黑蜂王台病毒研究进展

黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)是一种常见的蜜蜂病毒,春季和初夏高发,主要危害蜂王的幼虫和蛹,蜜蜂患病后短时间内死亡,王台壁进而变黑。黑蜂王台病毒已在世界不同蜂种间广泛传播,常以无明显症状的隐性感染方式存在于蜂群中,与蜜蜂微孢子虫联合危害表现出极强的致病性,对养蜂业造成巨大损失。作者从黑蜂王台病的病原学、流行病学、临床症状、致病过程、检测方法及防控方面对其研究进展进行综述,为进一步研究黑蜂王台病毒及其防制措施提供参考。

黑蜂王台病毒环介导等温扩增检测方法的建立

为建立一种快速检测蜜蜂黑蜂王台病毒(BQCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据Gen Bank中登录的BQCV-JL1株基因序列(KP119603.1)设计了多套LAMP引物,通过引物筛选,反应体系和反应条件优化,建立了可视化LAMP方法,并且评价了该方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,建立的LAMP方法在63℃下可对BQCV核酸进行高效扩增,可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性(最低检出限量为4.0×102拷贝/μL),为普通PCR的100倍。临床样品检测结果表明LAMP法检出率高于常规PCR。本研究建立的可视化LAMP方法操作简便,适用于BQCV的快速检测。

影响越冬期意大利蜜蜂健康的病毒种类研究

通过比较分析3个蜂场共48群意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)越冬前与越冬后的病毒感染情况,及其中1个蜂场8群蜜蜂越冬期间病毒感染情况的变化,探究与越冬期蜜蜂健康紧密相关的病毒种类。结果表明,残翅病毒(Deformed wing virus,DWV)、黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)和以色列蜜蜂麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)在越冬意蜂群中感染率很高。与越冬后正常蜂群相比,濒临死亡蜂群的IAPV基因组拷贝数极显著提高,达到了1×10~9左右;出现蜂群死亡的蜂场在越冬期间,蜂群DWV基因组拷贝数呈下降趋势,IAPV基因组拷贝数呈上升趋势。以上结果表明,IAPV是影响越冬期意蜂健康的最主要病毒。

蜜蜂黑蜂王台病毒病研究进展

蜜蜂黑蜂王台病是一种由蜜蜂黑蜂王台病毒(Black Queen Cell Virus,BQCV)引起的蜂王幼虫的疾病。该病毒的主要侵害对象是蜂王的幼虫和桶,感染的幼虫和桶在短时间内死亡。BQCV在世界各地蜂群中均有出现,呈现明显的季节性特点,春季和夏季是主要发病季节。当前BQCV常以隐性感染方式存在于蜂群各型蜂中,在成蜂中不表现明显的疾病症状,常与蜜蜂微孢子共同作用,削弱蜜蜂群势的发展,对养蜂业造成巨大损失。本文从BQCV的病原学、流行病学、症状判断与检测方法研究进行综述,为进一步深入研究BQCV的致病特点及其防控措施提供参考。

蜜蜂黑色王台病毒SYBR GreenⅠRT-qPCR检测方法的建立

为建立蜜蜂黑色王台病毒RT-qPCR检测方法,以蜜蜂黑色王台病毒(BQCV)衣壳蛋白基因部分序列作为目的基因,构建标准质粒并作为模板,建立标准曲线,且对所建立方法的灵敏度和特异性进行分析。结果表明:所建立的RT-qPCR检测方法,扩增效率E=1 08%,可信度R2=0.997。该方法灵敏度高,最低检出量为101个拷贝;该方法特异性强,仅能检出BQCV,而不能检测出蜜蜂囊状幼虫病毒、畸翅病毒。以上结果表明已成功建立了针对BQCV灵敏、特异的RT-qPCR检测方法。

山东省各地市蜜蜂黑蜂王台病毒抽样检测分析

蜜蜂黑蜂王台病是由蜜蜂黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)引起的蜜蜂疾病,目前在世界范围内均有分布。为检测山东省蜜蜂黑蜂王台病毒在蜂群中的携带情况,本研究对山东省17地市部分蜂场蜜蜂携带BQCV的情况进行抽样调查,并首次通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法初步对17地市的蜜蜂样本进行了快速病原学检测。检测结果显示,山东省17地市的62个蜂场中有来自7个地市的13个蜂场的蜂群携带BQCV,检出率为4.769%。结合调研情况及鉴定结果,我们还提供了5条可能防御蜜蜂黑蜂王台病发生的措施。希望本研究为有效预防山东省蜜蜂黑蜂王台病的发生提供参考。

中华蜜蜂不同体色蜂王的蜂群工蜂形态和生产性能比较及蜂种初步选育

【目的】选育江西本地优良的中华蜜蜂Apis cerana cerana蜂种。【方法】比较江西本地饲养的枣红色蜂王蜂群和黑色蜂王蜂群的生产性能,选择较优的一种作为亲本进行育王。利用人工授精技术控制处女王与雄蜂交尾,测定每代工蜂的初生重、单个采集蜂蜜囊重和38个外部形态指标并进行分析比较。【结果】枣红色蜂王蜂群的工蜂初生重和单个采集蜂蜜囊重均显著高于黑色蜂王蜂群,但在采集力和产育力方面两者差异均不显著。选取枣红色蜂王蜂群作为亲本进行育种,后代蜂群工蜂的初生重和蜜囊重都显著高于枣红色蜂群亲本。选育蜂群的工蜂长度指标均有显著提高,颜色、翅钩数和肘脉指数均与亲本差异显著。【结论】枣红色蜂王蜂群和黑色蜂王蜂群相比,两者在生产性能方面无显著差异。经初步选育的枣红色蜂群工蜂初生重和单个采集蜂蜜囊重均显著增加,但与亲本蜂群比较,工蜂的形态多样性并未出现明显分化。

北京地区六种蜜蜂病毒病的流行病学研究

【目的】对蜜蜂的6种病毒:以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)、残翅病毒(Deformed wing virus,DWV)、囊状幼虫病病毒(Sacbrood virus,SBV)、急性蜜蜂麻痹病毒(Acute bee paralysis virus,ABPV)、黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)、慢性麻痹病毒(Chronic bee paralysis virus,CBPV)在北京地区的流行情况进行调查,以期为该地区蜜蜂病毒病的防控提供一定的理论依据。【方法】应用多重RT-PCR法确定上述6种病毒在该地区的感染情况,并通过序列分析确定特异性。【结果】在所有检测样本中均未检测到急性麻痹病病毒和慢性麻痹病病毒,感染率最高的是以色列急性麻痹病毒,其次是残翅病毒。检测的样本普遍存在混合感染。【结论】以色列急性麻痹病毒、残翅病毒、囊状幼虫病病毒、黑蜂王台病毒4种病毒可能在北京地区广泛分布。

应用环介导等温扩增技术(LAMP)检测蜜蜂黑蜂王台病毒的研究

【目的】本文旨在建立用于临床检测黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）的环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）,为该疾病的检测和防控提供技术支撑。【方法】根据BQCV基因保守序列设计4条特异性引物,探究LAMP扩增的最优条件,并与常规的PCR（Polymerase chain reaction）检测方法进行比较。【结果】建立的LAMP方法特异性好,检测下限为86 fg,灵敏度比PCR高100倍。临床检测显示其对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica和中华蜜蜂Apis cerana cerana均准确有效,且检出率比普通PCR法高10%~20%。【结论】建立的针对BQCV的LAMP检测方法为养蜂生产第一线检测和预防BQCV提供了技术支持,有一定的应用价值。

Taq Man探针实时荧光PCR方法检测黑蜂王台病毒的方法建立和应用

为了建立实时荧光PCR方法以检测蜜蜂黑蜂王台病毒,试验依据Taq Man荧光标记探针技术原理,针对蜜蜂黑蜂王台病毒编码衣壳蛋白的保守序列区域,设计出1对特异性引物和1条探针,建立了一种快速检测黑蜂王台病毒(BQCV)的荧光PCR方法,对2005年从12省收集到的18种蜜蜂病料进行检测,确定各地区感染BQCV情况。结果表明:该方法对蜜蜂黑蜂王台病毒有较好的特异性,与其他蜜蜂病毒之间均无交叉反应;检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μL阳性质粒,可对低病毒含量的样品进行准确检测;变异系数为1.3%;应用该方法对2005年从12省收集到的18种蜜蜂病料进行检测,4 h内即可报告检测结果。说明该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等优点,适用于蜜蜂中黑蜂王台病毒的快速检疫。

蜜蜂黑蜂王台病毒RT-PCR快速检测方法的建立

目的建立蜜蜂黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的RT-PCR快速检测方法。方法根据BQCV全基因组序列,在其3′端1 000 bp的区域内设计1对特异性PCR引物,从受BQCV感染的蜜蜂的蛹样品中提取总RNA,进行RT-PCR,并对该法的特异性、敏感性及重复性进行验证。结果从BQCV全基因组序列中可扩增出700 bp的基因条带。该方法可扩增0.1 ng的BQCV DNA;仅能在BQCV中扩增出700 bp的目的基因条带,在蜜蜂急性麻痹病病毒、残翼病病毒、蜜蜂囊状幼虫病病毒中均未扩增出目的基因条带;对相同样品进行多次检测,均在700 bp处出现目的条带。结论已成功建立BQCV RT-PCR快速检测方法,该方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于黑蜂王台病的快速诊断和混合感染的鉴别诊断。

黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株衣壳蛋白VP基因克隆及序列分析

为了研究黑蜂王台病毒在中国的发展情况，在吉林省内疑似蜜蜂黑蜂王台病痛料中分离到1株BQCV毒株，记为中国BQCV—JL1（KP119603），对该分离株提取RNA，采用RT—PCR技术扩增其VP基因。结果表明：VP基因测序结果与GenBank中报道的BQCVVP基因序列同源性在89％～99％之间。将VP基因序列与GenBank中报道的17个序列进行系统遗传进化树分析，其中与13本分离株4（AB605360）、13本分离株3（AB605359）、13本分离株2（AB605358）及日本分离株Ac1（AB638414）、日本分离株Am3（AB638413）、日本分离株Am2（AB638412）株同源性最高（99％），而与南非分离株（AF183905）同源性最低（89％）。

皇后黑李优良单株——隆丰1号黑李的选育

对皇后黑李、隆丰1号黑李的生物学特征和植物学特性进行观察记载;开展皇后黑李优良单株的选育,选出优良单株——隆丰1号黑李。