小鼠可移植性膀胱移行细胞癌株（BTT739）的建立及实验研究

用化学致癌剂ＢＢＮ诱异Ｔ７３９近交系小鼠膀胱肿瘤，于诱癌２６周时，将其中１只雄性小鼠膀胱癌往同种系小鼠皮下移植获成功。於１９９１年５月２５日建立了我国第一株小鼠可移植性膀胱癌模型，经２年多时间，已移植传代５６代次，其生物学和病理学特征已相对稳定，在同系小鼠移植成功率１００％，无自然消退现象，带瘤小鼠平均存活５４天，病理组织学检查证实ＢＴＴ７３９为低分化小鼠膀胱移行细胞癌，经２０种抗癌药物药敏试验结果表明对其中的１６种显示不同程度敏感。

高能聚焦超声对皮下移植性膀胱肿瘤治疗的初步观察

目的：研究高能聚焦超声（ＨＩＦＵ）辐射治疗对小鼠皮下移植肿瘤的可行性。方法：采用已建立的小鼠皮下可移植性膀胱肿瘤模型，用国内研制的ＨＩＦＵ仪对皮下荷瘤鼠进行了实验研究。实验分为：治疗组小鼠４５只，采用超声强度７００Ｗ／ｃｍ２的ＨＩＦＵ对小鼠皮下移植瘤进行辐照治疗；对照组小鼠４５只，不采用任何处理。观察治疗后荷瘤鼠生存时间，生长曲线，以及治疗后靶组织的光镜、电镜下改变。结果：平均生存时间：治疗组３７．２０±８．２２天，对照组１４．０７±２．４６天（Ｐ＜０．０１）。ＨＩＦＵ治疗后肿瘤组织呈灰白色，治疗区皮肤无灼伤，治疗后３ｈ，靶区瘤细胞肿胀，并可见点状坏死，１周时出现了边界清楚的凝固性坏死区。

小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠过程中外周血血小板计数的动态变化及意义

目的:建立环磷酰胺(CTX)治愈荷膀胱癌T739小鼠的动物模型,观察外周血象特别是血小板计数在化疗治愈肿瘤中的动态变化及其意义。方法:给正常T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织,建立荷膀胱癌的小鼠模型。接种后第7天,荷瘤小鼠腹腔内分别注入15、40、100mg/kg的CTX,等量生理盐水对照,确定CTX治愈肿瘤的量效关系。然后再取12只荷瘤小鼠,随机分成2组,15mg/kgCTX单次腹腔内注射,等量生理盐水对照,分别在用药后6h、用药后第2、4、9、14天内眦静脉取血,进行血常规检测,分析荷瘤小鼠外周血象的动态变化。结果:15～100mg/kgCTX治疗后2周内,荷瘤小鼠肿瘤生长受抑制或肿瘤结节缩小的速率与所用CTX的剂量呈正相关;CTX治疗后2月,荷瘤小鼠的存活率与所用CTX的剂量呈负相关。15mg/kgCTX单次腹腔内注射在治愈多数荷瘤小鼠的同时对外周血象无明显抑制作用。用药后6h治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数为(1483.4±184.4)×109/L,明显高于对照组小鼠(1086.6±81.0)×109/L,两组数据比较具有统计学意义(P<0.01);用药后第2、4、9、14天治疗组荷瘤鼠外周血血小板计数与对照组小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:15mg/kgCTX可治愈多数荷膀胱癌T739小鼠。单剂量CTX治疗后6h荷瘤小鼠外周血血小板计数的一过性增高可能与其抗肿瘤作用有关。

CXCR4基因沉默后对T24膀胱癌细胞株裸鼠移植瘤的影响

目的探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)基因沉默后对人膀胱移行细胞癌裸鼠移植瘤的影响。方法构建人膀胱移行细胞癌T24细胞株裸鼠膀胱癌移植瘤模型,荷瘤裸鼠随机分为小干扰RNA(siRNA)组、空白对照组和阴性对照组,各组分别在瘤旁注射CXCR4 siRNA、无菌生理盐水和无关序列。监测肿瘤生长情况,比较各组裸鼠成瘤大小。采用RT-PCR、免疫组织化学及Western blot方法检测各组裸鼠肿瘤组织中CXCR4 mRNA及蛋白的表达情况。结果 siRNA干扰组裸鼠移植瘤体积显著小于空白对照组和阴性对照组,分别为(1 423.60±148.23)mm3、(2 516.00±208.03)mm3和(2 420.40±162.36)mm3,P<0.05;siRNA干扰组裸鼠移植瘤CXCR4 mRNA水平及蛋白表达率显著低于空白对照组和阴性对照组,分别为(0.397±0.035)vs(0.844±0.027)v(s 0.828±0.015),P<0.05和(62.60±11.89)vs(132.60±13.28)v(s 127.60±16.02),P<0.05。结论CXCR4 siRNA能抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞株裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调CX-CR4 mRNA和蛋白的表达。

小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠动物模型的建立

[目的]建立单一剂量环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）治愈荷膀胱癌小鼠的动物模型。[方法]T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织建立荷瘤小鼠模型。肿瘤接种后第7天,不同剂量的CTX单次腹腔内注射,观察荷瘤小鼠用药后体重和肿瘤结节直径的变化,找出CTX可治愈多数荷瘤小鼠的最低有效剂量。然后再取12只荷瘤T739小鼠随机分成两组,最低有效剂量的CTX单次腹腔内注射,等量生理盐水作对照,分别在治疗后第4、14天内眦静脉取血进行白细胞计数。[结果]接种2 mm^3的小鼠膀胱癌肿瘤组织可使T739小鼠肿瘤进行性生长,接种后第7天肿瘤直径约为2-4 mm。15-400 mg/kg的CTX单次腹腔内注射后1周内,荷瘤小鼠肿瘤结节缩小的速率和毒性反应均与所用CTX的剂量呈正相关。CTX治疗后2月,100-200 mg/kg CTX治疗组的荷瘤小鼠全部死亡;40 mg/kg CTX治疗后20%的荷瘤小鼠存活;15 mg/kg CTX治疗组60%的荷瘤小鼠存活,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。15 mg/kg CTX治疗后第4天荷瘤小鼠外周血WBC为（11.36±0.30）×10^9/L,对照组为（11.14±2.14）×10^9/L,两组数据比较差异无统计学意义（P〉0.05）;治疗后第14天,治疗组小鼠WBC计数降为（8.46±0.76）×10^9/L,与CTX治疗后第4天WBC计数比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,但与对照组（9.86±3.40）×10^9/L比较差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]15 mg/kg CTX单次腹腔内注射后荷瘤小鼠无明显毒性反应,并可使多数荷瘤小鼠肿瘤治愈,因此,小剂量CTX治愈荷膀胱癌小鼠模型成功建立。

荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型的建立

目的通过细胞移植法建立模拟人的膀胱原位癌荷瘤裸鼠模型,为临床膀胱癌的防治提供新的思路。方法将人膀胱移行细胞癌株T24原位移植到裸鼠膀胱内后定期用磁共振成像(MRI)检测,并进行解剖,组织病理学和免疫细胞学检查。结果裸鼠膀胱内的癌发生率为94.0%(47/50),组织病理学检查:Ⅰ级23例,Ⅱ级15例,Ⅲ级9例,免疫细胞学证实该模型具有人膀胱移行细胞癌株T24的特性。结论模拟人的荷瘤裸鼠膀胱癌原位模型符合临床上膀胱肿瘤向膀胱内生长的过程,具有很强的实用性。

重组人白细胞介素-6抑制BTT_(739)小鼠膀胱癌生长和转移的实验研究

目的 探讨重组人白细胞介素 6对小鼠膀胱癌BTT739生长和转移的抑制作用。方法将BTT739肿瘤细胞接种于T739近交系小鼠皮下 ( 2 6× 10 5/小鼠 ) ,2 4只小鼠随机分成 3组 ,第 3天始分别给予对照组溶剂 ( 0 9NS) 0 3mL ,治疗组重组人白细胞介素 6( 4× 10 6IU kg) ,日 2次 ,腹腔注射 ,共 2 0天 ,阳性对照组MMC ( 1mg kg)日 1次 ,腹腔注射计 14天。第 2 5天测对照组和治疗组的皮下瘤重及肺转移率 ,分别进行t检验和 χ2 检验。结果 两组皮下瘤重分别为 11 4± 1 9g和 7 4± 0 8g ,重组人白细胞介素 6有明显抑制BTT739肿瘤生长作用 ,抑瘤率 35 1% (P<0 0 5) ,而对肺转移灶数目及转移灶大小的抑制率分别为 61 3%和 2 6 2 % (P值均 <0 0 5) ,有显著性差异。结论 重组人白细胞介素 6可明显抑制BTT739小鼠膀胱癌生长和转移。

小鼠膀胱移行细胞癌细胞株（WYH929）的建立及其生物学特性

小鼠膀胱移行细胞癌细胞株（ＷＹＨ９２９）是本室建立的小鼠膀胱移行细胞癌可移植动物模型（ＢＴＴ７３９）。将瘤组织经机械法剪碎，胰酶消化获得细胞悬液，置于含２０％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液中，经连续传代培养而建株。光镜和电镜观察显示该细胞株具有来自恶性上皮细胞特征，染色体检查证明其分布广泛，众数为７０～７６条的超二倍体肿瘤。现上海第一人民医院病理科２０００８５１．３细胞形态观察培养过程中，间隔１２ｈ取出培养瓶子倒置相差显微镜下观察细胞出长动态变化。同时使用盖玻片法培养，做ＨＥ染色，观察细胞形态学特征。１．４染色体制片取１８代，２８代生长７２ｈ细胞，加入０．２５μｇ／ｍｌ秋水仙素３滴。２ｈ后，胰酶消化，离心，再以７５μｍｏｌ／ＬＫＣｌ低渗处理后离心，弃去上清液。以甲醇、水醋酸（３：１）液固定１５ｍｉｎ，离心后保留１ｍｌ固定液，制片Ｇｉｅｍａｓ染色。油镜下计数。１．５生长曲线测定取第１２代细胞采取重复培养法测定其生长率，每瓶细胞数为５×１０４／瓶，每隔２４ｈ取出１瓶进行细胞计数，绘制生长曲线。１．６ 流式细胞仪（ＦＣＭ）检测取２４代细胞，以正常Ｔ７３９系小鼠新鲜膀胱为对照，用美国ＢｅｃｌｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏ?

高能聚焦超声治疗膀胱肿瘤的实验研究

为探索高能聚焦超声（HIFU）经腹治疗小鼠膀胱肿瘤的可行性，采用同系移植技术建立小鼠膀胱可移植性移行细胞癌模型，观察：①HIFU对膀胱荷瘤鼠生存期的影响；②荷瘤鼠生存曲线的变化；③HIFU对荷瘤鼠肿瘤体积及肿瘤重量的影响；④靶区肿瘤组织以及邻近组织超微结构变化。结果荷瘤鼠生存时间治疗组为22．90±4．78d，对照组为14．10±3．52d，两组有非常显著性差异（P＜0．01）；HIFU可导致肿瘤组织凝固性坏死，明显减轻肿瘤负荷。认为HIFU可以治疗小鼠膀胱肿瘤，为下一步临床研究奠定了理论基础。

血管内皮生长因子siRNA对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的观察VEGF siRNA对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨VEGF作为膀胱癌基因治疗靶点的有效性。方法已稳定转染pGC-siVEGF的T24接种至裸鼠皮下,建立荷瘤裸鼠膀胱癌模型。利用免疫组织化学方法(SABC)检测肿瘤细胞VEGF和肿瘤间质CD34的水平,根据CD34表达情况评价肿瘤微血管密度(MVD),末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)测定肿瘤细胞凋亡指数。结果实验组与对照组相比较:成瘤率低,肿瘤生长速度缓慢(P<0.01);VEGF水平下降(P<0.01);肿瘤微血管密度减少(P<0.01);凋亡指数升高(P<0.01)。组间比较差异均具有显著性。结论以VEGF为靶点的小干扰RNA有抑制VEGF表达、遏制膀胱癌T24细胞在体内生长的作用,VEGF有可能成为临床膀胱癌基因治疗的有效靶点,为膀胱癌的抗血管生成疗法提供理论基础。

^(131)I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的生物分布研究及辐射剂量评估

目的探讨131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠模型中的体内生物分布和对肿瘤的靶向定位性能以及其生物安全性,并由此估算131I-BDI-1在人体内主要脏器的内照射吸收剂量和人体有效剂量。方法通过氯胺-T法用131I溶液直接标记抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1,制备131I-BDI-1,荷人膀胱癌EJ细胞裸鼠尾静脉注射222kBq131I-BDI-1后,于不同时刻处死动物,取感兴趣器官和组织,称重并测量放射性计数,计算131I-BDI-1在荷瘤裸鼠中的标准摄取值和靶/非靶组织比值。利用标准的MIRD数据表计算人体的%ID/g,通过MIRDOSE3.1软件估算131I-BDI-1对人体各个器官的辐射吸收剂量及有效剂量。结果生物分布数据示131I-BDI-1血液清除缓慢,肿瘤部位放射性明显持续滞留,除血液外,具有较高的靶/非靶组织比值。131I-BDI-1人体内照射的有效剂量为1.46×10-2mGy/MBq。结论131I-BDI-1对肿瘤有良好的靶向性,有望成为一种新型的针对人膀胱癌肿瘤的诊治药物,其辐射吸收剂量较低,作为肿瘤治疗药物是安全的。

甲基硝基亚硝基胍诱发小鼠膀胱肿瘤早期病变的动态观察

本项研究采取膀胱灌注 MNNG 诱发小鼠膀胱肿瘤,对 MNNG 引起膀胱上皮早期病变进行了动态观察。肿瘤的发生,发展经历了从单纯增生,乳头状,结节状增生,良性乳头状瘤,非浸润癌浸润癌这样一个典型的病理过程。诱发的膀胱肿瘤均为移行细胞肿瘤。

龙蛇羊泉汤对膀胱癌小鼠抗氧化能力的影响

[目的]探讨龙蛇羊泉汤对BTT739膀胱癌荷瘤小鼠的抗氧化能力的影响。[方法]BTT739肿瘤细胞接种T739小鼠,随机分组,①龙蛇羊泉汤组:龙蛇羊泉汤灌胃0.15 mL 2次/d;②对照组:每日灌胃生理盐水0.15 mL 2次/d;测定荷瘤小鼠的血清Se,及血清脂质过氧化物(LPO)的水平。[结果]龙蛇羊泉汤组小鼠可以维持小鼠血清Se的水平,由接种时的(0.264±0.004)μg/mL则降低至(0.206±0.012)μg/mL,对照组的Se值由接种时的(0.267±0.007)μg/mL降低至(0.107±0.01)μg/mL(P<0.05);龙蛇羊泉汤组小鼠血清LPO由接种时的(2.20±0.13)μmol/L升高至(8.43±0.25)μmol/L,对照组的LPO值由接种时的(2.24±0.07)μmol/L升高至(13.6±0.46)μmol/L(P<0.05)。[结论]龙蛇羊泉汤增加小鼠机体抗氧化的能力可能是龙蛇羊泉汤清热解毒的重要机制。

华蟾素注射液配伍复方斑蝥胶囊对膀胱癌荷瘤小鼠瘤体的生长抑制作用

目的探讨华蟾素注射液配伍复方斑蝥胶囊对膀胱癌荷瘤小鼠瘤体的生长抑制作用。方法建立膀胱癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白对照组、对照组及实验组,肿瘤生长1周时开始给药,实验组给予华蟾素注射液及复方斑蝥胶囊,对照组给予注射用吡柔比星,并设空白对照(仅用生理盐水),给药量均以临床常用量为标准,给药4周后处死裸鼠,分别测量、记录瘤体重量。结果空白对照组、对照组、实验组的平均瘤重(6.82±1.034g、4.79±0.973g、3.08±1.129g),对照组、实验组抑制率分别为31.89%、50.47%,对照组、实验组抑制率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论对照组、实验组对膀胱癌均具有抑制作用,且实验组较对照组对膀胱癌荷瘤小鼠瘤体生长抑制作用更明显。

^（131）I－抗膀胱癌单克隆抗体对荷瘤裸鼠的放射免疫治疗研究

用^（１３１）Ｉ标记的抗ＢＩＵ－８７ＭｃＡｂ对荷人膀胱癌裸鼠进行放射免疫治疗，结果显示对肿瘤有明显的抑制作用。高剂量组（１４８００ｋＢｑ组）疗效明显优于低剂量组（７４００ｋＢｑ组），其治疗后第４周对肿瘤的抑制率分别为９９％及７２％。未发现１４８００ｋＢｑ^（１３１）Ｉ－抗ＢＩＵ－８７ＭｃＡｂ对小鼠产生毒性。

吡柔比星联合苏拉明对人膀胱癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的:研究吡柔比星联合苏拉明对人膀胱癌裸鼠移植瘤的影响。方法:将24只BALB/c裸鼠T24人膀胱癌细胞接种后随机分为对照组、吡柔比星组、苏拉明组、吡柔比星和苏拉联合用药组(联合治疗组)(每组n=6)给予不同处理,观察各组裸鼠移植瘤用药后的生长曲线变化。4周后处死取出肿瘤组织:测量肿瘤大小、重量并计算抑瘤率;采用免疫组化检测肿瘤组织微血管密度(Microvessel density,MVD)、流式细胞分析仪细胞凋亡、反转录酶-聚合酶链锁反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组肿瘤组织中成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,b FGF)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)m RNA的表达。结果:联合治疗组肿瘤生长曲线明显慢于其它各组;联合治疗组抑瘤率(56.03%)明显高于吡柔比星组(30.12%)、苏拉明组(35.32%)抑瘤率(P<0.05);吡柔比星组、苏拉明组及联合治疗组MVD值分别为13.01±2.98、11.32±2.11、8.82±0.77,与对照组MVD(19.88±2.62)相比明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测凋亡显示联合治疗组细胞凋亡率(38.57±3.98)明显高于吡柔比星组(14.78±2.95)、苏拉明组(20.92±3.67)及对照组(10.03±1.34)(P<0.05);RT-PCR结果显示,联合治疗组b FGF和VEGF表达量明显降低。结论:吡柔比星和苏拉明联合应用在体内能抑制膀胱癌裸鼠移植瘤的生长、诱导肿瘤细胞的凋亡和抑制肿瘤血管生成。