生物素酶缺乏症13例临床分析及随访

目的探讨生物素酶缺乏症(BTD)的临床特点、诊治和预后转归。方法收集13例BTD患儿的临床资料,应用气相色谱质谱(GC/MS)联用尿液有机酸分析、外周血生物素酶(BT)活性测定、聚合酶链反应-直接测序方法对BT基因的各个外显子及其两侧侧翼序列进行突变的检测,并对患儿进行随诊。结果13例患儿均检出BT基因突变,其中男8例,女5例,主要临床表现为反复气促(100%,13例)、皮疹(61.5%,8例)、抽搐(38.5%,5例)等。12例患儿(92.3%)尿液GC/MS分析提示3-羟基异戊酸升高,血气分析示持续性代谢性酸中毒、高乳酸血症。所有患儿均给予生物素治疗,48h内代谢紊乱纠正。随诊1~11年平均(4.681±2.739)年,均未再发代谢异常,体格、智力发育正常。结论反复皮肤黏膜损害、气促、反复癫痫发作、代谢性酸中毒、高乳酸血症是BTD的主要临床特征,对可疑患儿应尽早进行血尿代谢产物筛查及生物素酶活性测定,早期开始生物素治疗疗效显著,长期随诊预后良好。

生物素的生理功能及其分子作用机制

生物素是动物机体内维持正常生理机能所必需的一种维生素。它作为4种羧化酶辅酶成分,在哺乳动物体内的葡萄糖、氨基酸和脂肪酸代谢中起着重要作用。越来越多的研究表明,生物素对基因表达的调控起着重要的作用。本文综述了生物素的营养生理作用及其对基因表达调控的影响。

非荧光标记基因芯片法检测转基因成分的研究

开发了一种可同时检测四种转基因作物的高灵敏度非荧光标记(生物素标记)基因芯片方法。应用该方法检测了4种含一定浓度转基因产品(包括转基因大豆Roundup Ready、转基因玉米MON810、Bt11和转基因油菜RT73)的有证标准物质,并做了检测灵敏度试验。结果表明,该技术可同时有效检测这4种转基因产品中的11个目标基因,检测低限可达0.1%以下,在现有转基因产品检测方法(包括荧光标记基因芯片)中达到或超过最低水平,但其检测成本远低于荧光标记基因芯片法。

以喘息、智力运动发育倒退为临床表现的生物素酶缺乏症1例诊疗分析

目的分析生物素酶缺乏症(BTDD)的临床特点和诊疗方法。方法回顾分析1例生物素酶基因变异致BTDD患儿的临床资料,并复习相关文献。结果男性患儿,13月龄,生后8月龄起病,反复出现喘息,大运动发育倒退,顽固性代谢性酸中毒合并代偿性呼吸性碱中毒;尿液有机酸分析提示乳酸、酮体、琥珀酸、延胡索酸、2.3DH2MB、3 meglutarconate、苹果酸增高;生物素酶活性显著减低。全外显子基因检测提示患儿BTD基因c.1493dupT纯合变异,为致病性变异,分别来自表型正常的父母,确诊为BTDD。补充生物素后患儿喘息症状数小时内缓解。结论疑似BTDD者应尽早行血尿串联质谱检测,完善生物素酶活性和基因检测。

花生野生近缘种生物素羧基载体蛋白基因的克隆与结构分析

根据栽培花生鲁花14生物素羧基载体蛋白基因accB1和accB2cDNA序列设计基因特异引物,克隆了花生野生近缘种Arachis duranensis、A.rigonii、A.batizocoi和A.hoehnei的accB1和accB2cDNA序列。序列分析表明,accB1和accB2在栽培花生和野生近缘种中高度保守,氨基酸序列一致性分别高于98.6%和97.5%。A基因组A.duranensis、A.rigonii和B基因组A.batizocoi、A.hoehnei的accB1和accB2的氨基酸序列存在差异,但与基因组来源无关。花生野生近缘种A.duranensis、A.rigonii、A.batizocoi和A.hoehnei accB2基因组序列分析表明,栽培花生和野生近缘种的accB2的基因结构相同。A基因组的A.duranensis与B基因组的A.batizocoi和A.hoehnei的accB2基因组DNA核苷酸序列一致性分别为98.9%,98.8%,而A基因组的A.rigonii与A.duranensis、A.batizocoi和A.hoehnei的序列一致性分别为93.5%,93.6%,93.4%。研究表明,生物素羧基载体蛋白基因在栽培花生及野生近缘种中非常保守。

光敏生物素标记探针原位杂交检测肝癌基因表达

运用光敏生物素标记基因探针对２３例新鲜肝癌和癌旁组织的ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｐ５３ｍＲＮＡ进行原位杂交（ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ）检测，发现在部分组织切片中存在内源件生物素样物质而产生假阳性，本实验采用一种封闭内源性生物素样物质的方法解决了假阳性问题，对这一方法的机理进行了讨论。

甘蓝型油菜生物素羧基载体蛋白基因的克隆与结构分析

【目的】生物素羧基载体蛋白负责将羧基从生物素羧化酶转移到羧基转移酶上,对于长链脂肪酸的从头合成与种子含油量的形成具有十分重要的作用。本研究的目的是从甘蓝型油菜品种基因组DNA中分离生物素羧基载体蛋白(BCCP)基因的全长编码区序列,通过生物信息学分析揭示该基因的结构特征(包括内含子的数量、长度与分布,蛋白质保守区疏水性特征等)和功能关系。【方法】基因克隆采取同源序列法进行。【结果】分离得到的bccp基因全长均为1600bp左右,根据其结构特点可以分成3种类型,它们均包含5个内含子。bccp1基因编码的蛋白质具备完整的生物素化功能结构域,是唯一功能完整的基因序列;bccp2和bccp3由于移码突变造成蛋白合成提前终止,翻译的蛋白质均缺少生物素化结构域。【结论】本研究首次从中国冬油菜品种中克隆获得bccp基因的全长序列并揭示了其序列特征,为进一步利用该基因开展含油量的基因调控研究提供了科学依据。

两种非放射性标记方法在染色体原位杂交中敏感性的比较

通过原位杂交比较了地高辛配基和生物素标记探针，检测染色体单拷贝基因的敏感性。结果表明：在打点检测条上地高辛配基可检出３０ｆｇ低限探针ＤＮＡ，生物素为１ｐｇ。经原位杂交地高辛配基可检测出单拷贝基因，生物素未成功。

一种新型的基因表达水平检测方法

目的 :建立一种简便、特异的检测组织血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )受体基因表达变化的半定量逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscription polymerasechainreaction ,RT PCR)技术。方法 :采用异硫氰酸胍 酚 氯仿法提取组织总RNA ,用生物素 (biotin ,B)标记的AngⅡ受体的特异引物进行RT PCR扩增 ,PCR产物纯化后 ,再与过氧化物酶标记生物素竞争性地结合包被到酶标板上的亲和素 (avidin) ,经过显色反应并测定其吸光度值可反映特异性PCR产物量 ,从而推断模板核酸中AngⅡ受体基因的相对含量。结果 :异硫氰酸胍 酚 氯仿法提取组织总RNA的质量较高 ;PCR的最适反应条件为 94℃变性 30s、5 9℃退火 40s、72℃延伸 6 0s,循环 33次 ,最后 72℃延伸 5min ;酶标仪所测阴性对照和扩增产物光密度之差能够反映不同模板中AngⅡ受体基因的相对含量。结论 :该方法是一种简便、特异、可行的半定量RT

玉米cyclin Ⅲ基因的染色体原位杂交物理定位

本文首次报道了玉米低拷贝基因ｃｙｃｌｉｎⅢ（Ｂ－类）生物素标记的染色体原位杂交定位结果。供试探针为该基因的ｃＤＮＡ克隆，其长度仅为１６ｋｂ。结果表明，探针的信号分布在第６染色体短臂和第９染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为７００５±３３１和８６８６±１６４，检出率分别为８２９％和６８３％。文中对基因的物理位置与功能间的关系等作了讨论。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ_2基因多态性及其表达与糖尿病关系的研究

通过PCR—RFLP与免疫组织化学方法,研究过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ_2基因Prol2Ala多态性与糖尿病(DM)易感性的关系,以及人皮下脂肪组织中PPARγ_2的表达与DM的相关性.实验结果表明,DM患者基因型Pro/Ala为9%,而对照组Pro/Ala为5%,DM患者与对照组之间Prol2Ala多态性频率存在差异,但不显著;用SABC方法处理皮下脂肪组织后,DM患者与正常对照组切片染色不同.PPARγ_2可能会在DM的诊断和治疗过程中起到一定作用.

基于生物信号纳米放大技术的戊肝病毒检测基因芯片

建立了一种利用"双探针夹心银染"技术快速检测戊型肝炎病毒(HEV)的基因芯片方法.提取的病毒核酸经过RT-PCR扩增,PCR体系中用掺入生物素修饰的dUTP扩增得到带有生物素的核酸片段,5′末端-NH2修饰的同源寡核苷酸作为捕获探针固定到处理后的玻片上,该探针识别病毒的带有生物素的核酸片段,而链霉亲和素标记的胶体金与生物素紧密结合,通过银沉积在金颗粒表面放大信号可以目视结果.采用该方法对已经确证的86个血清样本进行检测,检出52个阳性和34个阴性样本,结果与荧光定量PCR检出一致.

玉米（Zea mays L．）盐逆境胁迫蛋白基因nac1的染色体原位杂交物理定位

报道了玉米低拷贝盐逆境胁迫蛋白基因ｎａｃ１生物素标记的染色体原位杂交结果．供试探针为这个基因的ｃＤＮＡ克隆，其长度仅为５５０ｂｐ．采用酶联免疫级联放大和ＤＡＢ检测系统检测，实验结果表明，杂交信号分布在第２染色体短臂和第１０染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为６７．５６±３．２９１和８０．９２±２．４１１，检出率分别为５．８１％和１０．３２％．

口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立

本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法,建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。试验利用RT-PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段,在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针——生物素和地高辛,使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物,从而与RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔IgG作为指控条带,下端标记抗地高辛抗体以捕获RT-PCR产物中的地高辛探针。组装金标试纸条,检测RT-PCR产物,结果表明该核酸试纸条可以检测到0.3×10^-3-3×10^-3μg/μL,敏感性高于琼脂糖凝胶电泳,两种方法的符合率高,核酸试纸条检测方法是一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了一种新的思路。

生物素对基因表达的调控作用及其机理

本文综述了生物素及其代谢产物对营养代谢相关基因和免疫活动相关基因表达的调控作用及其机理,为生物素的进一步研究提供参考。

应用非放射性标记探针原位杂交检测BCR/ABL基因表达

选择BCR/ABL cDNA 0.3kb的接合区序列,标记Biotin-14-dCTP,与慢性粒细胞白血病(CML)患者的细胞涂片原位杂交,链霉亲和素-碱性磷酸酶显色系统检测,建立了原位杂交检测BCR/ABL基因表达的方法。对3例非CML的血液病患者(对照组)、18例CML初诊和8例治疗后的CML患者骨髓进行检测。CML初诊患者17/18为阳性,1例阴性反应来自Ph染色体阴性型患者,CML治疗后患者BCR/ABL mRNA表达3/8为阳性,5/8为阴性。结合各例骨髓增生活跃程度,表明BCR/ABL基因表达水平可以反映治疗效果。

油桐生物素羧基载体蛋白编码基因VfBCCP的克隆与表达分析

油桐（Vernicia fordii）属于大戟科（Euphorbiaceae）油桐属植物,原产于我国,是世界上著名的木本工业油料树种。其种子榨出的桐油是品质最好的天然干性油之一。桐油具有干燥快、抗酸碱、耐冷热、防腐蚀等特性,作为重要的工业用油广泛应用于制造涂料、高级油墨、增塑剂、医药以及化学试剂等行业（黄挺,2001;Brown et al.,2005）。同时油桐作为生物柴油原料树种具有良好的应用前景（钱能志等,2007;Shang et al.,2010;Chen et al.,2010）。在油桐种子生长发育过程中,7月为桐油的缓慢形成期,7月底到9月初为桐油的迅速累积期,而9月初至10月中旬为桐油累积完成期（王汉涛等,1985）。

应用纳米金探针检测HSV-2的目视化基因芯片

本实验建立了一种应用金标链霉亲和素探针的目视化高灵敏度检测单纯疱疹病毒2型(HerpesSimplexVirus-2,HSV-2)的基因芯片。该芯片以HSV-2DNA聚合酶的高保守区为靶序列,设计HSV-2特异性引物和探针,通过PCR反应使扩增产物标记上生物素;氨基修饰的探针固定在活化的玻片上,与生物素标记的扩增产物杂交;利用生物素与链酶亲和素高亲合力的特性,加入纳米金标记的链酶亲和素后形成生物素-链酶亲和素-纳米金生物反应放大系统;银染反应后,达到目视化检测HSV-2效果。该HSV-2检测基因芯片能目视化检测出100fmol/L的HSV-2扩增产物,具有灵敏度高,低成本的特点,通过临床标本验证表明该芯片具有较高的准确性。

P33ING1在膀胱移行细胞癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的研究

目的探讨抑癌基因P33ING1在膀胱移行细胞癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的相关性。方法应用免疫组化S-P法和TUNEL法,检测83例BTCC及11例正常膀胱黏膜组织中P33ING1表达情况及细胞凋亡指数(AI)。结果 83例膀胱移行细胞癌组织中,P33ING1蛋白阳性表达率为59.03%,而正常膀胱黏膜组织中P33ING1蛋白阳性表达率为90.9%。P33ING1蛋白表达与膀胱移行细胞癌WHO肿瘤分级相关。AI与P33ING1蛋白表达无相关性。结论 P33ING1表达水平下降,可能在膀胱移行细胞癌的发生、发展过程中起重要作用,检测P33ING1表达水平,对膀胱癌的诊断、治疗和预后判断,可能具有重要意义。

阵发性哭闹伴运动倒退2月余

患儿,男,4.5月龄发病,表现为易激惹、运动倒退、角弓反张样姿势。头颅MRI示双侧豆状核、丘脑、中脑、小脑半球对称性异常信号。基因检测发现患儿SLC19A3基因存在复合杂合突变:c.950G>A(p.G317E)和c.962C>T(p.A321V),前者遗传自父亲,后者遗传自母亲。生物信息学分析提示两者均为有害突变。予生物素、硫胺素和"鸡尾酒疗法"治疗后病情好转,1月后头颅MRI示病变显著改善。该患儿最终确诊为生物素-硫胺素反应性基底节病(BTBGD)。BTBGD是一种可治性的常染色体隐性遗传性疾病,早期应用硫胺素、生物素治疗可获得满意的疗效。