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利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子 被引量:19
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作者 梅文倩 宋文强 +2 位作者 潘怡 巩威 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第3期358-364,共7页
随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体... 随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体和宿主没有依赖性。本文利用Gateway大规模克隆技术将16个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载pPTV和酵母表达载体pYTV中,酵母融合表达实验和West-ern-blot检测证明了该克隆途径的可行性,并且得到的His-Tag融合蛋白,为拟南芥转录因子的大规模蛋白质组学研究奠定了良好的基础,同时基因序列的聚类分析为将来进一步的功能研究提供了有利信息。 展开更多
关键词 Gateway克隆技术 拟南芥 转录因子 聚类分析 功能基因组
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地高辛标记探针Southern印迹杂交技术要点及改进 被引量:7
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作者 刘立鸿 许璐 +2 位作者 汪凯 张富春 马正海 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期57-59,共3页
Southern印迹杂交技术是检测特定DNA片段的常规方法之一,其操作程序繁琐,对基因组DNA的提取、纯化、酶切等均有较高要求,要获得理想杂交结果需要反复摸索。总结地高辛标记探针Southern印迹杂交的技术要点,并结合具体操作提出改良方案。
关键词 地高辛 SOUTHERN杂交 改进 技术要点
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蛋白质免疫印迹技术在本科实验教学中的应用 被引量:7
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作者 李欣 赵玉红 +3 位作者 石建党 赵立青 李小菊 张伟英 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2020年第2期195-198,253,共5页
蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作... 蛋白质免疫印迹技术是生命科学研究领域的常用技术手段,尝试将其改造成适于本科教学实践的实验内容,即在基础性分子生物学实验的基础上开设"免疫印迹法检测目的基因在原核细胞中的表达"这一综合性实验。根据学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点,对实验内容和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,使学生能够深入、全面、系统地理解和掌握蛋白质免疫印迹技术,提高了实验教学质量,并有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。 展开更多
关键词 蛋白质免疫印迹技术 分子生物学 实验教学
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牦牛p38MAPK在雌性主要生殖器官中的表达 被引量:6
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作者 韩小红 何翃闳 +7 位作者 王靖雷 张慧珠 马悦 马进彪 赵生贤 余四九 崔燕 樊江峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1604-1614,共11页
旨在研究p38MAPK在母牦牛主要生殖器官中的表达情况,了解其表达差异性,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。本研究采集卵泡期、黄体期、妊娠期成年健康母牦牛(各2头)主要生殖器官样品,免疫组化技术检测p38MAPK蛋白的表达部位;qRT-PC... 旨在研究p38MAPK在母牦牛主要生殖器官中的表达情况,了解其表达差异性,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。本研究采集卵泡期、黄体期、妊娠期成年健康母牦牛(各2头)主要生殖器官样品,免疫组化技术检测p38MAPK蛋白的表达部位;qRT-PCR和Western-blot技术对其基因和蛋白进行相对表达量测定。结果:1)免疫组化结果显示,p38MAPK蛋白在牦牛的卵巢、输卵管和子宫均呈阳性表达;2)qRT-PCR结果表明,p38MAPK基因在卵巢中的表达量卵泡期显著高于妊娠期(P<0.05);在输卵管中的表达量黄体期显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.05);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P<0.01);3)Western-blot结果显示,p38MAPK蛋白在卵巢中的表达量卵泡期极显著高于黄体期和妊娠期(P<0.01);在输卵管中的表达量黄体期极显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.01);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P<0.01)。结果表明,p38MAPK在母牦牛同一生殖器官的不同繁殖阶段其表达存在差异性,其可能参与了牦牛卵泡发育、黄体功能发挥以及胚胎着床和发育等一系列生殖过程,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。 展开更多
关键词 牦牛 P38丝裂原活化蛋白激酶 免疫蛋白印迹技术 实时荧光定量
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隧道病害整治施工中的锚固与注浆技术 被引量:7
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作者 乔国华 陈红兵 +1 位作者 潘健 张武强 《施工技术》 CAS 北大核心 2007年第S1期199-201,共3页
广东省鲘门隧道的病害整治工程采用钻孔、锚固和注浆一体化的自钻式中空锚杆锚注加固技术,改善围岩的物理力学性能,有效提高锚杆的锚固力,增强整个拱部的整体稳定性,达到隧道渗漏水整治效果,可取得良好的经济和社会效益。
关键词 鲘门隧道 病害整治 自钻式中空锚杆 锚固与仰灌技术
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miRNA的鉴定及检测方法的概述 被引量:2
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作者 丛立新 张金玉 赵志辉 《饲料工业》 北大核心 2014年第3期58-60,共3页
MicroRNA(miRNA)因其分子序列短小,与基因组中较多的序列以互补方式存在,在不同生物体内以不同的方式与靶基因结合,且能够与多种蛋白相互作用,因而建立一种有效且普遍适用的鉴定及检测方法异常困难。科研人员经过不断的研究和探索,总结... MicroRNA(miRNA)因其分子序列短小,与基因组中较多的序列以互补方式存在,在不同生物体内以不同的方式与靶基因结合,且能够与多种蛋白相互作用,因而建立一种有效且普遍适用的鉴定及检测方法异常困难。科研人员经过不断的研究和探索,总结出MicroRNA的鉴定和检测方法,研究重点介绍miRNA的两种鉴定方法及其几种有效的检测方法,为进一步对其进行研究提供理论基础。 展开更多
关键词 MICRORNA 芯片技术 RNA印迹 原位杂交
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鲘门隧道工程病害整治技术 被引量:3
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作者 陈红兵 潘健 乔国华 《汕头大学学报(自然科学版)》 2007年第3期76-80,共5页
针对广东汕尾鲘门隧道工程特点,分析了锚注支护与混凝土喷射技术的基本原理和方法.采用相应的施工流程和工艺,成功实施了鲘门隧道工程的病害整治工作.工程检测结果和运行情况表明,这套隧道病害整治工艺取得了良好效果,为我国类似工程施... 针对广东汕尾鲘门隧道工程特点,分析了锚注支护与混凝土喷射技术的基本原理和方法.采用相应的施工流程和工艺,成功实施了鲘门隧道工程的病害整治工作.工程检测结果和运行情况表明,这套隧道病害整治工艺取得了良好效果,为我国类似工程施工提供了方案设计和实践的参考依据. 展开更多
关键词 病害整治 轻质土 锚注支护技术 喷射混凝土
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烟草苗床期普通花叶病(TMV)组织印迹检测技术研究 被引量:1
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作者 匡传富 刘世超 +2 位作者 曾涛 孙现超 陈德鑫 《农业科学》 2018年第8期967-975,共9页
本文探讨了烟草苗床期TMV组织印迹检测技术,包括第一抗血清最适浓度的确定、第一抗血清和第一抗血清最佳温度及时间的优化、烟苗最佳取样部位的选择、感染烟草普通花叶病毒后的发病时间、不同品种烟草花叶病毒发病情况检测等。结果表明... 本文探讨了烟草苗床期TMV组织印迹检测技术,包括第一抗血清最适浓度的确定、第一抗血清和第一抗血清最佳温度及时间的优化、烟苗最佳取样部位的选择、感染烟草普通花叶病毒后的发病时间、不同品种烟草花叶病毒发病情况检测等。结果表明:第一抗血清最适浓度以1000倍效果较理想;用第一抗血清稀释1000倍,第二抗血清稀释6000倍,样品在37℃恒温振荡器60r/min封闭状态下,与第一抗血清连接1h,37℃恒温震荡,与第二抗血清连接1h,37℃恒温震荡,效果最好;烟苗最佳取样部位的选择为叶柄中部;接种后第1天烟苗茎的各部位都有病毒积累,茎尖病毒积累出现较早,病毒接种第6天烟苗各个部位都检测到病毒的积累;试验了KRK26、K326、云烟87、红大、云烟97等5个品种,检测的5个样品均被TMV侵染,云烟97感染TMV的感病率最高,K326感病率最低。 展开更多
关键词 烟草 苗床期 普通花叶病(TMV) 组织印迹 检测技术
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利用同源重组构建BMP6、BMPR1B真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究
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作者 荣恒 张梦瑶 +1 位作者 贺建宁 柳楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期195-201,共7页
旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体,而后将其导入成纤维细胞,分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊,采集组织样品,提取RNA后反转录成cDNA,通过PCR反应后利用S... 旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体,而后将其导入成纤维细胞,分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊,采集组织样品,提取RNA后反转录成cDNA,通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。酶切鉴定正确后,转至大肠杆菌DH5α感受态细胞,振荡培养并挑取单菌落扩大培养。提取质粒后将pcDNA3.1-BMP6、pcDNA3.1-BMPR1B单、共转染至成纤维细胞中。转染后测定表达量的变化并探究两基因间的作用关系。结果表明,共转染成纤维细胞后BMPR1B基因及BMPR1B蛋白的表达量均较单转染组极显著升高(P<0.01),而BMP6基因及BMP6蛋白的表达量与单转染组无显著差异(P>0.05)。因此,BMP6基因促进了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因对BMP6基因的表达几乎没影响。 展开更多
关键词 敖汉细毛羊 同源重组技术 成纤维细胞 RT-PCR Western blot
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厚煤层巷道沿底上山掘进锚网支护技术实践 被引量:5
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作者 张庆华 《中国煤炭》 2018年第4期83-86,共4页
唐山矿厚煤层巷道上山掘进时,通过改进支护技术、优化施工工艺及对策措施,有效控制巷道掘进头煤壁片帮和防止煤层顶板离层冒落,取得了较好的支护效果,解决了巷道支护难题,实现了巷道安全快速掘进施工。
关键词 厚煤层巷道 上山掘进 支护技术 锚网支护
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BSEP在辅助生殖技术助孕的ICP患者胎盘中的表达及意义
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作者 刘林丽 张良晨 +2 位作者 朱思远 齐碧如 黄勉 《中国现代医生》 2018年第3期8-11,F0003,共5页
目的探讨胆盐输出泵(BSEP)在ART助孕和正常受孕妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织中的表达及意义。方法采用Western blot和RT-PCR方法检测我院收治的15例自然受孕ICP患者(ICP组)、15例ART助孕ICP患者(ART组)及9例正常妊娠患者(对照... 目的探讨胆盐输出泵(BSEP)在ART助孕和正常受孕妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘组织中的表达及意义。方法采用Western blot和RT-PCR方法检测我院收治的15例自然受孕ICP患者(ICP组)、15例ART助孕ICP患者(ART组)及9例正常妊娠患者(对照组)胎盘组织中BSEP蛋白和m RNA的表达情况,分析三组ICP胎盘中BSEP表达的差异。结果 Western blot和RT-PCR法显示BSEP蛋白和m RNA在自然受孕ICP胎盘中表达分别为(0.443±0.102)和(8.139±4.490),在ART来源胎盘中表达分别为(0.490±0.117)和(9.992±5.253),而正常妊娠胎盘组织中表达明显减少(0.161±0.013)和(1.038±0.271),ICP组和ART组差异无明显差异(P>0.05),而这两组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论 BSEP蛋白在正常妊娠胎盘组织中微量表达,而在ICP患者胎盘组织中高表达,可能与ICP的发病有关,但自然受孕ICP胎盘和ART助孕ICP胎盘中BSEP蛋白无差异,提示ART助孕并不增加子代妊娠期ICP的发病风险。 展开更多
关键词 辅助生殖技术 蛋白质印迹法 妊娠期肝内胆汁淤积症 反转录·聚合酶链反应 胆盐输出泵
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基于分子对接虚拟技术及Western blotting实验考察苍耳亭对肝癌上皮间质转化作用靶点的影响 被引量:4
12
作者 吴育 曹刚 +2 位作者 石美琴 杨水英 姜晓燕 《药物评价研究》 CAS 2017年第11期1535-1540,共6页
目的用分子对接技术探讨苍耳亭在上皮间质转化(EMT)过程中的作用靶点,并通过Western Blotting实验检测其对肝癌HepG2细胞相应靶点蛋白表达的影响。方法选取在EMT过程中的关键因子蓬乱蛋白(Dhs)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、血管内皮生... 目的用分子对接技术探讨苍耳亭在上皮间质转化(EMT)过程中的作用靶点,并通过Western Blotting实验检测其对肝癌HepG2细胞相应靶点蛋白表达的影响。方法选取在EMT过程中的关键因子蓬乱蛋白(Dhs)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)为作用靶点,采用分子对接虚拟技术评价苍耳亭与其空间结合能力,并与相应内源性物质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、醋酸离子、黄素腺嘌呤二核苷酸、N-乙酰葡糖胺对比;培养HepG2细胞,给予1、5、20μmol/L浓度的苍耳亭,利用Western Blotting实验检测其对Dhs、Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白表达的影响。结果分子对接结果显示,苍耳亭与EMT过程中作用靶点均具有一定亲和力,其中与Dhs、Snail、VEGFR3的亲和力高于内源性物质,与Vimentin的亲和能力不及内源性物质;Western Blotting实验结果显示,苍耳亭显著下调Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白表达(P<0.05、0.01、0.001)。结论苍耳亭对肝癌侵袭转移关键因子E-cadherin、Vimentin、Snail、VEGFR3有明显影响,可能是其潜在靶点;分子虚拟对接和Western blotting实验结果具有一定的相似性,能预先提示潜在靶因子。 展开更多
关键词 苍耳亭 上皮间质转化 分子对接 Western blotTING 肝癌 侵袭转移 作用靶点
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MicroRNA检测方法的研究进展 被引量:3
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作者 任禹珂 王超 +6 位作者 屈哲 霍桂桃 张頔 杨艳伟 王雪 李波 林志 《药物评价研究》 CAS 2021年第8期1793-1799,共7页
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的小分子单链非编码RNA,通过调节基因的表达在许多生命活动中起重要作用。在一些疾病(如癌症和自身免疫性疾病)发生时,miRNAs的表达谱可能发生改变,所以在药物的安全性评价中,其有望成为诊断或预后生物标... MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的小分子单链非编码RNA,通过调节基因的表达在许多生命活动中起重要作用。在一些疾病(如癌症和自身免疫性疾病)发生时,miRNAs的表达谱可能发生改变,所以在药物的安全性评价中,其有望成为诊断或预后生物标志物。因此,准确测定miRNA的表达对于其应用十分重要。对传统的RNA印记(Northern blotting)、微阵列(microarray)和实时定量PCR(qRT-PCR)以及一些新的miRNAs检测方法(如基于纳米材料的miRNAs检测、核酸扩增等技术)进行概述,并阐述了这些方法的优缺点。 展开更多
关键词 MICRORNA RNA印记 微阵列 实时定量PCR 核酸扩增技术
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精准医学背景下《分子生物学技术》教学内容的思考与设计 被引量:4
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作者 朱玉平 樊娟 钟山 《生命的化学》 CAS CSCD 2019年第5期1034-1036,共3页
近年来兴起的精准医学依赖于分子水平的诊断、预防和治疗,重要的分子生物学技术包括聚合酶链反应、DNA测序、分子杂交与印迹、基因/基因组编辑等。目前国内大多数医学院校尚未开设涉及分子生物学技术的教学内容。为强化素质教学,进一步... 近年来兴起的精准医学依赖于分子水平的诊断、预防和治疗,重要的分子生物学技术包括聚合酶链反应、DNA测序、分子杂交与印迹、基因/基因组编辑等。目前国内大多数医学院校尚未开设涉及分子生物学技术的教学内容。为强化素质教学,进一步探索培养21世纪创新型医学人才的路径,我们在充分论证的基础上将重要《分子生物学技术》内容融合在一个8学时的教学单元中,该单元可作为《分子医学》整合课程教学中的一个模块。 展开更多
关键词 分子生物学技术 聚合酶链反应 DNA测序 分子杂交与印迹 基因/基因组编辑
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Effects of Vitrification on the Imprinted Gene Snrpn in Neonatal Placental Tissue
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作者 Jian-Feng Yao Yan-Fang Huang +6 位作者 Rong-Fu Huang Su-Xia Lin Cai-Qiong Guo Cheng-Zhou Hua Pei-Ya Wu Ji-Feng Hu You-Zhu Li 《Reproductive and Developmental Medicine》 CSCD 2020年第1期25-31,共7页
Objective:To investigate the effects of vitrification on the expression of the imprinted gene Snrpn in neonatal placental tissue.Methods:Neonatal placental tissue was collected from women with natural pregnancy(contro... Objective:To investigate the effects of vitrification on the expression of the imprinted gene Snrpn in neonatal placental tissue.Methods:Neonatal placental tissue was collected from women with natural pregnancy(control group)and from women in assisted reproductive technology(ART)pregnancy group,following fresh and vitrified embryo transfer(fresh group and vitrified group,respectively).Snrpn mRNA expression and SNRPN protein levels in placental tissue from these three groups were assessed by real-time reverse transcription polymerase chain reaction and Western blot,respectively.DNA methylation in the Snrpn promoter region was analyzed by bisulfite-pyrosequencing.Results:The expression of Snrpn mRNA and SNRPN protein was found to be higher in placental tissue from the fresh and vitrified ART groups,compared to the control group.There was no significant difference in SNRPN gene or protein expression between the fresh and vitrified groups.DNA methylation at the Snrpn promoter region was not significantly different between these three groups.Conclusions:Human ART may alter the transcriptional expression and protein levels of the imprinted gene Snrpn.However,compared to other ART methods,vitrification may not aggravate or reduce this effect.Moreover,the altered expression of Snrpn is likely not directly related to DNA methylation of the Snrpn promoter region. 展开更多
关键词 Assisted Reproductive technology Polymerase Chain Reaction SNRPN VITRIFICATION Western blot
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