PD1/PD-L1、中性粒细胞弹性蛋白酶、赖氨酰氧化酶在膀胱癌中的表达及其与膀胱癌预后的关系

目的探讨膀胱癌组织中程序性细胞死亡受体1(PD1)、程序性细胞死亡配体1(PD-L1)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、赖氨酰氧化酶(LOX)的表达水平及其表达差异与膀胱癌患者临床病理特征和预后的关系。方法选取2018年1月至2020年12月江西省人民医院收治的56例膀胱癌患者的癌组织作为研究对象,并记录患者的复发和死亡情况进行分析研究。采用免疫组织化学染色法检测PD1、PD-L1、NE、LOX的表达情况,分析PD1、PD-L1、NE、LOX与患者的病理特征和预后的关系。结果免疫组化结果显示PD1在肿瘤相关免疫细胞中存在表达(46/56);TNM分期T2-T3期、高级别肿瘤和出现淋巴结转移的患者PD1和PDL-1的表达阳性率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。NE与PD1、PDL-1的表达呈正相关(P<0.05);LOX与PD-L1、PDL-1的表达呈正相关(P<0.05)。PD1阳性表达患者3年无进展生存率为58.70%(27/46),PD-L1阳性表达患者3年无进展生存率为43.48%(10/23),不同PD1、PD-L1表达患者的3年无进展生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论膀胱癌组织中PD1、PD-L1表达增加可作为膀胱癌患者潜在的预后预测指标,有助于筛选术后复发的高危患者,并为膀胱癌的免疫学治疗提供新靶点。

老年膝关节骨性关节炎患者血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平表达与病情严重程度的相关性研究

目的探究老年膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者血清长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)膀胱癌相关转录因子1(bladder cancer associated transcript 1,BLACAT1)和长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-H19水平表达与病情严重程度的相关性。方法收集2021年11月~2023年2月在荆门市中医医院进行诊治的120例老年KOA患者作为研究对象(KOA组)。根据凯尔格伦-劳伦斯(Kellgren-Lawrence,K-L)分级将KOA组患者分为轻度组(n=41)、中度组(n=45)和重度组(n=34),另以同期行健康检查者为对照组(n=120)。实时荧光定量PCR法测定血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平,比较KOA组患者与对照组血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平,分析不同病情程度KOA组患者血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平。Spearman相关性分析KOA患者血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平与病情程度间的关系,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平对KOA的诊断价值。结果KOA组患者血清LncRNA BLACAT1(1.31±0.31),LncRNA-H19(1.41±0.37)水平均显著高于健康对照组(0.99±0.24,1.03±0.25),差异具有统计学意义(t=8.941,9.322,均P<0.05);重度组KOA患者血清LncRNA BLACAT1(1.53±0.36),LncRNA-H19(1.71±0.44)水平均显著高于轻度组(1.13±0.27,1.18±0.29)和中度组(1.32±0.31,1.40±0.38)(q=7.806,4.183;8.709,5.200,均P<0.05),且中度组高于轻度组(q=3.983,3.884,均P<0.05),差异具有统计学意义。Spearman相关性分析结果显示,血清LncRNA BLACAT1,LncRNA-H19水平与病情程度均呈显著正相关(r=0.552,0.414,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,LncRNA BLACAT1,LncRNA-H19单独诊断KOA的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.860,0.869,特异度分别为74.2%,80.8%,敏感度分别为66.7%,69.1%,两者联合诊断KOA的AUC为0.966,敏感度和特异度分别为90.0%,81.7%。结论KOA患者血清LncRNA BLACAT1和LncRNA-H19水平均显著升高,且与KOA患者病情程度呈显著正相关,两者联合检测可有效预测KOA的发生。

膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达及与患者肿瘤特征、预后的相关性分析

目的观察膀胱癌组织中自噬基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达状况,并分析两者与预后的相关性。方法选取2020年1月—2021年8月新疆医科大学附属肿瘤医院病理资料完整的110例膀胱癌患者。观察患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达状况,记录病理参数,并对患者进行为期1年的随访。统计预后情况,观察不同病理参数及预后的膀胱癌患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,并分析两者与患者预后的相关性。结果膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白高表达率较癌旁组织低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达率较癌旁组织高(P<0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者Beclin1蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者Beclin1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Phi系数相关性分析,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白与预后不良均呈负相关(Phi=-0.277和-0.222,均P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:Beclin1高表达[O^R=3.892(95%CI:1.504,10.072)]、LC3Ⅱ蛋白中低表达[O^R=3.358(95%CI:1.165,9.677)]是预后不良的危险因素(P<0.05)。结论膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ表达与预后密切相关,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达是预后不良的危险因素。

膀胱癌组织中miR-144、肺癌转移相关转录本1及睾丸蛋白聚糖表达及其诊断价值

目的分析膀胱癌组织中miR-144、肺癌转移相关转录本1(MALA T1)及睾丸蛋白聚糖(SPOCK1)表达及其诊断价值。方法2018年1月~2021年1月本院收治的膀胱尿路上皮癌病人96例,膀胱电切或膀胱根治性切除留取膀胱癌病人新鲜肿瘤组织(肿瘤组)及距离肿瘤边缘>2cm癌旁正常组织(癌旁组)标本,各5mg。使用聚合酶链式反应(PCR)检测不同组织中miR-144、MALAT1及SPOCK1相对表达量,分析miR-144、MALAT1及SPOCK1在不同膀胱癌病理特征中表达情况,绘制ROC曲线,检验miR-144、MALAT1、SPOCK1对膀胱癌的诊断价值。96例病人均在本院进行外科手术+术后辅助化疗,通过电话和门诊随访等方式对病人进行随访,随访截止至2022年1月30日,比较不同预后者miR-144、MALAT1及SPOCK1的表达。结果肿瘤组中MALAT1及SPOCK1相对表达量高于癌旁组,而miR-144相对表达量则低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移者miR-144表达低于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移者MALAT1、SPOCK表达高于Ⅰ~Ⅱ期、中高分化与无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-144、MALAT1及SPOCK1对膀胱癌诊断AUC值分别为0.643、0.557,SPOCK1诊断AUC值为0.717(95%Cl:0.688~0.845),以SPOCK1诊断AUC值最高(P<0.05)。96例病人预后良好85例,预后不良11例。预后不良组miR-144低于预后良好组,MALAT1及SPOCK1高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论膀胱癌组织中miR-144、MALAT1及SPOCK1表达异常,与病人病理特征存在一定联系,或可作为膀胱癌潜在诊断标志物。

非肌层浸润性膀胱癌TURBT治疗患者血清UBC1和DJ-1表达水平及其对预后预测价值研究

目的研究非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)患者血清长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1[(LncRNA)upregulated in bladder cancer 1,UBC1]、帕金森病相关蛋白-1(DJ-1)的表达情况,分析两者对NMIBC患者预后的影响。方法选择2018年2月~2019年2月于河南科技大学第一附属医院接受经尿道膀胱肿瘤电切(TURBT)治疗的120例NMIBC患者为研究对象(NMIBC组),以同期健康体检的60例健康人群为对照组。应用实时荧光定量PCR检测各组血清UBC1水平。应用酶联免疫吸附实验检测各组血清DJ-1水平。比较不同临床病理特征NMIBC患者血清UBC1和DJ-1表达差异。Kaplan-Meier生存曲线分析血清UBC1和DJ-1表达对NMIBC患者无进展生存预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响NMIBC患者无进展生存预后的因素。结果相比于对照组,NMIBC组血清UBC1(4.19±0.48 vs 1.27±0.29)和DJ-1(8.62±3.60 ng/ml vs 4.31±1.07 ng/ml)水平升高,差异具有统计学意义(t=43.300,12.117,均P<0.05)。肿瘤T1期、高级别NMIBC患者血清中UBC1(5.21±0.56,5.11±0.53),DJ-1(11.28±3.98 ng/ml,10.50±3.87 ng/ml)表达分别高于Ta/Tis期、低级别患者(3.79±0.43,3.64±0.44;7.34±3.04ng/ml,7.49±3.23 ng/ml),差异具有统计学意义(t=15.314,5.966;16.393,4.584,均P<0.05)。UBC1高表达组和低表达组患者的平均无进展生存时间分别为28.17±3.68个月和33.59±3.32个月。UBC1高表达组患者累积无进展生存时间低于UBC1低表达组患者,差异具有统计学意义(Log-Rank testχ^(2)=6.681,P<0.05)。DJ-1高表达组和低表达组平均无进展生存时间分别为27.34±3.29个月和34.27±3.54个月。DJ-1高表达组患者累积无进展生存时间低于DJ-1低表达组患者,差异具有统计学意义(Log-Rank testχ^(2)=11.262,P<0.05)。肿瘤分期T1期(HR=1.613,95%CI=1.223~2.126)、肿瘤分级高级别(HR=1.917,95%CI=1.314~2.799),UBC1高表达(HR=1.937,95%CI=1.229~2.745)和DJ-1高表达(HR=1.738,95%CI=1.246~2.426)是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立危险因素。结论NMIBC患者血清UBC1和DJ-1表达升高,两者表达与肿瘤分期及肿瘤分级有关,是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立因素。

胸腔积液lncRNA BLACAT1及lncRNA CASC9水平对肺腺癌的诊断价值

目的探讨胸腔积液长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1(lncRNA BLACAT1)及长链非编码RNA癌症易感性候选物9(lncRNA CASC9)表达对肺腺癌的诊断价值。方法选择2021年1月至2022年12月该院收治的96例肺腺癌合并胸腔积液患者作为肺腺癌组,并选择同期收治的肺部良性病变合并胸腔积液患者82例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组患者胸腔积液lncRNA BLACAT1及lncRNA CASC9的表达,建立受试者工作特征(ROC)曲线分析其对肺腺癌的诊断价值。结果肺腺癌组胸腔积液lncRNA BLACAT1、lncRNA CASC9相对表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA BLACAT1表达与肺腺癌患者临床分期、淋巴结转移、分化程度有关,lncRNACASC9表达与患者临床分期、分化程度有关(P<0.05);胸腔积液lncRNA BLACAT1、lncRNA CASC9联合鉴别诊断肺腺癌模型:Logit(P)=1.933×lncRNA BLACAT1+0.448×lncRNA CASC9-3.987。胸腔积液中lncRNA BLACAT1、lncRNA CASC9诊断肺腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.782、0.789,联合检测的AUC为0.878,高于单项指标检测(P<0.05)。结论lncRNA BLACAT1、lncRNA CASC9在肺腺癌患者胸腔积液中表达上调,且与临床病理有关,二者联合对肺腺癌具有较好的临床诊断价值。

紫草素通过Keap1/Nrf2通路对膀胱癌细胞恶性增殖及凋亡的影响及作用机制

目的探讨紫草素对膀胱癌(BC)细胞T24恶性增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法含不同浓度紫草素培养液(0、10、20、40、80μmoL·L^(-1))培养对数生长期T24细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)生成水平;比色法检测细胞丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)含量;RT-qPCR技术检测细胞中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA相对表达;Western blot法检测细胞中Keap1、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)及醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白相对表达量。结果T24细胞存活率、集落形成数、GSH含量、Nrf2 mRNA和蛋白、HO-1及NQO1蛋白相对表达量均随紫草素作用浓度增加而降低(P<0.05);紫草素作用效果呈浓度依赖性(P<0.05)。结论紫草素可抑制BC细胞恶性增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Keap1/Nrf2通路激活,提高细胞内ROS水平进而促进BC细胞内氧化还原稳态失衡有关。

RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞失巢凋亡的影响

目的:观察RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞株BIU-87增殖和失巢凋亡的影响。方法:构建针对MTA1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),应用MTA1 siRNA转染处理人膀胱癌细胞株BIU-87后,分别采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白的表达,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测BIU-87细胞失巢凋亡。结果:与对照组比较,MTA1 siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.01)。MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导BIU-87细胞失巢凋亡,且与浓度相关(P<0.01)。结论:MTA1 siRNA可抑制膀胱癌细胞株BIU-87增殖,诱导失巢凋亡可能是其机制之一。

尿液外泌体长链非编码RNA MALAT1和HIF1A-AS2对膀胱癌诊断的价值

目的 检测膀胱癌患者尿液外泌体中人肺腺癌转移相关转录因子1 (MALAT-1)和缺氧诱导因子1α反义RNA2(HIF1A-AS2)的表达水平,分析其与患者临床病理参数的关系,探讨其在膀胱癌诊断中的临床应用价值。方法 收集2019年1月至2020年12月于西安医学院第一附属医院就诊的膀胱癌、膀胱良性疾病患者及健康人各40例尿液样本,采用ELISA法检测各组尿液外泌体中MALAT1和HIF1A-AS2的表达水平。进一步分析其与膀胱癌患者临床病理参数的相关性;绘制ROC曲线并分析MALAT1和HIF1A-AS2对膀胱癌的诊断价值。结果 膀胱癌组中MALAT1和HIF1A-AS2的表达水平显著高于膀胱良性疾病和健康人对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);MALAT1和HIF1A-AS2的表达水平与膀胱癌患者的病理分级和分期的差异无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤的大小密切相关(P<0.05);尿液外泌体中MALAT1诊断膀胱癌的曲线下面积(AUC^(ROC))为0.748,敏感性为75.0%,特异性为66.25%;HIF1A-AS2诊断膀胱癌的AUC^(ROC)为0.757,敏感性为75.0%,特异性为68.75%;MALAT1和HIF1A-AS2联合检测诊断膀胱癌的AUC^(ROC)为0.820,敏感性为85.0%,特异性为81.25%,均高于两项指标的单独诊断价值。结论 尿液外泌体中高表达的MALAT1和HIF1A-AS2可作为膀胱癌诊断的潜在生物学标志物。

血清VEGF、CYFRA21-1水平变化与浸润性膀胱癌患者临床分期的关联性分析

目的探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)、细胞角蛋白片段19抗原21-1(CYFRA21-1)水平变化与浸润性膀胱癌患者临床分期的关联性。方法选取我院2016年11月-2018年9月83例不同临床分期浸润性膀胱癌患者设为恶性组,另选取同期收治的83例膀胱良性肿瘤疾病患者设为良性组、83例健康体检者设为健康组。入院后第2 d晨起时抽取各组空腹静脉血4 ml,以化学发光免疫法测定血清CYFRA21-1水平,以酶联免疫吸附法测定血清VEGF水平。统计分析三组血清CYFRA21-1、VEGF水平及恶性组不同远处转移情况患者、不同分化程度患者、不同临床分期浸润性膀胱癌患者血清CYFR A21-1及VEGF水平,并统计分析血清CYFRA21-1及VEGF水平与浸润性膀胱癌临床分期间相关性。结果单因素方差检验可知,三组血清CYFRA21-1及VEGF水平间存在显著差异(P<0.05),多重比较,良性组血清CYFRA21-1及VEGF水平高于健康组(P<0.05),恶性组血清CYFRA21-1及VEGF水平高于良性组(P<0.05);发生远处转移的浸润性膀胱癌患者血清CYFRA21-1及VEGF水平高于未发生远处转移的浸润性膀胱癌患者(P<0.05);低分化浸润性膀胱癌患者血清CYFRA21-1及VEGF水平高于高中分化浸润性膀胱癌患者(P<0.05);不同临床分期浸润性膀胱癌患者血清CYFRA21-1及VEGF水平间存在显著差异(P<0.05),多重比较,Ⅳ期浸润性膀胱癌患者血清CYFRA21-1及VEGF水平高于Ⅲ期患者(P<0.05),Ⅲ期浸润性膀胱癌患者血清CYFRA21-1及VEGF水平高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05);Pearson检验可知,血清CYFRA21-1及VEGF水平与浸润性膀胱癌临床分期间存在显著正相关关系(P<0.05)。结论浸润性膀胱癌患者VEGF及CYFRA21-1血清含量显著增高,于发生远处转移及低分化者中增高幅度更加显著,且其表达水平随浸润性膀胱癌临床分期增高而增高,两者间存在显著正相关关系。

UCA1和miR-141在膀胱癌细胞和膀胱癌组织中的表达及与临床预后的相关性研究

目的探讨尿路上皮癌相关1(UCA1)和miR-141在膀胱癌细胞和膀胱癌组织中的表达及与临床预后相关性。方法测定人膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1及人膀胱癌细胞株BIU-87、EJ、T24、T24-MMC、T24-ADM UCA1和miR-141 mRNA表达情况;同时测定78例患者膀胱癌组织及癌旁正常组织UCA1、miR-141 mRNA表达水平,分析其表达情况与患者预后的相关性。结果膀胱癌细胞株BIU-87、EJ、T24、T24-MMC、T24-ADM组UCA1、miR-141mRNA水平明显高于膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1组,差异有统计学意义(P <0. 05);耐药膀胱癌细胞株T24-MMC、T24-ADM组UCA1、miR-141 mRNA水平明显高于非耐药胱癌细胞株T24组,差异有统计学意义(P <0. 05);膀胱癌组UCA1、miR-141 mRNA明显高于癌旁正常组,差异有统计学意义(P <0. 05); UCA1、miR-141 mRNA水平与肿瘤分级、肌层浸润、肿瘤分期、发病特点呈正相关(r值分别为0. 53、0. 57、0. 61、0. 41、0. 58、0. 43、0. 56、0. 40,P <0. 05);UCA1-组、miR-141-组、UCA1-/miR-141-组3年生存率及生存期均明显高于UCA1+组、miR-141+组、UCA1+/miR-141+组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 UCA1、miR-141在膀胱癌组织的表达量高于正常膀胱组织,UCA1、miR-141在膀胱癌的发生发展过程中起促进作用; UCA1、miR-141低表达患者能获得较好的预后。

长链非编码RNA膀胱癌相关转录因子1通过调控miR-5590-3p/SMAD5信号轴抑制喉鳞状细胞癌的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)膀胱癌相关转录因子1(bladder cancer-associated transcript 1,BLACAT1)在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)中的表达及其对喉鳞癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测45例喉鳞癌组织和对应的癌旁组织中BLACAT1和miR-5590-3p的表达,分析BLACAT1表达与临床病理学参数的关系。将BLACAT1 siRNA、对照siRNA及阴性对照和miR-5590-3p模拟物转染喉鳞癌Hep-2细胞,采用qRT-PCR检测BLACAT1、miR-5590-3p和母亲DPP同源物5(果蝇)[mothers against DPP homolog 5(Drosophila),SMAD5]的表达,CCK-8和Transwell小室检测Hep-2细胞增殖和侵袭的变化,双荧光素酶报告基因检测miR-5590-3p与BLACAT1和SMAD5之间的相互作用。结果 喉鳞癌组织中BLACAT1的表达水平(8.483±0.995)显著高于癌旁组织(1.099±0.019),差异有统计学意义(t=5.765,P<0.001)。在有淋巴结转移的喉鳞癌组织中BLACAT1的表达水平(12.50±1.772)显著高于无淋巴结转移组织(6.268±1.997),差异有统计学意义(t=3.319,P=0.0018)。BLACAT1的表达与淋巴结转移和组织学分级密切相关(P<0.01)。抑制BLACAT1的表达能够显著抑制Hep-2细胞的增殖和侵袭能力。miR-5590-3p在喉鳞癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,且miR-5590-3p表达的上调能够显著抑制Hep-2细胞的增殖和侵袭能力。此外,BLACAT1和SMAD5是miR-5590-3p的直接作用靶点,下调BLACAT1表达能促进Hep-2细胞中miR-5590-3p的表达和抑制SMAD5的表达,而miR-5590-3p模拟物能抑制Hep-2细胞中SMAD5的表达。结论 BLACAT1/miR-5590-3p/SMAD5调控轴可能在喉鳞癌细胞的增殖和侵袭中发挥重要作用,因而可能成为喉鳞癌患者潜在的治疗靶点。

慢病毒介导的结肠癌转移相关基因1过表达对膀胱癌T24细胞增殖侵袭能力以及对肝细胞生长因子信号通路的影响

目的:观察结肠癌转移相关基因1(MACC1)对膀胱癌细胞株T24增殖、侵袭能力以及对肝细胞生长因子信号通路(HGF/c-Met)的影响。方法:构建靶向过表达MACC1基因的慢病毒载体LV-MACC1-GFP,感染膀胱癌T24细胞株,经过筛选,建立稳定过表达MACC1基因的膀胱癌T24细胞株。通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法(western blotting)分别检测MACC1、HGF、c-Met基因mRNA与蛋白表达量,噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell体外细胞侵袭实验分别研究稳定过表达MACC1基因对细胞增殖和迁移的影响。结果:与阴性对照组相比,实时荧光定量PCR与western blotting证实,慢病毒LV-MACC1-GFP组MACC1、HGF、c-Met mRNA与蛋白表达量皆显著升高,Transwell细胞侵袭实验显示LV-MACC1-GFP组细胞迁移能力显著增强(P<0.05)。结论:慢病毒介导稳定过表达MACC1基因能使膀胱癌T24细胞株的增殖能力及侵袭能力增强,活化HGF/c-Met通路。

MTA1在膀胱癌的表达及其与预后的相关性

目的检测转移相关基因1(MTA1)在膀胱癌组织中的表达水平以及其对患者预后的影响。方法应用Western blot方法以及实时定量PCR法检测MTA1在7例膀胱癌组织及对应癌旁组织的表达情况,并应用免疫组织化学法验证MTA1在116例膀胱癌组织及癌旁组织的表达水平,分析其表达水平与患者年龄、肿瘤大小、T分期、淋巴结转移、淋巴管浸润等临床病例资料之间的关系,探讨MTA1对患者预后的影响。结果 Western blot和PCR证实在蛋白及mRNA水平MTA1在膀胱癌组织表达水平均高于其对应的癌旁组织(蛋白水平P=0.006,mRNA水平P=0.002)。免疫组化显示,MTA1在膀胱癌中的阳性率为63.79%,与患者的淋巴结转移(P=0.035)、淋巴管浸润(P=0.001)有关,而与患者的年龄、肿瘤大小、T分期等没有统计学意义;高表达MTA1的患者5年生存率显著低于无或低表达的患者(P=0.012);MTA1的表达是患者预后的独立因素。结论MTA1在膀胱癌中的表达水平显著高于癌旁组织,其表达水平影响患者的预后,可能在膀胱癌的转移过程中发挥关键作用,提示MTA1可作为膀胱癌预测、治疗的新靶点。

MALAT1在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的探讨膀胱癌中长链非编码RNA肺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达及其与膀胱癌患者预后的相关性。方法原位杂交方法检测120例膀胱癌组织中MALAT1的表达,分析MALAT1表达与膀胱癌临床特征及预后的相关性;Kaplan-Meier生存法及Log-rank检验分析MALAT1表达强度与膀胱癌患者生存时间的关系;Cox比例风险回归模型评价影响膀胱癌生存危险性的个体变量。结果高表达的MALAT1与高组织学分级、高临床分期及淋巴结转移阳性相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄及肿瘤的大小、数目无关(P>0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,MALAT1高表达组的总生存期短于低表达组;Cox回归多变量分析表明,高临床分期、淋巴结转移阳性和高表达量的MALAT1为影响膀胱癌预后的独立危险因素。结论 MALAT1的表达随着组织学分级、临床分期的升高,以及淋巴结转移阳性而显著上调,其高表达可作为判断膀胱癌预后的一个独立危险因素。

血浆外泌体LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA表达水平对乳腺癌早期诊断的价值研究

目的 分析血浆外泌体长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,LncRNAs)膀胱癌相关转录因子1(bladder cancer associated transcript-1,BLACAT1)和E钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA在乳腺癌早期诊断中的价值。方法 对江油市人民医院自2019年1月~2020年9月确诊的96例乳腺癌患者血液样本进行分析,并以75例在该院进行体检的健康女性血液样本作为对照组。qRT-PCR检测血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA表达水平,分析二者表达水平分别与患者临床病理特征之间的关系,Pearson法分析乳腺癌患者血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin m RNA表达的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA对乳腺癌患者诊断的敏感度和特异度。结果 与健康对照者相比,乳腺癌患者血浆外泌体LncRNA BLACAT1表达水平显著升高(2.02±0.57vs 0.99±0.03),差异有统计学意义(t=15.622,P=0.000),而E-cadherin mRNA表达水平显著降低(0.65±0.18 vs1.00±0.04),差异有统计学意义(t=16.514,P=0.000)。血浆外泌体LncRNA BLACAT1表达水平与乳腺癌患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(χ^(2)=5.046~12.879,均P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)无关(χ^(2)=0.107~2.959,均P>0.05);E-cadherin mRNA表达水平与乳腺癌患者TNM分期、ER和PR、分化程度有关(χ^(2)=6.485~19.513,均P>0.05),而与患者年龄、肿瘤大小和淋巴结转移无关(χ^(2)=0.142~1.289,均P>0.05)。乳腺癌患者血浆外泌体中LncRNA BLACAT1与E-cadherin mRNA水平呈显著性负相关(r=-0.274,P=0.007)。血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA单独诊断时的曲线下面积(AUC)分别为0.839和0.808,敏感度分别为69.80%和60.00%,特异度分别为89.70%和88.50%,截断值分别为2.08(95%CI:0.759~0.919,P<0.05)和0.48(95%CI:0.719~0.897,P<0.05);联合诊断的AUC为0.941(95%CI:0.896~0.985),敏感度和特异度分别为92.30%和85.60%。结论 血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA联合检测可显著提高乳腺癌患者诊断的敏感度,对早期乳腺癌的诊断和后续治疗具有重要意义,二者有望成为未来乳腺癌诊断的有效指标。

lncRNA UBC1和BMP2在胃癌组织中的表达及意义

目的:探究胃癌组织中长链非编码RNA-尿路上皮癌相关基因1(lncRNA UBC1)、骨形态发生蛋白2(BMP2)表达水平及其与临床病理特征、预后的关系。方法:选取2013年1月—2015年1月收治的胃癌患者79例作为研究对象,于术中收集胃癌组织及癌旁正常组织(距病灶>5 cm)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法进行lncRNA UBC1、BMP2 mRNA表达水平检测,采用免疫组织化学染色法进行BMP2蛋白水平检测;采用Kaplan-Meier法分析不同lncRNA UBC1、BMP2蛋白水平患者生存情况;采用Cox回归模型分析胃癌患者预后不良的影响因素。结果:胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2 mRNA表达水平及BMP2蛋白高表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05)。T_(3)~T_(4)、Ⅲ~Ⅳ期、淋巴转移患者胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2蛋白高表达率明显高于T_(1)~T_(2)、Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴转移患者(P<0.05),且低分化胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2蛋白高表达率明显高于中、高分化胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA UBC1、BMP2蛋白高表达患者5年累积生存率均明显低于lncRNA UBC1、BMP2蛋白低表达患者(P<0.05)。浸润深度(T_(3)~T_(4))、TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)、淋巴转移、lncRNA UBC1高表达、BMP2 mRNA高表达是胃癌患者不良预后发生的危险因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中lncRNA UBC1、BMP2表达水平均明显升高,与分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴转移等临床病理特征和患者预后不良发生密切相关。

长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1、癌症易感性候选物9在恶性胸腔积液中的表达及诊断价值

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录本1(BLACAT1)、癌症易感性候选物9(CASC9)在恶性胸腔积液中的表达及诊断价值。方法选取96例胸腔积液患者,其中良、恶性胸腔积液患者各48例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测良恶性胸腔积液中BLACAT1和CASC9的相对表达量,比较不同临床特征肿瘤患者恶性胸腔积液中BLACAT1、CASC9的相对表达量。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、BLACAT1、CASC9单独及联合检测对恶性胸腔积液的诊断效能。结果恶性胸腔积液中BLACAT1、CASC9的相对表达量均明显高于良性胸腔积液(P﹤0.01)。年龄﹥65岁肿瘤患者恶性胸腔积液中CASC9的相对表达量高于年龄≤65岁患者(P﹤0.05)。CEA单独检测诊断恶性胸腔积液的AUC为0.918(95%CI:0.863~0.974),高于BLACAT1、CASC9、CYFRA21-1,此时的灵敏度、特异度分别为87.2%、81.2%。BLACAT1+CASC9+CEA联合检测诊断恶性胸腔积液的AUC为0.938(95%CI:0.888~0.989),高于BLACAT1+CASC9、BLACAT1+CASC9+CYFRA21-1联合检测的AUC,此时的灵敏度、特异度分别为91.5%、81.2%。结论BLACAT1、CASC9在恶性胸腔积液中表达明显上调,对恶性胸腔积液具有较好的诊断效能,BLACAT1+CASC9与CEA联合检测能够进一步提高诊断效能。

膀胱癌细胞及组织中长链非编码RNA UCA1、miR-195表达变化及其与患者预后的关系

目的观察膀胱癌细胞及组织中长链非编码RNA(LncRNAs)尿路上皮癌抗原1(UCA1)和miR-195的表达及其与膀胱癌患者临床病理特征的关系,探讨UCA1和miR-195与膀胱癌患者预后的关系。方法选取人膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1作为对照组,膀胱癌细胞株T24为膀胱癌细胞组。选择经根治性膀胱切除术后患者的膀胱上皮癌组织及癌旁正常组织各50例,收集患者的病理分级、临床分期、肿瘤浸润、复发等资料。采用RTPCR法检测膀胱癌细胞及组织中UCA1、miR-195表达,采用Pearson相关性分析法分析UCA1与miR-195表达的相关性。术后对50例患者随访3年,采用Cox回归模型分析影响患者预后的因素。结果膀胱癌细胞组UCA1表达高于对照组、miR-195表达低于对照组(P均<0. 05)。膀胱癌组织中UCA1表达高于癌旁正常组织、miR-195表达低于癌旁正常组织(P均<0. 05)。病理分级较高、临床分期T3～T4者、肿瘤浸润及复发者UCA1表达较高,病理分级低者、临床分期T1～T2者、肿瘤未浸润及初发者miR-195表达较高(P均<0. 05)。Pearson相关性分析示,膀胱癌组织中UCA1与miR-195表达呈负相关(r=-0. 673,P <0. 05)。临床分期T1～T2患者生存率高于T3～T4期患者,UCA1阴性表达患者生存率高于阳性表达患者,miR-195阳性表达患者生存率高于阴性表达患者(P均<0. 05)。Cox回归模型示UCA1阳性、miR-195阴性、临床分期T3～T4及肿瘤转移是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(P均<0. 05)。结论膀胱癌细胞及组织中LncRNA UCA1表达增高、miR-195表达降低,UCA1表达增高、miR-195表达降低均与膀胱癌患者的预后不良显著相关。

饥饿微环境激活YAP1蛋白调控自噬促进膀胱癌细胞的增殖

目的探究饥饿微环境下膀胱癌细胞恶性增殖能力的变化及其机制。方法将膀胱癌T24细胞分为2组,正常组:细胞正常培养,饥饿组:细胞采用不含血清的HBSS处理6 h模拟癌细胞饥饿微环境;分别予以自噬抑制剂氯喹(CQ)或siRNA敲减YAP1基因,观察自噬水平变化以及增殖能力的改变。同时以YAP1及自噬相关基因LC3B表达量构建风险预测模型,分析二者表达量与临床预后的相关性。结果CCK-8及克隆形成实验显示饥饿诱导后膀胱癌细胞增殖能力显著增加(P<0.01),且增殖能力的改变是通过增加细胞周期由G_(1)期进入S期,而两组细胞凋亡差异无统计学意义。Western blot及免疫荧光检测P62蛋白降解程度及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值,结果显示饥饿可诱导膀胱癌细胞自噬水平上调(P<0.05),而采用CQ阻断自噬流后膀胱癌细胞增殖能力不再受饥饿影响。YAP1蛋白在饥饿诱导后可出现过表达及磷酸化水平的下降(P<0.01),而抑制自噬不影响这一结果。利用siRNA干扰YAP1的表达后膀胱癌细胞自噬水平受到明显抑制,同时增殖能力下降(P<0.05)。生物信息学分析发现YAP1在恶性程度高的膀胱癌患者癌组织中表达水平更高,且YAP1与LC3B基因表达水平越高的患者预后更差。结论饥饿诱导膀胱癌细胞YAP1的过表达,通过增强自噬水平促进膀胱癌细胞恶性增殖,且YAP1与自噬在膀胱癌发展过程中起到相互协同的促癌作用。