灭活处理鸡新城疫疫苗替代流感病毒血凝及血凝抑制实验教学效果分析

比较灭活处理鸡新城疫疫苗株(La Sota株,简称鸡新城疫疫苗)替代流感病毒疫苗株(H 9N 2株,简称流感疫苗)的血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验在实验教学中的应用。采用0.25%甲醛溶液灭活处理鸡新城疫疫苗后,分别对该疫苗的安全性及稳定性进行逐一检测,并与流感病毒同时进行HA及HI试验,以评价该灭活苗的相应HA及HI试验效果及两种病毒株试验结果的符合率。灭活处理的鸡新城疫疫苗安全性符合国家药典规定。该疫苗的血凝效价及其免疫血清的血凝抑制实验效价稳定,通过分批次抽取样品进行检验显示,抽检符合率为100%;教学实践中教学符合率>90%;符合替代流感病毒HA及HI试验的要求。采用0.25%甲醛溶液灭活处理后的鸡新城疫疫苗替代流感病毒的HA及HI试验,具有安全、稳定、易保存的特征;两者相应HA及HI试验结果一致,可作为相应微生物学实验教学替代材料。

卵黄抗体提取方法的优化

近年来,卵黄抗体因不发生交叉反应且特异性强等优点成为了免疫学研究的热点,研究表明,动物经口服用从蛋黄中分离的IgY可以预防或治愈消化系统及呼吸系统相关疾病,但缺乏适用于大批量生产的工业化工艺。现有的纯化方法主要有:沉淀法、层析法与超滤法,3种方法各有优缺点,其中沉淀法是目前最有潜力用于量化生产的方法,但存在效价和得率不能兼顾的缺点。本试验选用经灭活新城疫病毒免疫后的母鸡所产鸡蛋分离得到的卵黄原液,经聚乙二醇浓度梯度提取后测试,结果显示质量浓度为3.5%、8.0%和12.0%时连续纯化效果最佳。此外,经物理分离法分离蛋黄与蛋清,所得卵黄原液中蛋清的残余量几乎为零,消除了蛋清中的蛋白质与脂质对纯化的影响。经过物理分离及3次连续纯化获得的卵黄抗体经BCA试验和SDS-PAGE检测显示,抗体纯度可达80%左右,采用血凝抑制试验进行抗体效价检测,平均滴度可达213。经试验证明,用缓冲液透析后,IgY提取物可以在-20℃下储存超过一年。该优化的提纯方法既保证了效价,又保证了产量,且试验流程简洁、成本低廉,为卵黄抗体纯化工业化生产提供参考。

SPF鸡新城疫非特异性HI抗体的血涂片鉴别研究

试验以某SPF鸡场的30份HI抗体效价疑似阳性血清为研究对象,建立了快速准确的血涂片鉴别诊断法。以间接免疫荧光法进行验证,结果提示血涂片法与间接免疫荧光法的结果完全一致,证明了血涂片法可以用于新城疫非特异性HI抗体的鉴别诊断,具有简单、方便的优点。

以鸡鸭红细胞作血凝抑制指示剂检测鸭高致病性禽流感抗体的比较

[目的 ]分别以鸡和鸭红细胞(RBCs)作指示剂,检测鸭体内高致病性禽流感病毒血凝抑制(HI)抗体结果的一致性。[方法 ]在对360份鸭血清进行H5亚型高致病性禽流感病毒(Re-6株)HI抗体检测时,分别使用1%鸡红细胞悬液和1%鸭红细胞悬液做指示剂,观察结果,计算阳性率、阳性一致性、阴性一致性、符合率,并进行Kappa检验。[结果 ]1%鸭红细胞悬液作指示剂的阳性率(76.7%)显著高于鸡的(5.8%),且有统计学意义(p<0.01)。两种方法共同检出13份抗体阳性和76份阴性,阳性一致性为61.9%(95%置信区间:41.1%–82.7%),阴性一致性为22.4%(95%置信区间:18.0%–26.9%),符合率24.7%(95%置信区间:20.3%–29.2%),Kappa值为-0.023(95%置信区间:-0.051–0.004)。[结论 ]2种红细胞作指示剂的检测结果阳性率有显著差异,结果一致性强度为极差。

禽流感病毒血凝与血凝抑制试验影响因素

血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验是监测病毒感染的重要手段,可鉴定禽流感病毒的分离株,检测禽血清中抗体或免疫抗体情况,是免疫效果评估及疫情监测的重要科学方法。该文就血凝和血凝抑制试验操作过程中的材料准备、操作注意事项及试验结果判断等几方面进行阐述,以期避免试验中的类似问题,影响结果的准确性。

2012年-2015年佳木斯市流感病毒分离结果分析

目的了解佳木斯市流感病毒的型别,为流感的防控提供科学依据。方法采集佳木斯市两所哨点医院的流感样病例咽拭子标本,接种狗肾传代（MDCK）细胞进行病毒分离,用血凝抑制实验（HI）进行病毒型别鉴定。结果 2012年10月-2015年3月,共检测流感样病例2 606份,分离出阳性毒株108株,H1N1亚型46株,H3N2亚型51株,B亚型11株。3年阳性率之间,差异无统计学意义（P=0.135）。H1N1亚型在2012年10月-2014年3月构成比降低,2014年10月-2015年3月未分离出。H3N2亚型毒株构成比逐年上升。B亚型毒株在2013年10月-2015年3月构成比由5.00%上升到24.32%。病毒分离率高的月份在1月、2月和12月。年龄分布主要在0岁-和5岁-年龄组。结论 2012年-2015年佳木斯市流感病毒分离率无明显变化,甲型H1N1亚型逐年降低,季节性H3N2亚型逐年上升,B亚型有升高的趋势,流感的易感人群是婴幼儿和青少年,应加强冬春季节的流感防治工作。