H18杂交瘤抗凋亡能力的改造

利用PCR从pGEM T bcl XL 质粒中获得bcl XL 基因 ,构建真核表达载体pEF bcl XL,脂质体法转染杂交瘤细胞 ,G4 18筛选稳定表达株 ,Westernblotting检测目的蛋白表达 ,流式细胞仪检测Bcl XL 提高杂交瘤抗正丁酸钠诱导凋亡的功能。将构建的编码鼠bcl XL 基因的真核表达载体pEF bcl XL,转染H18细胞后 ,获得稳定的表达株细胞 ;稳定表达Bcl XL 的细胞具有抗正丁酸钠诱导凋亡的功能。鼠bcl XL 基因在杂交瘤细胞中稳定表达 ,提高了杂交瘤抗凋亡的能力 ,对高密度大规模培养杂交瘤细胞具有重要意义。

新城疫病毒ClassⅠ强毒株L基因的表达及单克隆抗体的制备

采用RT-PCR方法从新城疫病毒(NDV)ClassⅠ强毒株9a5b中扩增出了L基因C末端的基因片段,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,测序验证后转化入表达宿主菌BL21进行IPTG诱导表达,表达的蛋白接种8周龄BALB/c小鼠,制备L蛋白的单克隆抗体,用间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western-bolt方法共同检测所获得的抗体。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为39ku的重组融合蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。多种方法筛选显示成功制备了4株单克隆抗体。免疫特异性鉴定结果表明,在所获得的单抗中,4株单抗均具有ELISA和IFA效价,且4株单抗与ClassⅠ毒株的反应均强于与ClassⅡ毒株的反应。