Bifidobacteria DNA Induces Murine Macrophages Activation in vitro

Previous studies have shown that oligodeoxynucleotides containing unmethylated CpG motifs were used as adjuvants for immunoregulation and immune response. This study was to explore the activation effects of Bifidobacteria DNA containing unmethylated CpG motifs （CpG DNA） on murine macrophage J774A.1 cells. The genomic DNA of Bifidobacteria was extracted and purified, and the methylation degree of CpG motifs was tested. The phagocytic ability of the macrophages was detected by flow cytometry. The cytokines （IL-1β, IL-6, IL-12p40 and TNF-α） levels in the culture supernatants of Bifidobacteria DNA treated J774A.1 cells were assayed by ELISA. The content of nitric oxide （NO） was detected by Griess reagent. After treated with Bifidobacteria DNA for 24h, Nile Red stain increased in J774A.1 macrophage, which suggested that the lipid metabolism increased in the macrophages. The phagocytic ability and levels of NO and cytokines of IL-1β, IL-6, IL-12p40 and TNF-α were significantly higher than PBS group and CT DNA group. The results indicated that Bifidobacteria DNA could activate murine macrophages J774A.1, which could provide scientific basis for the research and application of microorganism DNA preparation. Cellular ＆ Molecular Immunology. 2005;2（6）：473-478.

双歧杆菌基因组DNA提取及其遗传多态性研究

用自行改良的氯化苄法,从液体培养的双歧杆菌菌体中提取基因组DNA,用紫外吸收光谱、琼脂糖凝胶电泳等方法进行鉴定。结果表明,该法提取的基因组DNA分子量高,收获量大,蛋白质污染少,而且快速、高效、经济和实用。以该基因组DNA为模板,用随机引物S256通过AP—PCR扩增出清晰的RAPD谱带,并呈现出一定程度的遗传多态性。讨论了RAPD指纹图谱在双歧杆菌分类鉴定及工业菌株分子标记中潜在的应用价值。

双歧杆菌的药敏性及其质粒DNA的检测

利用药敏纸片琼脂扩散法检测了10株具有粘附性的双歧杆菌对临床常用的12大类38种抗菌药物的药敏性。结果显示,对于同一菌株,其对同类抗菌药物表现出基本一致的药物敏感性;不同菌株间在对于同一类药物的敏感性上也有着较好的吻合,如对青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类及多肽类的表现几乎全为耐药,对头孢类、大环内酯类、磺胺、氯霉素、克林霉素则基本表现为敏感。但在此基础上,不同来源的菌株间也存在着一定的差异。采用碱裂解法提取并检测了受试双歧杆菌的耐药性质粒,仅在一株受试双歧杆菌H-3中发现有1条质粒带,其对应的核酸分子量参照在5148～21226bps之间,其他受试菌株中未发现有质粒存在。

双歧杆菌DNA对小鼠肠上皮内淋巴细胞产生γ干扰素和白介素2作用的研究

目的:研究双歧杆菌DNA对小鼠肠上皮内淋巴细胞(iIEL)γ干扰素(IFN-γ)和白介素2(IL-2)产生水平的影响,探讨其对小鼠iIEL免疫激活作用。方法:提取双歧杆菌DNA,肌肉注射免疫小鼠,提取小鼠iIEL,以IFNγ和IL-2作为检测指标,测定其变化。结果:DNA免疫小鼠产生IFN-γ和IL-2的水平与对照组相比明显提高(P<0.01)。结论:双歧杆菌DNA明显提高小鼠iIEL产生IFN-γ和IL-2的能力。

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞表面分子表达及分泌功能的影响

目的 探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞表面分子表达及分泌功能的影响。方法 纯化提取双歧杆菌基因组DNA ,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度。用双歧杆菌DNA (10 μg ml)体外诱导培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞MHCⅡ类分子、共刺激分子和粘附分子的表达 ,ELISA法检测培养上清中细胞因子的含量。结果 双歧杆菌DNA组巨噬细胞表达Ia、CD4 0、CD86和CD5 4分子的平均荧光强度分别为 4 3 176± 5 5 6、4 7 6 8± 4 6 5、15 6 4 9± 2 0 6 8和 6 9 37± 4 10高于PBS对照组 15 0 2± 2 31、15 72± 3 2 1、88 5 1± 6 38和 4 8 81± 3 2 1;双歧杆菌DNA组巨噬细胞产生IL 1β的水平为 2 70 12± 31 5 1pg ml高于PBS对照组 138 12± 9 2 4 pg ml;两组之间的差别均具有显著性的意义 (均P <0 0 5 )。结论 双歧杆菌DNA能增强小鼠腹腔巨噬细胞共刺激分子、MHCⅡ类分子和粘附分子的表达 ,增强巨噬细胞IL 1的分泌水平。

双歧杆菌、大肠杆菌总DNA对小鼠免疫功能影响的对比研究

目的 :提取双歧杆菌、大肠杆菌DNA ,与iIEL细胞共同孵育 ,观察它们对IEL细胞的激活作用 ,并用DNA免疫小鼠 ,观察小鼠免疫功能的变化 ,探讨双歧杆菌、大肠杆菌DNA对免疫功能的影响 ,并作对比研究。方法 :以自然杀伤细胞 (NK)活性 ,白细胞介素 2 (IL 2 )产生能力为指标 ,测定小鼠上述各项指标变化。结果 :小鼠以上两项指标与对照组相比有明显提高(P <0 .0 5 )。双歧杆菌DNA提高小鼠NK活性与IL 2水平程度大于大肠杆菌DNA的作用 (P <0 .0 1)。结论 :表明双歧杆菌DNA可快速激活NK活性 ,提高体内IL 2水平。

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活效应

目的 探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用 ,为微生物DNA制剂开发应用于临床提供科学依据。方法 纯化提取双歧杆菌基因组DNA ,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度。收集双歧杆菌DNA( 10 μg/ml)体外诱导培养 2 4h的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清 ,采用ELISA法检测培养上清中TNF α、IL 12的含量 ,用Griess试剂检测其NO的含量 ;FACS检测巨噬细胞的吞噬功能。结果 实验组 (双歧杆菌DNA组 )巨噬细胞产生TNF α、IL 12及NO的水平分别为 12 0 .12± 13 .2 1pg/ml、4 0 5 .5 1± 5 1.80 pg/ml和 11.12± 1.0 1μmol/L ,巨噬细胞吞噬功能的平均荧光强度为 2 8.12± 3 .5 8;对照组 (PBS组 )分别为 5 .82± 1.5 4 pg/ml、10 .17± 1.2 7pg/ml、2 .14± 0 .2 8μmol/L和 9.3 2± 1.0 1,两组间各项指标比较均有显著性差异 (均P <0 .0 1)。结论 双歧杆菌DNA能激活巨噬细胞 ,可增强巨噬细胞TNF α、IL 12及NO产生的水平及吞噬功能。

DNA指纹图谱鉴别双歧杆菌的研究

采用RAPD技术选用 10条引物对 7种 9株双歧杆菌基因组DNA进行PCR扩增 ,根据在优化条件下所得DNA指纹图谱分析了双歧杆菌菌株的遗传多样性 ,并构建了相似性指数矩阵和树状图。结果表明 ,不同序列的随机引物可扩增不同形式的RAPD图谱 ,但并非所有图谱都具有分类学意义 ,其中引物S2 56对双歧杆菌种及同种不同菌株均具有良好的区分能力 ,由该引物扩增的RAPD图谱计算出的相对性指数矩阵以及由此构建的聚类树状图均能正确地反映出双歧杆菌的系统发育关系 。

含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的:探讨双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟的影响.方法:纯化提取双歧杆菌DNA,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度;FACS检测BMDC的吞噬功能和表面标志分子,ELISA法检测BMDC分泌细胞因子水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力.结果:双歧杆菌DNA诱导24 h后BMDC高表达Ia,CD40,CD86和CD11 c分子,明显增加IL-6,IL-12(p40),TNF-α的分泌,显著增强同种异体和自体T细胞增殖的能力.结论:双歧杆菌DNA能够促进BMDC成熟,增强BMDC的抗原提呈能力.

两株双歧杆菌药敏性及其质粒DNA的检测

利用药敏纸片琼脂扩散法,检测了两株双歧杆菌BB-11和BB-12对临床常用的9大类20种广谱抗生素的药物敏感性。结果显示,两株菌对同一类药物的敏感性有着较好的吻合。对青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类(卡那霉素除外)全部表现为耐药,对β-内酰胺类、大环内酯类、万古霉素、四环素等全部表现为敏感或中度敏感。随后采用碱裂解法对两株受试菌进行了质粒提取,电泳检测未见条带,初步判断BB-11、BB-12中无质粒存在。