TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究

目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。

产β-内酰胺酶伤寒杆菌与痢疾杆菌blaTEM耐药基因研究

目的:研究新余市产β-内酰胺酶伤寒杆菌与痢疾杆菌blaTEM-1D型耐药基因流行特征。方法:收集新余新钢中心医院、新余市人民医院、新余市中医院、新余市妇幼保健院2008年1月—2010年6月分离出的伤寒杆菌产酶株6株和痢疾杆菌产酶株13株共19株,用头孢哨噻吩滤纸片法做β-内酰胺酶的定性检测,确定为产酶株后,采用PCR技术扩增质粒blaTEM-1D耐药基因,用Mark标记量出扩增子的大小(bp),统计blaTEM-1D耐药基因阳性率。结果:伤寒杆菌、痢疾杆菌产酶株blaTEM-1D耐药基因阳性率分别为66.7%(4/6)、76.9%(10/13)。结论:blaTEM-1D型耐药基因在本地区各家医院间存在水平传播和医院内垂直传播。

鸡源大肠杆菌TEM-57型β-内酰胺酶基因的原核表达及酶特性

对该临床菌株进行接合试验,采用PCR扩增获得blaTEM-57基因片段,定向克隆入表达载体pET-28a构建重组质粒,经酶切和DNA测序鉴定后进行诱导表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性。结果显示,耐药质粒成功从供体菌接合转移到大肠杆菌C600,接合子对青霉素类及氨基糖苷类药物耐药。PCR扩增产物电泳出现blaTEM-57目的条带。重组质粒经EcoRⅠ、XholⅠ双酶切及测序鉴定后,显示pET-28α/TEM-57原核表达载体构建成功。原核表达的最优条件为IPTG浓度0.8mmol/L、温度37℃、诱导时间4h。blaTEM-57能水解氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻呋钠、头孢曲松钠、头孢噻肟钠及头孢哌酮,对头孢氨苄的Km最小为2.4,对头孢噻呋钠的Km最大为121.5;抑制剂舒巴坦钠和他唑巴坦对blaTEM-57水解抗生素有不同程度的抑制作用。pET-28α/TEM-57重组质粒得到成功构建和诱导表达,为进一步研究酶的其他特性及制备特异性的单克隆抗体奠定了基础。