MiR-503靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性

目的:探讨miR-503是否能通过调控bcl-2的表达增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性。方法:采用实时荧光定量PCR检测肝癌细胞中miR-503和bcl-2 mRNA的表达水平;Western印迹观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;脂质体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402细胞;生物信息学软件预测miR-503潜在靶基因;双荧光素酶活性验证miR-503潜在的靶位点;MTT法检测细胞药物敏感性的改变。结果:相比于HL-7702细胞,miR-503在BEL-7402细胞中表达水平下调,Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503能够与bcl-2靶向结合,下调bcl-2的表达;miR-503转染组的细胞活力较miRNA阴性对照组显著降低。结论:MiR-503可能通过靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的药物敏感性,抑制肝癌细胞增殖。

bel-2结合抗凋亡基因1及表皮生长因子受体在三阴性乳腺癌中的表达

目的检测bcl-2结合抗凋亡基因1（BAG-1）和表皮生长因子受体（EGFR）mRNA在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达情况。方法收集十堰市太和医院2013年10月至2014年8月收治的TNBC患者51例，采用实时定量聚合酶链反应检测TNBC组织及其部分对应癌旁组织中BAG-1 mRNA和EGFR mRNA的表达，分析基因表达与TNBC患者临床病理参数之间的关系。结果BAG-1 mRNA和EGFR mRNA在TNBC组织中均为高表达状态，相对表达量分别为0.57±0.25、0.61±0.21，其在TNBC组织中的表达水平均高于癌旁组织（0.19±0.12、0.21±0.11），差异均有统计学意义（t值分别为5.12、7.17，均P〈0.001）。不同临床分期、淋巴结转移TNBC患者的BAG-1 mRNA和EGFR mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（均P〈0.05），而不同肿瘤直径、年龄的患者两种基因mRNA表达水平差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论BAG-1 mRNA、EGFR mRNA在TNBC中呈高表达状态，其高表达可能与患者不良预后相关，可作为预测TNBC患者预后的分子指标。

miR-503下调Bcl-2增强BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的:探讨miR-503通过调控Bcl-2的表达介导肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU对5-氟尿嘧啶敏感性的影响.方法:microRNA(miRNA)芯片筛选BEL-7402与BEL-7402/5-FU细胞中表达差异的miR-503为候选的miRNA;脂质体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测BEL-7402/5-FU及其亲本细胞中miR-503、Bcl-2 mRNA的表达水平;Western Blot观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞药物敏感性的改变.结果:相比于BEL-7402细胞,miR-503在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调,而Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503过表达后BEL-7402/5-FU细胞中的Bcl-2在mRNA和蛋白水平上表达降低;miR-503转染组的BEL-7402/5-FU细胞活力较miRNA阴性对照组显著降低.结论:miR-503可能通过下调Bcl-2的表达,进而增强BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖.

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度的影响

目的测定中药柴胡(Bupleurun Chinese DC, BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制.方法以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL-7402细胞内[Ca2+]i.结果柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001).结论柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂(Calcium channel blocker, CCB),提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一.

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。

肾透明细胞癌中Survivin表达及其与bel-2和p53的相关性研究

目的探讨Survivin蛋白、bcl-2蛋白、p53蛋白在肾透明细胞癌（RCCC）组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测Survivin、bel-2、p53在53例RCCC和12例正常对照的表达，计算阳性细胞百分率，并进行组间比较。结果Survivin在RCCC组织中阳性表达率为77、4％，高于正常肾组织的阳性率（0），P〈0．01。不同病理分级及临床分期比较Survivin表达差异有统计学意义，P〈0．05。bcl-2在RCCC组织表达阳性率为66％，正常肾组织中16．7％，差异有统计学意义，P〈0．01。p53在RCCC组织中阳性率39．6％，高于正常肾组织的0，P〈0．01。不同病理分级及临床分期之间bcl-2和p53表达差异均无统计学意义。Survivin表达阳性和阴性者bcl-2阳性率分别为73．2％和41．7％，P〉0．05。Survivin表达阳性和阴性者p53阳性率分别为41．5％和33．3％，P〈0．05。结论Survivin蛋白在RCCC肿瘤细胞中表达升高，与RCCC病理分级、临床分期密切相关，有可能作为判断病情和评价预后的指标；bcl-2及p53蛋白在RCCC肿瘤细胞中表达升高，与RCCC病理分级、临床分期无明显相关性。Survivin蛋白的表达与bcl-2蛋白的表达无明显相关性；与p53蛋白的表达明显相关，两者在RCCC的发生发展中可能存在协同作用。

Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、Caco2细胞的生长抑制作用

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系Caco2生长的抑制作用。方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、Caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照。通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况。结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异。转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、Caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(P<0.05),且Bcl-2 shRNA抑制Caco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(P<0.05)。MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA载体入BEL-7402、Caco2细胞在729、6 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:Bcl-2 shRNA可特异性地抑制BEL-7402、Caco2细胞生长。

MiR-122下调Bcl-2蛋白家族增强BEL-7402/FU细胞对氟尿嘧啶的敏感性

目的:探讨MiRNA-122对肝癌耐药细胞株BEL-7402/氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)的FU敏感性的影响及其作用机制。方法:构建miR-122及其阴性对照空载体并稳定转染至BEL-7402/FU细胞中,Western免疫印迹检测miR-122转染组(n=3)、阴性空载体转染组(n=3)和未转染组(n=3)中与耐药相关的Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达水平。用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)]法检测三组细胞对FU敏感性。结果:与未转染组、阴性空载体转染组比较,miR-122转染组Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达明显降低(P<0.05)。MTT结果显示:在不同浓度FU处理下,miR-122转染组的细胞抑制率较未转染组和阴性空载体转染组高(P<0.05)。结论:miR-122能特异性地下调Bcl-2和Bcl-XL表达,可增加BEL-7402/FU细胞对FU敏感性。

杨梅素对肝癌细胞Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 研究杨梅素（Myr）体内外对人肝癌Bel-7402细胞增殖、凋亡及机制的影响。方法 体外培养人肝癌Bel-7402细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;采用25只SPF级BALB/C-nu裸鼠建立Bel-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型,分为5组,对照组,5-氟尿嘧啶（5-Fu,25 mg/kg）阳性对照组以及Myr（20、40、80 mg/kg）三个剂量组。腹腔注射给药3周后,处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡;FACS检测肿瘤组织细胞周期;免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2含量。结果MTT和SRB法检测显示,Myr可以抑制Bel-7402细胞体外增殖并呈剂量依赖。腹腔注射给药3周后,Myr各剂量组瘤质量与模型组比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;Myr体各剂量组Bel-7402细胞凋亡率与对照组比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,Myr将细胞周期阻滞在G2-M期。Myr可以促进Bax蛋白表达（P〈0.05或P〈0.01）,抑制Bcl-2蛋白表达（P〈0.05或P〈0.01）。结论 杨梅素可抑制Bel-7402细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡机制涉及Bcl-2家族。

D-葡萄糖同系物作为人类肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值

目的评价荧光D-葡萄糖同系物2-NBDG作为肝癌细胞BEL-7402荧光探针的价值。方法肝癌细胞株BEL-7402培养24 h后分为实验组及对照组,其中实验组加入5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,对照组加入不含5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基,再将两组各分为两个亚组加入不同浓度的2-NBDG(0.3 mmol/L、1 mmol/L),即共4组:0.3 mmol/L2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组、1 mmol/L 2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组、0.3 mmol/L 2-NBDG组、1 mmol/L 2-NBDG组。比较各组细胞荧光强度,分析2-NBDG在肝癌细胞BEL-7402中的摄取及荧光成像情况,以及D-葡萄糖对2-NBDG的抑制竞争作用。结果 0.3 mmol/L 2-NBDG组的相对荧光强度为(78.72±3.78)%,低于1 mmol/L 2-NBDG组的(100.00±8.23)%(P<0.05)。0.3 mmol/L 2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组的相对荧光强度为(20.67±1.46)%,明显低于0.3 mmol/L 2-NBDG组的(78.72±3.78)%(P<0.05)。1 mmol/L 2-NBDG+5 mmol/L D-葡萄糖组的相对荧光强度为(22.23±2.01)%,明显低于1 mmol/L 2-NBDG组的(100.00±8.23)%(P<0.05)。结论 2-NBDG可被肝癌细胞BEL-7402快速摄取,并可通过荧光强度的方式量化其摄取程度,D-葡萄糖可竞争性抑制肝癌细胞BEL-7402对2-NBDG摄取。2-NBDG可以作为人源肝癌细胞株BEL-7402的检测荧光探针。

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制

目的：探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制。方法：用血清药理学方法，把含不同浓度蟾酥胶囊的血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞，分别孵育24、48h，显微镜下观察细胞形态学改变；MTT比色检测细胞的存活率；流式细胞仪检测细胞的凋亡率；琼脂糖凝胶电泳测定DNA条带；免疫细胞化学显色检测Bcl-2蛋白的表达。结果：实验组部分细胞凋亡，形态学改变；细胞存活率降低，增殖受到抑制；流式细胞仪检测，可见凋亡峰；孵育48h，琼脂糖凝胶电泳呈梯状条带（DNALadder）；免疫细胞化学检测，Bcl-2表达明显降低。结论：蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞BEL-7402株凋亡的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响

目的:测定中药柴胡(BupleurumChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法:以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL7402细胞内[Ca2+]i。高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化。结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P<0.01)。结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL7402细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)。钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL7402细胞多药耐药的机制之一。

MTT法测定稀土离子对BEL-7402及K562细胞的毒性及增殖毒性

用MTT法测定稀土离子在不同浓度、不同培养液中,与BEL 7402和K562细胞作用不同时间,对细胞的毒性和增殖毒性。结果表明,在含10%小牛血清培养液中,仅个别稀土离子在较高浓度时对BEL 7402细胞增殖有较弱的抑制作用;对于K562细胞,稀土离子在低浓度时对细胞增殖即表现出较强的抑制作用(P<0.05)。当培养液不含小牛血清时,较低浓度的稀土离子即可抑制BEL 7402细胞的增殖(P<0 05)。

脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法。方法:对比观察脂质体姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl2的影响。MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体姜黄素对Bel7402细胞增殖的抑制作用。原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体姜黄素诱导Bel7402细胞凋亡的作用。免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体姜黄素对Bax和Bcl2基因表达的影响。结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体姜黄素对Bel7402细胞增殖有显著抑制作用,P<0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P<0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P<0.05)。10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体姜黄素处理组Bel7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P<0.05)。脂质体姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义。结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用。脂质体姜黄素对Bax、Bcl2的表达无显著影响。

Presence of Fas and Bcl-2 proteins in BEL-7404 human hepatoma cells

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＡｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）ｉｓａｍａｊｏｒｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｓｔａｇｅｓｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｍａｍｍａｌｓａｎｄｏｔｈｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ，ｗｈｉｃｈｖ...

雷公藤甲素对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素影响人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法:采用细胞药理学实验方法,人肝癌细胞株Bel-7402与雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL及0.25μg/mL)共培养,MTT法检测其对Bel-7402细胞增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组织化学(SABC)染色法检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:作用48h后雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)3个剂量对Bel-7402细胞增殖均有显著抑制作用,P<0.01,抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达38.67%,且呈量效关系,3个剂量组间有显著性差异,P<0.01。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,作用显著,P<0.01,且呈显著的量效关系。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)用药组Bax、Bcl-2表达与对照组比较,无显著性差异,P>0.05。结论:雷公藤甲素能抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用机制可能不是通过Bax、Bcl-2途径。

呫吨酮衍生物XP-15对BEL-7402细胞线粒体膜电位的影响

目的 :探讨呫吨酮并吡啶衍生物9-(2-吗啡啉乙酰胺基)-7H-吡啶并[4,3-c]呫吨-7-酮(XP-15)对BEL-7402细胞线粒体膜电位的影响。方法:通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-15对BEL-7402细胞增殖的影响;用荧光分光光度计检测线粒体膜电位的影响。结果:高剂量的XP-15能明显抑制BEL-7402细胞增殖(P<0.05);对BEL-7402细胞克隆的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。XP-15作用后,BEL-7402细胞的线粒体膜电位降低(P<0.05)。结论:XP-15诱导BEL-7402细胞凋亡的作用,可能与其降低线粒体膜电位有关。

bcl-2,bax与肿瘤细胞凋亡

在肿瘤发生和发展过程中 ,细胞不仅发生了异常增殖 ,更重要的是其发生凋亡的能力和倾向降低了。bcl 2家族在细胞凋亡调控中有重要的作用 ,是目前细胞凋亡研究的热点之一。bcl 2家族分为抑制凋亡和促进凋亡蛋白两大类。bcl 2和bax分别是Bcl 2家族中最主要的抑制凋亡和促进凋亡蛋白。在多数肿瘤中 ,bcl 2表达水平升高 ,而bax表达下降。上调bcl 2或下调bax能抑制多种因素诱导的多种肿瘤细胞凋亡。反之 ,下调bcl 2或上调bax则促进多种肿瘤细胞凋亡。肿瘤的bcl 2 /bax表达比例与其发生和发展密切相关。作者综述了bcl 2和bax与肿瘤发生的关系、在肿瘤中的表达情况及其对肿瘤细胞凋亡的调控研究现状 ,探讨了存在的问题和对策。

土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究土槿皮乙酸 (pseudolaricacidB)诱导A375 S2细胞凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果 :土槿皮乙酸可剂量 时间依赖性的诱导A375 S2细胞凋亡 ,5 μmol·L-1土槿皮乙酸处理 36h的细胞 ,Hoechst 332 5 8荧光染色后有明显的凋亡小体出现 ;凝胶电泳法显示有明显的DNAladder出现。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl 2 ,Bcl xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少 ,而促凋亡蛋白Bax表达量增加。结论 :土槿皮乙酸对A375 S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡 ,降低Bcl 2 ,Bcl xL和ICAD蛋白的表达 ,增加Bax蛋白表达为其诱发A375