一步抑制细胞集落的形成(P<0.001)。细胞凋亡检测结果显示,联用紫杉醇和TW37可以促进细胞凋亡(P<0.001)。结论:TW37联用紫杉醇可以抑制食管癌细胞增殖和克隆形成,促进细胞凋亡。

选择性Bcl-2抑制剂Venetoclax的研究进展

慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤,以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为特征。目前的标准治疗方案是氟达拉滨+环磷酰胺+利妥昔单抗的FCR方案。作为首个靶向药物,B细胞受体信号通路抑制剂极大的改变了CLL的治疗。Venetoclax是由Abb Vie公司和Genentech/Roche公司合作研发的口服选择性抗凋亡蛋白Bcl-2抑制剂,现已被FDA批准用于17p染色体缺失的CLL病人。它是唯BH3蛋白(Bcl-2蛋白家族成员)的类似物,可以重建恶性肿瘤细胞的凋亡通路。目前,Venetoclax与其他药物联合治疗CLL的Ⅰ-Ⅲ期临床试验、单用或联合其他药物治疗非霍奇金淋巴瘤和急性白血病的Ⅰ/Ⅱ期临床试验也在进行当中。本文叙述了Venetoclax全方面的研究进展。

小分子Bcl-2抑制剂的研究与开发

综述细胞凋亡的主要机制、Bcl-xL蛋白结构以及各类小分子Bcl-2抑制剂的研究与开发。高水平表达Bcl-2家族抗凋亡蛋白(如Bcl-2、Bcl-xL等)可导致肿瘤细胞的凋亡过程受阻,并对传统放、化疗产生抵抗性,而下调过表达Bcl-2和Bcl-xL蛋白则可诱导肿瘤细胞凋亡,且逆转肿瘤细胞对治疗的抵抗性或耐药性。因此,作为潜在的癌症治疗策略,以Bcl-2家族蛋白为靶点的小分子抑制剂已成为当今研究热点,X-射线晶体衍射、核磁共振技术、小分子数据库和计算机辅助药物设计等技术也广泛应用于小分子Bcl-2抑制剂的开发。

基于蛋白结构的Bcl-2抑制剂设计与开发

Bcl-2家族抗凋亡蛋白的过度表达通常与肿瘤的发生有着密切的关系,而细胞凋亡信号均要经Bcl-2蛋白家族传递。因此,针对Bcl-2家族蛋白的结构特征和功能,设计其特异性抑制剂,以诱导肿瘤细胞凋亡,已成为肿瘤治疗的新策略。综述Bcl-2家族蛋白的结构与功能及其活性位点的分布,介绍基于结构的若干Bcl-2抑制剂的设计与开发。

柚皮素联合Bcl-2抑制剂ABT-263调控信号通路AKT对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨柚皮素(Nar)联合Bcl-2抑制剂ABT-263调控信号通路蛋白激酶B(AKT)对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的Nar和ABT-263及Nar+ABT-263处理胃癌SGC7901细胞24、48、72 h的增殖抑制率。Nar、ABT-263和Nar+ABT-263处理48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western印迹检测AKT信号通路相关蛋白AKT和磷酸化(p)-AKT的表达。结果随Nar及ABT-263作用浓度增大及作用时间延长,对SGC7901细胞的增殖抑制率均显著增加(P<0.05)。与对照组比较,Nar组、ABT-263组及联合用药组细胞的增殖抑制率均显著增加(P<0.05),p-AKT蛋白表达均显著降低(P<0.05);与Nar组和ABT-263组比较,联合用药组细胞的增殖抑制率均显著增加(P<0.05),p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 Nar和ABT-263对胃癌细胞SGC7901均具有增殖抑制作用和凋亡促进作用,Nar联合ABT-263对胃癌细胞具有协同增效的作用,作用机制与下调p-AKT抑制AKT信号通路有关。

Bcl-2抑制剂用于急性髓系白血病靶向治疗的研究进展

急性髓系白血病(AML)是成人最常见的急性白血病,诱导化疗仍是AML的一线治疗手段。但是,由于AML诱导化疗毒性较高,且有高失败率及高复发率的特点,在AML患者中应用受限。近年来,去甲基化药物地西他滨和阿扎胞苷在AML表观遗传学治疗中得到深入研究,已经动摇了诱导化疗在AML治疗中的地位。随着对AML生物学研究的深入,发现越来越多的靶点可影响AML的生物学进程。针对这些靶点的靶向药物分为3类:第一类是突变位点抑制剂,如FLT3和IDH抑制剂;第二类是调节代谢或信号通路的抑制剂,如Bcl-2拮抗剂及表观遗传学药物;第三类是靶向细胞毒性药物。2017年美国血液学年会报道,AML靶向治疗最有前景的药物为调节代谢或信号通路的抑制剂,其中BCL-2抑制剂Venetoclax在AML的临床试验报告被评为本届会议最佳。本文就BCL-2抑制剂在AML的治疗进展做一综述。

BCL-2抑制剂Venetoclax联合阿扎胞苷治疗难治复发急性髓系白血病1例

近年来出现不少急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的治疗新药,其中对于年龄<60岁的复发AML,《中国复发难治性急性髓系白血病诊疗指南》(2021年版),建议可选择BCL-2抑制剂Venetoclax(维奈克拉)联合去甲基化的治疗方案,但由于BCL-2抑制剂在国内尚未正式获批,导致临床使用率并不高,我们现报道1例中年女性复发AML患者使用该方案后得到完全缓解的个案,为以后临床上该方案得到广泛应用提供指导。

BCL-2抑制剂维奈托克在血液系统恶性肿瘤治疗中的应用研究进展

维奈托克(venetoclax)是靶向B细胞淋巴瘤因子2(BCL-2)的选择性抑制药,能够通过特异性抑制BCL-2蛋白激活内源性线粒体凋亡通路,使肿瘤细胞快速凋亡。venetoclax单药或联合用药已应用于急性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统恶性肿瘤的治疗中,且显示出较高的抗肿瘤活性及安全性,有望成为血液系统恶性肿瘤治疗的新策略。

Bcl-2抑制剂Venetoclax治疗老年急性髓系白血病的研究进展

急性髓系白血病(AML)是一种复杂的分子生物学和临床异质性疾病,发病率随年龄增长而增加,且年龄与预后存在相关性。在过去的几十年中,标准治疗方案没有发生重大的改变,老年AML患者的长期生存率未见明显改善。近年来,以Venetoclax为基础的诱导化疗方案疗效显著,安全性良好,因此,Venetoclax的出现可能改变老年患者AML治疗的格局。本文就Bcl-2抑制剂Venetoclax治疗老年AML的研究进展做一综述。