β细胞素基因-226A>G多态性与糖耐量减低人群的相关性研究

目的探讨β细胞素基因(BTC)-226A>G多态性与云南省昆明地区糖耐量减低人群的相关性。方法根据口服75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)将1 076例云南省昆明地区人群分为糖耐量减低组(IGT)、2型糖尿病组(T2DM)和健康对照组(NGT),用稳态模型法胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、稳态模型法β细胞功能指数(HOMA-β)、早期胰岛素分泌指数(ΔI30/ΔG30)等进行组间比较。同时采集血样后提取基因组DNA,应用高分辨率熔解曲线分析方法(HRM)检测BTC基因-226A>G基因型,观察3组人群中基因型和等位基因的分布情况,同时分析糖耐量减低人群中不同基因型相关临床变量的差异性。结果①BTC基因-226A>GGG基因型及A等位基因在T2DM组中的频率分别为0.133和0.657,在IGT组中为0.085和0.715,差异均无统计学意义(P>0.05);G等位基因在T2DM组中为0.343,在IGT组中为0.285,两组之间差异具有统计学意义(P=0.041)。②IGT组-226位点AA基因型和AG+GG基因型的表型间的空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(Fins)、OGTT 2 h血糖(PBG)、OGTT 2 h胰岛素(PINS)、HOMA-IR、HOMA-β和ΔI30/ΔG30比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BTC基因-226A>G多态性可能与云南省昆明地区人群糖耐量减低相关,推测含有G等位基因的糖耐量减低人群更易进展为T2DM。

大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Westernblot检测。采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白。目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%。表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性。结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖。

大鼠β细胞素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :获得大量重组大鼠β细胞素 (BTC) ,为研究 β细胞素的功能及制备其抗体奠定基础 .方法 :利用PCR方法从大鼠肾组织扩增出 5 4 4bp的β细胞素基因片段并按读框克隆到原核表达载体 pET2 8a(+)上 ,得到重组质粒pET2 8a rBTC ,转化大肠杆菌BL 2 1(DE3)菌株 ,IPTG诱导 β细胞素蛋白表达 ,SDS PAGE和Westernblot检测 .结果 :经IPTG诱导后 ,有明显的目的蛋白表达 ,分子量符合 β细胞素 ;表达的蛋白主要以包涵体形式存在 ;表达量约占菌体蛋白总量的2 0 %～ 30 % ;目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应原性 .结论 :大鼠 β细胞素基因的克隆与表达为进一步开展 β细胞素蛋白功能和胰腺干细胞的研究奠定了基础 .