慢性粒细胞白血病患者骨髓bcr/abl^(P210)和bcr/abl^(P190)转录本水平变化及意义

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者bcr/ablP210和bcr/ablP190转录本水平在疾病进展中的临床意义。方法选择85例CML患者(CML组),采用实时定量-PCR(RQ-PCR)技术对其骨髓bcr/ablP210和bcr/ablP190转录本水平进行检测,采用R显带技术进行核型分析,并分析转录本水平与临床参数、核型的关系。设12例缺铁性贫血患者为对照组。结果①CML组4例患者因RNA降解而被淘汰。②对照组骨髓标本未见bcr/ablP210和bcr/ablP190转录本表达;CML组加速期和急变期患者bcr/ablP210转录本水平明显高于慢性期患者(P均<0.001),1例患者由慢性期进展到加速期和急变期时bcr/ablP210和bcr/ablP190转录本水平均明显增高;bcr/ablP190转录本水平三期患者比较均无显著差异(P均>0.05)。③bcr/ablP210和bcr/ablP190转录本水平与CML患者性别、年龄、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板数量均无明显相关性(P均>0.05)。④CML组慢性期患者中49例为单纯t(9;22)、2例为累及9号和22号染色体的三元易位,加速期患者中1例出现额外add(17)(p12)异常,急变期患者中4例出现i(17q)、+8、+t(9;22)、t(10;21)额外异常,单纯t(9;22)患者和合并额外染色体异常患者间bcr/ablP210和bcr/ablP190转录本中位水平分别为1.627、1.392和0.008、0.005(P>0.05)。结论 CML患者bcr/ablP210转录本水平增高,并与疾病进展相关;部分CML患者存在bcr/ablP210与低水平bcr/ablP190转录本共表达。

CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本表达的关系

目的通过分析慢性粒细胞白血病(CML)患者转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本(简称bcr/abl^(P210))的表达水平,探讨两者在CML发病过程中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测73例CML患者外周血和骨髓中TGF-β1 mRNA及bcr/abl^(P210)的表达水平,以22名健康体检者作为正常对照组。TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)的相关性采用Pearson相关分析。结果 CML患者骨髓和外周血样本中TGF-β1 mRNA、bcr/abl^(P210)的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组外周血中TGF-β1 mRNA的表达水平明显高于CML患者骨髓中TGF-β1 mRNA的表达水平(P<0.05),正常对照组TGF-β1 mRNA的表达水平是CML组的11.39倍。相关性分析显示CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)呈正相关(r=0.53,P<0.01)。结论骨髓TGF-β1 mRNA有可能作为一种新的CML诊疗指标。

青黛复方对K-562细胞Bcr/Abl融合基因及p210蛋白表达的影响

目的探讨青黛复方对K-562细胞调亡、Bcr/Abl融合基因及p210蛋白的影响。方法以不同浓度青黛复方(0、2.5、5、7.5、10和20mg/ml)处理K-562细胞24h后,采用半定量RT-PCR技术检测各组Bcr/Abl融合基因的表达,Western blot技术检测p210Bcr/Abl蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随药物作用浓度升高,K-562细胞凋亡率呈浓度依赖性增加;Bcr/Abl在mRNA和蛋白水平均呈浓度依赖性下调,尤以10mg/ml和20mg/ml处理组更为显著。结论青黛复方能部分抑制K-562细胞Bcr/Abl的表达并呈浓度依赖关系,其对慢性髓细胞性白血病(CML)的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的。

青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、磷酸化SHP-2蛋白表达的影响

目的探讨青蒿琥酯对原代慢性粒细胞白血病细胞生长抑制、凋亡诱导及bcr/abl融合基因、P210蛋白、Src同源区2含域磷酸酶-2(SHP-2)蛋白磷酸化的影响。方法分离培养原代慢性粒细胞白血病细胞,采用不同浓度青蒿琥酯(0、5、10、20μg·mL^(-1))进行干预,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制情况;细胞计数法检测细胞生存情况;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞术(FCM)检测青蒿琥酯对细胞凋亡及胀亡的影响;荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测bcr/abl融合基因mRNA表达;Western Blot检测P210、SHP-2及磷酸化SHP-2蛋白表达。结果青蒿琥酯可抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,降低细胞存活率和线粒体膜电位水平(P<0.05),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度药物和不同作用时间可导致细胞凋亡率及胀亡率明显升高(P<0.01),同时可降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2和磷酸化SHP-2蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论青蒿琥酯可通过抑制原代慢性粒细胞白血病细胞的生长,促进其凋亡和胀亡,以及降低bcr/abl融合基因mRNA、P210、SHP-2、磷酸化SHP-2蛋白在原代慢性粒细胞白血病细胞中的表达水平,达到治疗慢性粒细胞白血病(CML)的目的。

慢病毒介导shRNA稳定干扰P210^(bcr/abl)基因表达的体内外研究

P210bcr/abl融合基因在慢性髓系白血病(CML)发生、发展中起重要作用。针对P210bcr/abl融合基因的小分子抑制剂(如伊马替尼)治疗CML非常有效,但容易产生耐药性。P210bcr/abl基因的融合区为RNA干扰其表达提供了一个特异性靶点。本研究通过病毒载体建立能同时表达P210bcr/ablshRNA和P210bcr/abl基因的BaF3细胞系,并探讨慢病毒介导的shRNA对P210bcr/abl基因表达的作用。用荧光显微镜检测慢病毒对BaF3细胞的感染率,用台盼蓝拒染法检测细胞的增殖能力;用RT-PCR和Western blot分别检测P210bcr/ablmRNA和蛋白的表达。结果发现,P210bcr/ablshRNA能使BaF3-P210bcr/abl细胞中的P210bcr/ablmRNA及蛋白表达明显下降,并且能增强BaF3-P210bcr/abl细胞对伊马替尼的敏感性,与不表达P210bcr/ablshRNA的BaF3-P210bcr/abl细胞相比,伊马替尼对该细胞系的IC50下降50%以上。将该细胞由尾静脉移植到受致死剂量照射的裸小鼠体内,移植该细胞的小鼠生存期较移植BaF3-P210bcr/abl细胞的小鼠生存期明显延长。结论:稳定表达针对P210bcr/abl基因融合区的shRNA可能增强CML常规治疗的效果。

Tet-off调控bcr/abl基因表达的细胞系293pT2-P210的建立

慢性髓系白血病(CML)是一种以髓系细胞受累为主的克隆性疾病。目前认为CML的主要分子发病基础为:位于9q34的abl基因与位于22q11的bcr基因相互易位形成bcr/abl融合基因,并编码具有很强蛋白酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白,该蛋白通过多种信号通路抑制细胞凋亡而导致细胞转化。本研究为构建能由Tet-off诱导表达系统调控bcr/abl融合基因表达的细胞系,为深入研究bcr/abl融合基因功能及其调控机制提供一种有价值的细胞模型。将bcr/abl融合基因亚克隆到pTRE2hyg载体构建重组质粒pT2-P210,同时将Tet-off质粒转染293细胞并筛选出单克隆,然后进一步转染pTRE2hyg-LUC质粒,通过荧光素酶活性检测选出能有效诱导目的基因表达的293Tet-off细胞,然后将重组质粒pT2-P210转染到293Tet-off细胞中。结果表明:筛选出了bcr/abl融合基因能被强力霉素有效调控的293pT2-P210单克隆细胞。结论:本研究筛选的293pT2-P210细胞为bcr/abl基因表达能被Tet-off诱导表达系统调控的细胞系,它们适用于bcr/abl融合基因功能及其信号调控机制的深入研究。

P210^(bcr/abl)融合蛋白的形成机制及作用的研究进展

慢性粒细胞白血病 ( CML )是以费城染色体 ( Ph)为特征的多潜能干细胞异常的骨髓恶性增殖性疾病。 Ph染色体是由 9号染色体 c-abl癌基因易位到 2 2号染色体的 bcr基因处 ,形成 bcr/abl融合基因 ,该基因经转录后 ,编码 8.5 kb的嵌合体 m RNA,翻译成分子量为 2 10 k D的蛋白质 ,即 P2 10 bcr/abl融合蛋白 ( P2 10 bcr/abl) ,该蛋白具有异常活跃的酪氨酸激酶活性 ( PTK) ,并活化细胞内相关的信号转导通路从而调控细胞的分裂与增殖 ,抑制细胞的凋亡。 P2 10 bcr/abl是 CML的特征性标志。因此 ,研究 P2 10 bcr/abl对研究与治疗 CML具有重要的意义。有关 P2 10 bcr/abl的形成机制及作用已部分阐明 ,现做综述如下。

BCR/ABL融合基因产物P^(210)在白血病诊断中的临床意义

目的:建立一种用抗ABL单克隆抗体,检测外周血P210BCR/ABL融合基因蛋白,为临床提供:特异、灵敏、快速诊断白血病的新方法。方法:采用WesternBloting印迹法检测68例符合FBA分型的白血病(CML)患者外周血细胞中P210蛋白。结果:CML患者外周血细胞中P210蛋白均为阳性。结论:外周血BCR/ABL融合基因蛋白检测法材料来源方便病人无痛苦,对提高CML患者的明确诊断和预后评估具有特异、可靠、准确、省时的临床应用价值。

汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562细胞bcr/abl表达的影响

为了研究汉防己甲素 (Tet)联合屈洛昔芬 (DRL)对K5 6 2细胞株凋亡相关因子bcr ablmRNA及蛋白表达的影响 ,Tet(1μmol L)和DRL(5 μmol L)单用及联合应用于K5 6 2细胞一定时间后 ,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和Westernblot方法检测K5 6 2细胞bcr ablmRNA和蛋白表达的变化。结果表明 :Tet和DRL单独应用对K5 6 2细胞bcr ablmRNA及蛋白表达均无影响 ,两药联合应用于 4 8小时K5 6 2细胞bcr ablmRNA表达开始下调 ,K5 6 2细胞P2 1 0 BCR ABL蛋白表达于 72小时开始下调。结论 :Tet和DRL联合应用可下调K5 6 2细胞bcr abl的表达 ,这可能是两药联用逆转耐药的机制之一。

靶向bcr/abl融合基因的RNAi对慢性粒细胞白血病K562增殖活性的影响

构建含bcr/abl RNAi慢病毒重组质粒载体并包装病毒,转染K562细胞,通过Real-time PCR及Western blotting验证干扰效应。采用CCK-8法、软琼脂细胞集落形成实验检测RNAi对K562细胞的增殖影响作用。结果表明,慢病毒介导bcr/abl基因RNAi明显下调K562细胞中bcr/abl mRNA及P210bcr/abl融合蛋白,显著抑制了K562细胞的增殖,这说明靶向bcr/abl融合基因的RNAi有望成为治疗慢性粒细胞白血病的有效方法。

定量检测bcr—abl（P210）转录本水平多中心比对研究

目的探讨国内不同医院bcr—abl（P210）转录本水平定量检测值的可比性。方法2010年4月至2011年8月，10家医院进行了4次样本派发以比对bcr—abl（P210）转录本水平定量检测值。由北京大学人民医院统一制备4个梯度（10倍系列稀释）的bcr—abl（P210）转录本水平细胞样本，加入TRIzol中，每个梯度每家医院各派发3份平行样品，每份样品细胞数为8×10^6，各单位分别按照自身实验方案采用实时定量PCR技术检测bcr—abl转录本水平。应用回归方程计算各单位转换系数（CF）。结果每次比对，各医院检测结果之间均存在差异。除个别医院外，各医院检测结果总体一致并与细胞稀释度一致。各家医院的CF均存在波动，其中3家医院比较稳定，4次比对CF范围分别为2．8～5．2、1．2—2．8和2．2～6．8；两家医院的CF变化较大，范围分别为0．76～7．0和2．1～18．7；三家医院各有1～2次检测结果明显偏离实际水平而无法计算出CF，能够算出的CF范围分别为1．9～19．2、3．6～7．6和0．18～14．7；一家医院因为中途更换主要试剂只有2次比对的CF（3．3和5．0）。结论通过比对获得CF能够实现不同医院bcr—abl转录本水平检测值的可比性。检测体系稳定可靠是获得准确CF的前提。

趋化因子MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达

本文旨在研究MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达,同时观察P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶对MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2mRNA表达的影响。在bcr/abl融合基因阴性和阳性慢性髓系白血病细胞中,采用半定量RT-PCR方法检测MIP-1α、MCP-1、CCR-1、CCR-2mRNA的表达水平。结果表明MIP-1αmRNA和CCR-1mRNA在bcr/abl融合基因阳性细胞中不表达,但在bcr/abl融合基因阴性细胞中表达,而MCP-1mRNA和CCR-2mRNA在bcr/abl融合基因阳性和阴性细胞中均不表达。当P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶被抑制后,MIP-1α和CCR-1的mRNA表达水平恢复至正常水平。结论:P210bcr/abl融合蛋白抑制慢性髓系白血病细胞中MIP-1α和CCR-1mRNA的表达,但对MCP-1和CCR-2mRNA的表达无影响。

人参皂甙Rg1对人慢性粒细胞白血病p210 bcr/abl融合蛋白表达的影响

目的:研究人参皂甙Rg1对人慢性髓细胞白血病敏感株K562细胞p210bcr/abl融合蛋白表达的影响。方法:体外培养K562细胞,经人参皂甙Rg1处理不同时间后,用流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western印迹技术检测细胞内p210bcr/abl融合蛋白表达。结果:人参皂甙Rg1可诱导细胞凋亡,凋亡率并随时间延长而升高;人参皂甙Rg1可下调p210bcr/abl蛋白表达量,并具时间依赖性。结论:人参皂甙Rg1可通过降低p210bcr/abl蛋白水平来诱导K562细胞凋亡,达到有效抗人慢性髓细胞白血病的效果。

慢性粒细胞白血病的基因治疗策略

BCR/ABL融合基因及其表达产物p210^(BCR/ABL)对慢性粒细胞白血病(CML)的发生具有决定性作用。近年来对CML分子发病机制的深入研究,为治疗CML提供了多种思路,涌现出了包括生物治疗在内的许多新疗法,有些已进入临床试验或临床治疗。本文概述了针对CML BCR/ABL信号转导途径的各种基因治疗策略,大致可分为以下四类:抑制癌基因表达,抑制BCR/ABL信号通路下游重要分子基因表达,阻抑BCR/ABL蛋白产物的功能,免疫治疗。

RHBDD1基因在慢性髓系白血病患者骨髓细胞中的表达及临床意义

本研究旨在检测RHBDD1(Rhomboid domain containing 1)基因在慢性髓系白血病(CML)患者骨髓细胞中的表达水平并初步探讨其临床意义。采用实时定量PCR的方法检测RHBDD1在正常人和CML患者骨髓单个核细胞中的相对表达水平。结果表明,CML患者RHBDD1的表达水平明显高于正常人;BCR/ABL p210表达阴性的患者RHBDD1的表达水平显著高于BCR/ABL p210阳性的患者;≥50岁的患者RHBDD1表达水平低于<50岁的患者;RHBDD1的表达水平与患者的性别无明显相关性。结论:RHBDD1基因可能参与了CML的发生与发展,尤其在BCR/ABL p210阴性患者的发病中可能发挥重要作用。

81例Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病患者的遗传学特征及疗效分析

目的:研究Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)患者的遗传学特征,分析影响患者疾病缓解和复发以及患者生存状况的因素。方法:收集2002年1月至2020年5月期间于青大附院初诊的Ph+ALL患者共81例,收集患者的一般资料、遗传学相关检查、治疗方案等,分析不同遗传学特点和不同治疗方案患者的病情转归及生存状况。结果:81例患者中有46例(56.79%)患者为P210基因阳性,有34例(41.98%)患者为P190基因阳性,1例(1.23%)患者同时存在P190和P210基因阳性。在随访期内发生ABL激酶突变的患者有15例(18.25%),P210融合基因组的突变率为10.87%,P190融合基因组的突变率为29.41%,二者有显著性统计学差异(P = 0.036)。有42例患者在第一次诱导缓解化疗中加用酪氨酸激酶抑制剂(TKIs),该组患者的缓解率为69.05%,有39例患者在第一次诱导缓解治疗中单用传统化疗方案,缓解率为43.59%,二者有显著性统计学差异(P = 0.021)。随访期内获得完全缓解的患者有69例,其中伊马替尼治疗组的复发率为61.70%,达沙替尼治疗组的复发率为31.82%,二者有显著性统计学差异(P = 0.021)。根据患者的治疗方案进行分组,比较各组患者的生存曲线,其中伊马替尼治疗组和达沙替尼治疗组(P = 0.003)、随访期内行造血干细胞移植(HSCT)组和未移植组(P = 0.010)的生存曲线不同。结论:在Ph+ALL患者中,P210比P190更多见。BCR/ABL融合基因为P190可能为ABL激酶突变的危险因素。第一次诱导缓解化疗即加用TKIs的患者比单用传统化疗方案治疗的患者有更高的缓解率。伊马替尼治疗组的复发率高于达沙替尼治疗组的复发率。选用达沙替尼治疗、完全缓解后行HSCT治疗可以改善患者的生存状况。

更小更舒心 索尼DCR-SR200E

索尼（SONY）硬盘摄像机的开山之作DCR—SR100E后继有人，更纤巧、更轻便的BCR—SR200E的推出，使索尼在中高端市场有了与JVCZE面交锋的资本。与同期发布的SR300E相比。采用210万像素晶锐CMOS型传感器、去掉光学防抖的SR200E更为实用，价格也更容易被人接受。SR200E全国首测，就在MI《热品》!

硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病K562细胞bcr/abl融合基因表达的影响

目的:研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响,探讨这种作用与bcr/abl融合基因表达的关系。方法:应用磺酰罗丹明B(SRB)法和集落形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响;应用Western blot(免疫印迹)法检测细胞P210bcr/abl融合蛋白含量;应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测bcr/abl融合基因信使RNA(mRNA)水平。结果:50,100,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562细胞48 h可明显抑制细胞增殖和降低其存活率(P<0.05,P<0.01);50,100,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用48 h或200 mg·L-1硒化壳聚糖作用12,24,48 h后K562细胞内P210bcr/abl蛋白含量呈时间和剂量依赖性下降(P<0.05,P<0.01),而bcr/abl融合基因mRNA水平未见明显改变。结论:硒化壳聚糖可通过下调bcr/abl融合基因表达的P210bcr/abl融合蛋白对K562细胞增殖产生抑制作用。

三氧化二砷对伊马替尼耐药bcr—abl基因突变细胞株生长抑制作用的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）在体外对伊马替尼（IM）耐药bcr-abl基凶突变细胞株（简称IM耐药细胞侏）的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察IM敏感细胞株32Dp210和包括32Dp210^T315I。等15种IM耐药细胞株的细胞增殖能力。选择其中5种慢性粒细胞白血病（CML）常见基因突变型细胞株，经膜联蛋白V（AnnexinV）标记流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测bcr-adl融合蛋白、CRKL磷酸化及细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果32Dp210^T315I等15种IM耐药细胞株具有不同程度的IM耐药性（IC50为IM敏感细胞株32Dp210的1．5～25．0倍）。As2O3对IM耐药细胞株的IC50值仅为32Dp210细胞的0．18—0．34。将5种CML常见的IM耐药细胞株与32Dp210比较发现，As2O3更显著地呈剂量依赖性抑制IM耐药细胞株bcr—abl融合蛋白、磷酸化CRKL蛋白的表达，诱导细胞凋亡的作朋也明显强于32Dp210。4μmol／LAs2O3可激活5种突变细胞的caspase-3、8、9蛋白表达。结论As2O3在体外对IM耐药细胞株具有比IM敏感细胞株更显著的生长抑制和诱导凋亡的作用，细胞凋亡的产生主要与easpase-3、8、9蛋白的激活有关，提示As2O3可能成为治疗IM耐药CML患者的新选择。