基于JAK2/STAT3信号通路的乌鸡肽营养素配方治疗贫血功效研究

乌鸡是我国特有的鸡种,具有很好的补血功能,利用乌鸡开发新的补血产品具有很大优势。该研究通过对贫血小鼠灌喂添加营养素(EDTAFeNa和维生素)的乌鸡肽配方样品,测试对其造血能力的恢复功效并通过探究信号通路研究造血作用机制。实验通过使用环磷酰胺和乙酰苯肼制造小鼠贫血模型,并检测外周血象、骨髓病理学观察、间接胆红素含量、ATP酶活力、造血因子水平以及JAK2/STAT3信号通路。结果表明乌鸡肽营养素配方可以显著恢复外周血细胞和骨髓造血干细胞数量;减少间接胆红素含量,提高ATP酶活力从而保护红细胞免受破裂损伤;通过分泌促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、重组巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素-3(interleukin-3,IL-3)造血因子促进造血细胞恢复,并通过JAK2/STAT3信号通路调控造血细胞增殖分化。该研究为乌鸡肽的开发和利用提供了指导。

乌骨鸡活性肽组成成分及体外抗氧化活性研究

本实验对乌骨鸡活性肽的蛋白质含量、多肽含量、游离氨基酸含量和多肽的分子量分布进行了研究,并通过测定乌骨鸡活性肽对Fenton反应产生的羟自由基、邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子的清除率,考察乌骨鸡活性肽的体外抗氧化能力。乌骨鸡活性肽组成分析表明:活性肽中蛋白质含量为90.53%,其中主要成分为小分子多肽(51.46%)和氨基酸(36.17%)。乌骨鸡活性肽分子量分布的凝胶色谱法测定结果显示其分子量集中在1900Da以下,其中小肽所占相对比例较大。体外抗氧化实验结果表明:乌骨鸡活性肽具有较强的清除羟自由基的能力,其清除率与浓度呈剂量关系;并能明显降低邻苯三酚自氧化速率,抑制率与浓度呈正相关,但与肌肽比较,乌骨鸡活性肽的体外抗氧化能力相对要弱。

乌骨鸡活性肽对体外非酶糖基化的抑制作用

采用正交实验优化了体外非酶糖基化反应体系,体系中加入不同浓度的乌骨鸡活性肽Ⅰ、Ⅱ37℃孵育,同时以肌肽为阳性对照,观察乌骨鸡活性肽对非酶糖基化反应的影响。通过测定预定时间体外非酶糖基化体系的吸光度和荧光值计算乌骨鸡活性肽对非酶糖基化反应的抑制率和对非酶糖基化终产物生成的抑制率。结果表明乌骨鸡活性肽Ⅱ对体外非酶糖基化反应和非酶糖基化终产物的生成均具有较强的抑制作用。

泰和乌骨鸡活性肽补血作用研究

目的:探讨泰和乌骨鸡活性肽体内补血作用。方法:利用失血法和骨髓抑制药物氟尿嘧啶注射法联合建立小鼠血虚模型,并测定红细胞(RBC)和血红蛋白(HGB)水平,观察乌骨鸡活性肽及其一种分离活性肽(简称组分A)对血虚小鼠的补血作用。结果:活性肽组RBC水平在第12天时与血虚组相比差异显著(P<0.05);活性肽组在第6至12天期间升高RBC和HGB作用水平与阿胶组相比明显加快,具有显著性差异(P<0.05)。第18天时活性肽组HGB水平已超过各组水平,且与正常组相比具有显著性差异(P<0.05)。活性肽组分A组的RBC水平在各个时间点均高于血虚组,但均无显著性差异(P>0.05),活性肽组分A组在第20天时HGB水平已与正常组无显著性差异(P>0.05),而血虚组和阿胶组仍与正常组有极显著差异(P<0.01)。结论:泰和乌骨鸡活性肽及活性肽组分A能够在一定程度上提高氟尿嘧啶血虚模型小鼠的红细胞和血红蛋白水平,具有一定的补血作用。

乌鸡低聚肽铁配合物的稳定性研究

以乌鸡为原料制备乌鸡低聚肽铁配合物,以分子量分布和铁含量为指标,对乌鸡低聚肽铁配合物的热稳定性、酸碱稳定性和消化稳定性进行了考察。结果表明：在温度为20~80℃时,乌鸡低聚肽铁配合物各个分子量区间的比例变化不超过2%,配合物的铁含量无显著性差异;在pH为3~9时,分子质量小于1 000 u的总含量略有升高,但升高不到6%,铁含量有所降低,但在广泛的pH范围内仍然有58.4%以上的铁含量;乌鸡低聚肽铁配合物经过蛋白酶消化后,分子质量小于1 000 u的总含量略有升高,但升高不到8%,经过胃蛋白酶消化和胰蛋白酶共同消化后,仍然有37.6%的铁含量。这说明乌鸡低聚肽铁配合物具有一定的热稳定性、pH稳定性以及消化稳定性。

乌骨鸡活性肽研究进展

乌骨鸡是我国特有的国家级保护药食两用家禽,因其体内含有丰富的营养成分和生物活性物质,受到古今中外研究者的关注,并进行了相关研究。文章对乌骨鸡活性肽的制备及其生物学活性进行综述,为进一步开发利用乌骨鸡提供理论参考。

泰和乌骨鸡活性肽对5-氟尿嘧啶诱导HSF细胞损伤的保护作用

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究泰和乌骨鸡活性肽对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤细胞DNA的保护作用。方法:传代培养人皮肤成纤维细胞(HSF),随机分为正常对照组,5-FU组,5-FU+泰和乌骨鸡活性肽组。应用MTT法检测细胞存活率,单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测5-FU引起HSF细胞DNA损伤程度,羟脯氨酸试剂盒检测细胞培养液中羟脯氨酸含量。结果:与正常对照组比较:5-FU组HSF细胞DNA的损伤程度较严重,且尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量显著增加(p<0.001),细胞培养液中羟脯氨酸含量显著性减少(p<0.05)。与5-FU组比较,泰和乌骨鸡活性肽组细胞的尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量均显著性减少(p<0.001),而细胞培养液上清中羟脯氨酸含量升高(p<0.01)。结论:泰和乌骨鸡活性肽对HSF细胞DNA损伤具有保护作用,泰和乌骨鸡活性肽可以剂量依赖性地降低5-FU诱导的HSF细胞DNA的断裂损伤。

泰和乌骨鸡活性肽的分离及其体外抗氧化作用

利用制备型HPLC对泰和乌骨鸡活性肽进行分离,流动相为0.01mol/L的磷酸盐溶液,采用强酸型离子交换树脂和强碱型离子交换树脂两步脱盐法对泰和乌骨鸡活性肽各分离组分进行脱盐处理。以肌肽和抗坏血酸为对照,通过清除羟自由基作用、抑制脂质过氧化作用以及对Fe2+和Cu2+螯合能力4个体系测定泰和乌骨鸡活性肽及其分离组分的体外抗氧化能力。结果表明:泰和乌骨鸡活性肽分离所得13个组分均具有一定的抗氧化能力,且与质量浓度呈量效关系,绝大部分分离活性肽组分比活性总肽有更强的羟自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力以及Fe2+螯合能力。

乌鸡肽的营养成分及其功能特性研究

探讨乌鸡肽的营养成分及功能,为其深度开发打下基础。利用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶水解乌骨鸡肌肉、活性炭脱色法制备乌鸡肽,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测乌鸡肽的总氨基酸及游离氨基酸含量及相对分子质量分布区间、纳升级液相色谱串联质谱(Nano liquid chromatography tandem mass spectrometry,Nano LC-MS/MS)技术鉴定其组成成分。结果表明,游离氨基酸占总氨基酸的比例为1.74%,总氨基酸含量较高者为Leu、Ala、His、Pro、Met和Phe,游离氨基酸含量较高者为Glu、Pro、Asp、Arg、Gly和Ala;相对分子质量分布范围为0至6 918 Da,其中1 084 Da以下的比例达到88.91%;Nano LC-MS/MS鉴定出源于107种蛋白质的2 287种肽段序列,其中种类最为丰富的蛋白为参与骨骼肌修复的蛋白及酶类。该研究较为全面的分析乌鸡肽的营养成分,并表征了其功能,为乌鸡肽的潜在应用价值研究打下基础。

酶解对乌骨鸡多肽抗氧化活性影响的研究

研究了不同的酶及酶解条件对乌骨鸡多肽抗氧化能力的影响,以得到最优的酶解条件及较高抗氧化能力的多肽。结果表明,在温度为50℃、酶用量[E/S]8000U/g、底物浓度为7%时,胰蛋白酶水解乌骨鸡多肽可以获得更高抗氧化能力的多肽;进一步对胰蛋白酶水解条件正交实验优化,结果表明,胰蛋白酶水解的最优条件为温度50℃、pH8.5、酶用量[E/S]6000U/g、反应时间6h及底物浓度9%,此时有最高的抗氧化能力,在33.3μg/mL乌骨鸡多肽浓度时能清除45.41%的羟自由基,比同一浓度条件下的VC的羟自由基清除率高了4%。

泰和乌骨鸡肉模拟胃肠道消化液中ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定

研究泰和乌骨鸡肉在胃肠道消化过程中的降血压活性,并鉴定出其中确定具有降血压活性的肽序列。采用体外模拟胃肠道消化法,测定了不同阶段消化液对血管紧张素I转化酶(ACE)的抑制作用,并选择其中的小肠道消化液,对其进行超滤、制备型反相高效液相色谱、凝胶柱色谱分离纯化,最后通过HPLC/Q-TOF MS鉴定出一种新型ACE抑制肽G lu-Pro-Leu-Tyr-Tyr。

泰和乌骨鸡活性肽对小鼠骨髓有核细胞的增殖作用

采用MTT法测定活性肽对正常小鼠骨髓有核细胞的增殖作用,利用高效液相色谱-2,4-二硝基氟苯柱前衍生法测定4个活性肽组分的氨基酸组成。结果表明:小鼠骨髓细胞培养时间为24 h,泰和乌骨鸡活性肽质量浓度为0.1、1、10、100μg/mL,组分7、8、9、10可极显著(P<0.01)促进小鼠骨髓有核细胞增殖,增殖率达130%以上。在低质量浓度(0.1μg/mL)条件下,组分7能显著促进小鼠骨髓有核细胞增殖(P<0.01)且重现性较好,组分8可刺激小鼠骨髓有核细胞增殖298%。氨基酸组成分析表明,组分7、8、9、10均含有丰富的酪氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸,可以推测该5种氨基酸组成了刺激小鼠骨髓有核细胞增殖活性成分的物质基础。

HPLC-PAD法优化乌骨鸡活性肽分离纯化

乌骨鸡是一种具有药用价值的鸡种,乌骨鸡的鸡肉蛋白通过酶促水解后可获得多肽产物乌骨鸡活性肽,营养价值高,分离纯化活性肽是研究乌骨鸡应用价值的基础。利用装置C18反相色谱柱或TSKgel凝胶色谱柱的高效液相色谱仪进行乌骨鸡活性肽的分离优化,针对流动相、流速进行优化的同时,参考波长、进样量,以出峰数为主,结合分离度等考察分离效果。结果表明:C18柱的出峰数随甲醇含量及流速的降低而增加;三氟乙酸或磷酸盐作缓冲液时出峰数基本一致,但分离度不同;综合因素得pH 6.0磷酸盐/6%甲醇/水体系的流动相、0.2 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。TSKgel柱的乙腈分离效果优于甲醇,梯度洗脱效果较好;综合因素得出0.1%三氟乙酸/(10%~25%)乙腈/水体系的流动相、0.5 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。

乌骨鸡多肽的体外抗氧化活性研究

在对乌骨鸡多肽的蛋白质含量、水解度及多肽的分子量分布研究基础上,通过测定乌骨鸡活性肽对邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子、Fenton反应产生的羟自由基、DPPH自由基的清除率,还原能力及抑制脂质体过氧化,全面考察了乌骨鸡多肽的体外抗氧化能力。结果表明:乌骨鸡多肽能明显降低邻苯三酚自氧化速率,对羟自由基有极强的清除能力,对DPPH自由基清除率随浓度增加而增加,其IC50分别为1.53、0.051.7mg/mL和1.60mg/mL;进一步研究表明,乌骨鸡多肽具有一定的还原力且与浓度呈正比例关系,同时也能抑制脂质体的过氧化反应。

乌鸡低聚肽亚铁螯合物的分离纯化与结构鉴定（英文）

从乌鸡中酶解得到乌鸡低聚肽,然后与亚铁螯合制备乌鸡低聚肽亚铁螯合物,螯合率为84.76±0.12%。乌鸡低聚肽亚铁螯合物具有较高的蛋白质含量,高达54.64±1.03%。并且分子量较低,其中分子量小于1000 u的占85.50%。通过扫描电镜、红外光谱对乌鸡低聚肽亚铁螯合物的结构进行分析,结果表明乌鸡低聚肽亚铁螯合物是一种新型的铁螯合物。体外稳定性研究表明乌鸡低聚肽亚铁螯合物具有一定的热稳定性、酸碱稳定性和体外消化稳定性。通过反相高效液相色谱对乌鸡低聚肽亚铁螯合物进行分离纯化,选择一个主要的组分进行收集,然后利用质谱仪进行质谱分析。从乌鸡低聚肽亚铁螯合物的主要组分中鉴定出一个五肽,氨基酸序列为Thr-Ser-Gly-Met-Pro。乌鸡低聚肽亚铁螯合物可作为一种铁补充剂用于食品添加剂、营养物及医药制品中。

乌骨鸡多肽制备及其抗氧化活性研究

主要研究了乌骨鸡多肽制备及抗氧化性。通过响应面分析法确定乌骨鸡多肽制备的工艺条件,即为pH为6.2,加酶量为1819U/g,酶解温度为50℃,酶解时间为120 min,同时试验结果表明,乌骨鸡多肽对羟自由基和超氧阴离子自由基具有较强清除能力,因此,乌骨鸡多肽具有较好的抗氧化活性。