蛋白免疫印迹杂交法研究葛根素对成骨细胞TGF-β1及Smad2/3蛋白表达的影响

目的:观察采用蛋白免疫印迹杂交(Western Bloting)法探讨葛根素通过TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3对于促进成骨细胞增殖分化机制的研究。方法:原代培养新生小鼠成骨细胞,分别用空白对照组(含10%DMEM)及3种不同浓度分别为1μg/mL,0.1μg/mL,0.01μg/mL的葛根素干预液处理成骨细胞。采用MTT实验法检测葛根素对成骨细胞生长的影响,Western Bloting法检测葛根素对成骨细胞TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3表达的影响。结果:不同浓度的葛根素有促进成骨细胞生长的作用,并可以提高TGF-β1及其信号转导蛋白Smad 2/3的表达,呈浓度依赖性,分别与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:葛根素可以通过TGF-β1及Smad 2/3信号转导途径促进成骨细胞增殖与分化。

丝裂原活化蛋白激酶在卵巢癌中的表达及意义

目的：探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）的三个亚族ERK1、JNK1、p38在卵巢癌中表达的意义及三者之间的关系。方法：应用免疫组化及Western bloting印迹分析的方法，检测ERK1、JNK、p38在50例卵巢上皮癌、30例卵巢良性上皮性肿瘤和30例正常卵巢组织中的表达，判断ERK1、JNK1、p38与临床病理因素的关系，明确MAPKs亚族间的相关性。结果：JNK1、p38在Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤（P〈0．05）。ERK1在Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤（P〈0．05）。JNK1与p38蛋白阳性率呈明显的正相关（P〈0．05）。结论：MAPKs不同亚族在卵巢癌的发病学中起到重要作用，并与卵巢癌期别有关。

腭裂相关基因TTF-2转基因小鼠载体的构建及体外表达

目的扩增及克隆C57BL/6j小鼠titf-2基因并利用小鼠骨髓间充质细胞进行表达.方法从C57BL/6j小鼠肝脏组织中提取基因组DNA,用PCR从中扩增出titf-2基因片段.将titf-2基因片段插入载体pMD18-T中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体pBROAD3-mcs中,构建重组表达载体pBROAD3-mcs-titf-2,并转染小鼠骨髓间充质细胞进行表达.用羊抗鼠TTF-2多抗IgG对表达产物进行Western Blot签定.结果 DNA测序结果证实,获得titf-2基因片段,大小与理论值相符;Western Blot分析表明,表达出TTF-2约为4.2KDa大小的蛋白.结论成功扩增、克隆titf-2基因,并在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,为下一步建立titf-2转基因小鼠模型奠定了基础.

KCNK5双孔钾通道蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的检测KCNK5在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达,探讨其与临床病理特征及患者预后的相关性。方法应用免疫组织化学和Western bloting方法检测PTC组织及癌旁正常组织中KCNK5表达,分析其与PTC临床病理特征的关系,KM Plotter数据库分析KCNK5与PTC预后的关系。结果免疫组化结果显示KCNK5表达于PTC细胞的胞膜、核膜和胞质,癌旁正常组织阴性或弱阳性;Western blot和免疫组化半定量积分显示PTC组织中的KCNK5水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。KCNK5表达与PTC患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关(均P<0.05);多因素Logistic回归分析进一步证实KCNK5与淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示KCNK5高表达患者生存率明显低于KCNK5低表达患者(P<0.01)。结论KCNK5与PTC患者淋巴结转移和预后密切相关,有望成为PTC评估预后的指标。

Yes相关蛋白在直肠癌中的表达及意义

目的研究Yes相关蛋白（YAP）在直肠癌中表达水平的变化，探讨其在直肠癌中的意义。方法用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western bloting方法检测30例直肠癌患者和10例正常体检者直肠黏膜组织中YAPmRNA及蛋白的表达情况。结果直肠癌黏膜组织中YAPmRNA的表达水平显著高于正常直肠黏膜组织（73．2±11．1比10．4±4．1，P〈0．05）；直肠癌黏膜组织中YAP蛋白的表达水平显著高于正常直肠黏膜组织（65．7±9．5比9．2±4．3，P〈0．05）。结论YAP的高表达与直肠癌的发生有关。