植物表达载体在三分三发根中的高效表达

目的建立基于发根培养的三分三Anisodus acutangulus遗传转化体系及在三分三发根中表达外源基因的方法。方法由种子直接萌发得到无菌苗,建立了三分三的无菌苗培养系统。将植物高效表达载体pCAMBI-A1304+导入经过“disarmed”改造的根癌农杆菌C58C1(携带pRiA4质粒),获得了携带外源基因表达载体的重组C58C1工程菌。取生长良好的幼嫩真叶作为外植体,在乙酰丁香酮的诱导下用重组C58C1进行感染,诱导发根。选取在无激素培养基上生长迅速,分支多的发根单克隆进行继代培养。经过3次继代培养,PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)检测用于验证发根型质粒pRiA4和表达型质粒pCAMBIA1304+是否整合到三分三发根基因组内。结果建立了基于发根培养的三分三遗传转化体系,发根诱导频率达到100%,PCR检测表明pRiA4和pCAMBIA1304+质粒共转化率达到32%。结论该方法可以用于在三分三发根中高效表达外源基因,为实现基于发根的三分三产托品烷类生物碱的代谢工程奠定了基础。

三分三种子萌发影响因素分析

以三分三(Anisodus acutangulus C.Y.Wu et C.Chen)成熟种子为试验材料,研究温度、光照、浸种时间、层积及赤霉素处理对其萌发的影响。结果表明,三分三种子萌发的最适宜温度为25℃,种子发芽率达(57.6±1.53)%;25℃恒温浸种24 h能提高三分三种子的发芽率;三分三种子萌发需光,光照条件下种子发芽率显著高于黑暗条件;湿沙层积后用赤霉素处理能显著提高三分三种子的发芽率,种子发芽率高达(97.7±0.58)%。

红凉伞的生药学研究

对红凉伞原植物形态以及药材的性状特征、显微特征、理化特征(薄层色谱、紫外光谱)进行了观测分析,按《中国药典[》1]的方法对红凉伞药材的水分、灰分及醇溶性浸出物进行了测定.研究结果可为红凉伞的开发利用、建立质量标准提供依据.

超声辅助提取筋骨草中生物碱的工艺优化

通过研究料液比、乙醇体积分数、提取温度和超声时间对筋骨草[Schnabelia tetradonta(Sun)C.Y.Wu et C.Chen]中生物碱得率的影响,优选出超声最佳工艺,并以盐酸小檗碱为标准对照测定野生和家种筋骨草生物碱的得率。结果表明,生物碱的最佳提取工艺为药材加25倍的60%乙醇溶液(p H=1),50℃水浴1 h后超声30 min,得到野生筋骨草生物碱得率为0.072%,家种筋骨草生物碱得率为0.099%。该提取工艺合理,生物碱得率较高,为筋骨草生物碱的提取提供参考依据。

美花筋骨草化学成分研究

目的:研究美花筋骨草的化学成分。方法:利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶、MCI、ODS等色谱柱及半制备型高效液相色谱等方法分离纯化,并利用NMR、ESI-MS等波谱手段对化合物进行结构鉴定。结果:从美花筋骨草中分离了13个化合物,分别鉴定为:亚油酸(1)、异香草乙酮(2)、(16S)-12,16-epoxy-11,14-dihydroxy-17(15→16)-abeoabieta-8,11,13-triene-7-one(3)、3-O-乙酰齐墩果酸(4)、α-亚麻酸(5)、9-羟基-5,7-豆甾二烯-4-酮(6)、3-(4-甲苯氧基)-丙酸(7)、(R,E)-8-acetoxy-2,6-dimethyloct-2-enoic acid(8)、1-(4-羟基-苯基)-乙酮(9)、S(+)-dehydrovomifoliol(10)、(3S,5R,6S,7E)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen-9-one(11)、pubincrnoid A(12)、4-羟基-3,5-二甲氧基苯乙酮(13)。结论:其中,化合物8为首次分离得到的天然产物,化合物2、6、7、9～13为首次从该属植物中分离得到,化合物1、4、5为首次从该植物中分离得到。

植物生长调节剂对药用植物三分三种子萌发的影响

以药用植物三分三(Anisodus acutangulus C.Y.Wu et C.Chen ex C.Chen et C.L.Chen)成熟种子为材料,采用L9(34)正交试验研究赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)及浸种时间对三分三种子萌发的影响。结果表明,三分三种子萌发的最佳处理是A2B3C1D2,即赤霉素200 mg/L+6-苄基腺嘌呤20 mg/L+吲哚乙酸0 mg/L+浸种时间24 h,该处理的种子发芽率高达97.8%以上,并且种子开始发芽时间、发芽持续时间较短,种子发芽势、发芽指数最高,是比较理想的种子萌发处理方法。对发芽率进行极差分析以及验证试验的结果显示,影响三分三种子发芽率的最佳处理是A3B2C3D1,即赤霉素800 mg/L+6-苄基腺嘌呤10 mg/L+吲哚乙酸10 mg/L+浸种时间12 h;4种因素中以浸种时间对三分三种子发芽率的影响最大,其次是6-苄基腺嘌呤、吲哚乙酸,影响最小的是赤霉素,说明浸种时间过长反而对发芽不利。

广西瑶药红凉伞的HPLC指纹图谱研究

目的:研究8批不同产地红凉伞药材的高效液相色谱指纹图谱,为红凉伞药材的质量控制提供依据。方法:采用Inertsil ODS-3 C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.8m L/min,检测波长220nm。结果:以10个共有峰为评价指标,精密度和重复性试验中各共有峰相对保留时间及相对峰面积的RSD基本符合要求;非共有峰占比<10%,符合指纹图谱研究技术要求;8批样品相似度>0.9。结论:该方法具有良好的准确性及可控性,可以作为红凉伞药材质量控制的有效依据。