TRAIL在原发免疫性血小板减少症患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的：探讨原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP）中TRAIL的表达及其在发病机制中的作用。方法使用Ficoll密度梯度离心法，收集28例ITP患者和30例健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）。采用实时荧光定量PCR检测TRAIL基因的表达，采用 ELISA方法检测血清中细胞因子TNF-α，IFN-γ，IL-4和 IL-10的量，并分析TRAIL与患者TNF-α，INF-γ，IL-10和血小板计数的相关性。结果与健康对照组相比，ITP患者 PBMC中 TRAIL表达显著增高（2.80±0.43 vs 1.00±0.24，t＝19.72，P＜0.001）。与健康对照组相比，ITP患者血清中IFN-γ和TNF-α升高（52.43±11.04 pg/ml vs 23.26±8.15 pg/ml；69.14±10.89 pg/ml vs 36.14±13.17 pg/ml，t＝10.36-11.50，P值均＜0.001），IL-10降低（11.18±6.13 pg/ml vs 33.28±9.85 pg/ml，t＝10.17，P＜0.001），IL-4的变化差异无统计学意义（35.75±12.52 pg/ml vs 40.16±14.26 pg/ml，t＝1.25，P＞0.05）。且ITP患者TRAIL的表达与血清中IFN-γ，TNF-α正相关（r＝0.432，0.541，P 值均＜0.05），与 IL-10，血小板计数负相关（r＝-0.424，-0.553，P 值均＜0.05）。结论TRAIL可能通过介导细胞因子免疫紊乱，参与了 ITP的发生与发展，这为进一步研究 ITP的免疫干预治疗提供了新的线索和思路。

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中TRAIL、c-FLIP等表达水平及临床意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、c-FLIP、caspase-8等基因表达情况,探讨其在RA中的临床意义,为RA的临床诊治寻找更有效的途径和方法提供实验基础。方法:采用实时荧光定量PCR的方法检测外周血单个核细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、c-FLIP、caspase-8 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测PBMC中TRAIL、c-FLIP、caspase-8蛋白表达水平。结果:各组RA患者PBMC的TRAIL、c-FLIP、caspase-8的mRNA表达水平:中活动组(M)中TRAIL的mRNA为(3.26±0.78),高于健康对照(N)(1.30±0.20,P=0.028)。低活动组(L)和高活动组(H)(1.56±0.37、1.83±0.26),略高于健康对照(N)(P=0.048、0.043);L、M、H组c-FLIP mRNA相对表达量分别为1.27±0.28,1.32±.34,1.93±0.40,均高于N组1.08±0.12(P分别为0.035、0.034、0.030),差异有统计学意义;caspase-8 mRNA L、M、H组中分别为(2.77±0.97)、(4.52±0.85)、(2.13±0.44),均高于N组(1.04±0.13,P=0.023,0.012,0.032)。RA患者PBMC中TRAIL、c-FLIP、caspase-8蛋白表达:M组TRAIL蛋白表达明显高于N组(P=0.013),H组稍高于N组(P=0.043),L组与N组无明显统计学差异(P=0.058),M组明显高于L、H组(P=0.011,0.021);c-FLIP蛋白表达中M组明显高于N组(P<0.01),而L、H组与N组无显著差异(P=0.062,0.053);L组表达与N组无显著差异(P>0.05),而M、H组caspase-8蛋白表达明显高于N组(P=0.003,0.001)。结论:在RA的不同活动期中,外周血单个核细胞TRAIL、c-FLIP和caspase-8等表达水平总体趋势增加,可为RA的临床诊治及后续研究提供实验参考。

叶形仿生优化对离心血泵水力性能及溶血特性的影响

离心血泵的优化对于体外膜肺氧合的临床应用具有重要意义。本研究参考座头鲸在深海中作原地转身运动时其鳍状肢的流线形,重新设计血泵的叶片。采用计算流体动力学对血泵性能进行预测和评估;通过水力试验来验证数值计算的准确性;溶血预测模型采用渐进一致数值近似方法。仿真结果表明,叶片尾缘形状对出口隔舌处的流场分布和该区域的壁面剪应力分布均有显著影响;当叶片尾缘达到一定扭转角度时,叶片结构能较好地适应泵内的流场环境,但当扭转角度不足时,流场扰动反而会增大。与原模型相比,扭转角为20°的模型在转速为2500 rpm、流量为5 L/min的工况下,扬程试验结果增加11.6%,水力效率提升3.1%,溶血指数下降40.1%。总的来说,具有一定扭转角度的仿生叶片尾缘结构可以提高半开放式离心血泵的性能。

HIV经输血传播的防范与献血跟踪策略

目的探索预防窗口期献血者导致输血传播HIV的方法。方法分析HIV感染窗口期的特点;论证献血跟踪策略(即血站采血后并不立即发出,而是将血液储存起来,并跟踪献血者自献血之日起到1个窗口期之后的1次HIV检验结果,只有跟踪结果阴性才能确认所采血液合格,否则不能发出。)的优越性。结果无法通过革新检测技术来消除HIV感染窗口期;病毒灭活技术也不能完全避免HIV经输血传播;献血跟踪策略的实施需要依赖血液长期保存技术、献血者的理解支持和法规政策的许可,而且会花费更多的检测费用和血液存储成本。但是,这一策略的实施,不仅可以掐断HIV经输血传播的渠道,还可以杜绝HCV、HBV等病原体经输血传播。结论献血跟踪策略是预防窗口期献血者导致输血传播HIV的有效方法,必然会赢得献血者和政策制定部门的支持。

血液痕迹中DNA抽提方法的比较与优化

本文总结了6种DNA抽提方法,进行部分优化后对长时间离体血液痕迹中的DNA进行提取对比.结果表明:优化后的CTAB法可以简单、快速、高效地从凝血块儿中获得高纯度的DNA,并可满足后续PCR扩增和分子标记等分子遗传学研究.

新药临床研究的可变剂量设计

新药研究中剂量与效应关系研究贯穿于各期临床试验中,可变剂量设计具有一定优势。本文列出了设计类型、特点和注意事项,另外用一个降血脂实例进行说明。

仲香胶囊治疗腰椎间盘突出症(气滞血瘀证)的临床研究

目的:评价仲香胶囊治疗腰椎间盘突出症(气滞血瘀证)的安全性及有效性。方法:随机、双盲、阳性药平行对照、多中心研究方法进行仲香胶囊的Ⅲ期临床试验。纳入受试者437例:其中试验组328例,对照组109例,其中试验组服用仲香胶囊,对照组服用腰痛宁胶囊,疗程3周,观察其临床疗效和安全性。结果:疾病疗效:试验组总有效率89.9%,对照组总有效率87.2%,总有效率两组差异无统计学意义(P>0.05);试验组总显效率39%,对照组总显效率22%,总显效率试验组优于对照组(P<0.05)。单项症状体征疗效分析:下肢麻木、腰部压痛、腰部活动不利和直腿抬高试验两组间比较均有统计学意义(P<0.05)。起效时间指标分析:两组间差异无统计学意义(P>0.05)。FAS分析与PPS分析结果相同。不良事件和不良反应分析:试验组有4例(1.2%)发生不良事件,均为不良反应,对照组有2例(1.8%)不良事件,其中1例为不良反应,不良事件发生率和不良反应发生率两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:仲香胶囊治疗腰椎间盘突出症(气滞血瘀证)安全有效。

益气活血解毒汤治疗ALT小于2倍正常值慢性乙型肝炎的临床研究

目的:探讨益气活血解毒汤治疗丙氨酸氨基转移酶(ALT)小于2倍正常值上限(ULN)的慢性乙型肝炎(CHB)患者的有效性和安全性。方法:100例ALT<2×ULN的CHB患者随机分为两组。治疗组予中药益气活血解毒汤联合拉米夫定治疗,对照组予单用拉米夫定。疗程12周,共服2个疗程。观察两组治疗前后肝功能、HBV DNA、病毒耐药突变率、肝纤维化等指标变化。结果:治疗组ALT复常率、HBV DNA水平的改善均优于对照组(P<0.01),但HBV DNA阴转率、病毒耐药突变率的疗效没有统计学意义(P>0.05),肝纤维化的指标包括血清透明质酸、层黏蛋白、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原的改善程度优于对照组(P<0.01)。结论:益气活血解毒汤联合拉米夫定治疗ALT<2×ULN的CHB疗效优于单用拉米夫定。

紫车散外敷联合塞来昔布胶囊口服治疗湿热瘀闭型膝关节滑膜炎的临床研究

目的:观察紫车散外敷联合塞来昔布胶囊口服治疗湿热瘀闭型膝关节滑膜炎的临床疗效和安全性。方法:将63例符合要求的湿热瘀闭型膝关节滑膜炎患者随机分为2组,联合治疗组28例、塞来昔布组35例。联合治疗组采用紫车散外敷联合塞来昔布胶囊口服治疗,塞来昔布组单纯采用塞来昔布胶囊口服治疗,共治疗4周。分别于治疗前和治疗结束后测定患者的红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)水平、膝关节疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分及Lysholm膝关节评分,观察患者治疗期间的并发症发生情况。结果:治疗前2组患者的ESR比较,差异无统计学意义(t=0.077,P=0.567);治疗结束后2组患者的ESR均降低[(36.04±11.04)mm·h^(-1),(11.61±6.30)mm·h^(-1),t=13.818,P=0.000;(34.37±11.02)mm·h^(-1),(17.23±7.45)mm·h^(-1),t=10.411,P=0.000],联合治疗组的ESR低于塞来昔布组(t=1.480,P=0.002)。治疗前2组患者的hs-CRP水平比较,差异无统计学意义(t=0.201,P=0.691);治疗结束后2组患者的hs-CRP水平均降低[(40.57±11.73)mg·L^(-1),(7.39±2.31)mg·L^(-1),t=15.599,P=0.000;(39.37±11.96)mg·L^(-1),(16.91±6.68)mg·L^(-1),t=9.936,P=0.000],联合治疗组的hs-CRP水平低于塞来昔布组(t=26.264,P=0.000)。治疗前2组患者的膝关节疼痛VAS评分比较,差异无统计学意义(t=0.129,P=0.657);治疗结束后2组患者的VAS评分均降低[(6.54±1.62)分,(1.93±0.22)分,t=10.827,P=0.000;(6.71±1.55)分,(2.74±0.60)分,t=13.398,P=0.000],联合治疗组的VAS评分低于塞来昔布组(t=2.333,P=0.029)。治疗前2组患者的Lysholm膝关节评分比较,差异无统计学意义(t=0.306,P=0.826);治疗结束后2组患者的Lysholm评分均增大[(54.04±12.56)分,(82.36±7.99)分,t=-8.908,P=0.000;(54.71±11.78)分,(74.69±9.11)分,t=^(-1)0.128,P=0.000],联合治疗组的Lysholm评分大于塞来昔布组(t=0.613,P=0.001)。2组患者治疗期间血、尿、大便常规检查,肝肾功能检查及心电图检查均未见异常,均未出现皮肤过敏症状。结论:紫车散外敷联合塞来昔布胶囊口服,能有效抑制湿热瘀闭型滑膜炎患者的炎症反应、减轻膝关节疼痛、改善膝关节功能,疗效优于单纯口服塞来昔布,而且具有较高的安全性。

抗菌光动力疗法对2型糖尿病牙周炎患者牙周治疗效果和血糖控制影响的系统评价与Meta分析

目的采用系统评价和Meta分析的方法评价抗菌光动力疗法(antimicrobial photodynamic therapy,aPDT)对2型糖尿病(type2 diabetes mellitus,T2DM)合并牙周炎患者的牙周治疗效果,为T2DM合并牙周炎的患者提供更好的治疗方法。方法通过检索PubMed、Cochrane、Embase、Web of Science、CNKI、CBM、万方数据库及手工检索杂志中相关临床随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),采用RevMan 5.3软件进行Meta分析并进行系统评价。结果共纳入8篇RCT,Meta分析结果显示,治疗后3个月,与单纯龈下刮治+根面平整术(subgingival scaling and root planing,SRP)相比,aPDT辅助SRP治疗在改善探诊深度(probing depth,PD)上效果更好,差异有统计学意义[WMD=0.32,95%CI(0.45,0.2),P<0.05],但在治疗后6个月时两组差异无统计学意义[WMD=0.15,95%CI(0.40,0.10),P=0.23]。在6个月的随访期间内,两组的临床附着水平(clinical attachment level,CAL)、探诊出血(bleeding on probing,BOP)和血清糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论aPDT辅助T2DM患者牙周非手术治疗在短期内能改善PD,但在改善CAL、BOP和HbA1c疗效上效果不显著。

药物Ⅰ期临床试验中静脉留置针采集血标本溶血原因的相关性及干预效果研究

目的探讨药物Ⅰ期临床试验中静脉留置针采集血标本溶血的高危因素,针对高危因素进行护理干预。方法选择2014年1月-2016年12月在药物Ⅰ期临床试验研究室进行药物试验的健康受试者提供的经静脉留置针抽取的药代血样本,对可能引起血标本溶血因素进行单因素分析,找出相关性因素进行Logistic回归分析,找出高危因素进行护理干预。结果干预前的1 370个样本中溶血26个,溶血率1.89%;经Logistic回归分析,静脉留置针的型号、静脉留置针的穿刺部位、静脉留置针的留置时间、采集弃血与采集药代血的间隔时间是血标本溶血原因的高危因素,针对高危因素进行护理干预后,3 544个样本中溶血11个,溶血率为0.31%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论针对药物I期临床试验中静脉留置针采血过程中引起标本溶血的高危因素,做好相应的护理干预,可有效控制药物试验中血标本溶血率,保证试验结果科学可靠。

化瘀通络汤对脑小血管病致认知功能障碍患者执行功能的影响

【目的】通过观察化瘀通络汤对脑小血管病致认知功能障碍患者执行功能的影响,为脑小血管病认知功能障碍的中医药治疗提供客观的临床证据。【方法】将60例患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例。2组患者均给予一般基础治疗(包括控制血压、调节血糖、抗血小板聚集、抗凝、调脂稳斑和现代功能康复等),治疗组同时给予化瘀通络汤治疗,疗程12周。观察2组患者治疗前后连线测验A+B(TMT)和色词试验(CWT)的耗时情况,以及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和日常生活能力量表(ADL)的评分情况。【结果】(1)治疗后,2组患者的TMT-A时间和TMT-B时间均较治疗前缩短(P<0.05),且治疗组在缩短TMT-A时间和TMT-B时间方面均优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(2)治疗后,2组患者除CWT-A时间外,CWT-B时间和CWT-C时间均较治疗前缩短(P<0.05),且治疗组在缩短CWT-A时间、CWT-B时间、CWT-C时间方面均优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(3)治疗后,2组患者ADL量表和MoCA量表评分均较治疗前提高(P<0.05),且治疗组在提高ADL量表和MoCA量表评分方面均优于对照组(P<0.01)。【结论】化瘀通络汤能有效改善脑小血管致认知功能障碍患者的总体认知水平,并且能明显改善其执行功能和信息处理速度,改善脑小血管病患者的日常生活能力。

1例微柱凝胶法血型鉴定产生拖尾现象研究

目的结合血清学检测及基因分型,探讨影响微柱凝胶法血型检测出现拖尾现象结果判定的原因及血型基因筛查的意义,为提高血型检测的准确性提供个案依据。方法从血液标本采集、红细胞悬液制备、检测方法学原理等方面调查产生拖尾现象的原因。结果产生拖尾现象的原因与血标本离心时间、生理盐水质量、红细胞悬液配制浓度不当等因素有关。结论血型检测从标本采集到结果判读是一个完整的过程,应严格控制每个环节的工作质量,避免人为等各种因素对检测过程和结果的影响。

CPT诱导外周血破骨细胞凋亡作用及其分子机制研究

目的:探讨环化变构肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(CPT)诱导外周血破骨细胞凋亡作用及其分子机制。方法:外周血单个核细胞(PBMC)经巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)诱导培养成熟破骨细胞,采用不同浓度的CPT诱导破骨细胞凋亡,应用Annexin V-FITC荧光染色法检测CPT诱导破骨细胞凋亡,RT-PCR检测破骨细胞中CPT受体mRNA表达变化的影响。结果:PBMC在RANKL和M-CSF细胞因子诱导下培养21 d,均生成了具有骨吸收活性的破骨细胞。在2×10^6的接种密度下诱导产生破骨细胞的数量(细胞因子含量:30 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF)在5×10^5接种密度下(细胞因子含量:30 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF)的2倍。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色后,不同浓度(0、100、500 ng/ml)CPT作用正常人的破骨细胞24 h和48 h后,出现明显的细胞凋亡特征,Annexin V-FITC染色后,经荧光显微镜观察,0 ng/ml CPT诱导的对照组极少细胞被染色(绿色荧光);对比发现100、500 ng/ml CPT诱导的给药组中出现大量绿色荧光阳性细胞,进一步研究显示,100、500 ng/ml CPT处理破骨细胞24 h后,破骨细胞凋亡率由1.7%(0 ng/ml)上升到9.1%(100 ng/ml)和13.7%(500 ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05);处理48 h后,由2.1%(0 ng/ml)上升为13.8%(100 ng/ml)和21.9%(500 ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05),并且发现48 h凋亡数量明显多于24 h(P<0.05)。不同浓度的CPT(100 ng/ml、500 ng/ml)处理破骨细胞24 h后,TRAIL的相关死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)、诱骗受体1(DcR1)及诱骗受体2(DcR2)的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),处理48 h后,DR5的mRNA表达量由1.20±0.26(0 ng/ml)下降为1.00±0.26(100 ng/ml)、0.60±0.09(500 ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CPT能以时间-浓度依赖性的诱导外周血源破骨细胞凋亡,其作用机制可能是通过下调DR5的mRNA表达水平诱导其凋亡。