白消安对仔猪睾丸曲精小管内增殖分化相关蛋白表达与定位的影响

为了研究白消安对仔猪睾丸曲精小管内增殖分化相关蛋白PCNA、PLZF和GATA4表达与定位的影响,试验选取体外培养仔猪曲精小管为研究对象,分为对照组和试验组,其中试验组各添加5 mg/kg白消安,分别培养1、2、3 d,离心获取曲精小管,采用HE染色检测形态变化,采用免疫组化、qRT-PCR和Western blot法分别检测PCNA、PLZF和GATA4表达和定位的变化。HE染色结果显示,各试验组曲精小管内均含有支持细胞和生殖细胞;免疫组织化学结果显示,各试验组的PCNA蛋白定位于生殖细胞和支持细胞的细胞核,白消安作用可导致PCNA染色变深,表达量升高。各试验组GATA4蛋白定位于支持细胞的细胞核,且与对照组相比无明显差异;各试验组的PLZF蛋白定位于生殖细胞的细胞核,与对照组相比,白消安作用2 d时PLZF染色无显著差异,白消安作用1、3 d时PLZF染色变深,表达量升高。qRT-PCR和Western Blot结果显示,与对照组相比,试验组PCNA和GATA4 mRNA及其蛋白表达量均显著升高;白消安作用2 d的PLZF mRNA和蛋白表达量差异不显著,白消安作用1、3 d的PLZF mRN以及蛋白表达量均显著升高。综上所述,PCNA、PLZF和GATA4均表达于体外培养仔猪曲精小管,白消安作用可导致PCNA、PLZF和GATA4在曲精小管内表达水平改变,提示白消安通过影响增殖分化相关蛋白的表达导致猪睾丸精子发生受损。

HIF-1α纳米抗体的制备及其抑制黑素瘤生长的作用

缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)参与低氧微环境相关疾病的发生等过程,具有控制肿瘤生长和发展的功能。黑色素瘤是一种发生于人和动物恶性程度较高的肿瘤。为探明HIF-1α纳米抗体对黑色素瘤的影响,研究利用前期保存的羊驼源黑色素瘤细胞噬菌体文库筛选HIF-1α纳米抗体,经原核表达与纯化后,通过Western Blot和免疫组织化学验证HIF-1α纳米抗体与抗原的结合性;分别通过CCK-8法、划痕试验以及Western Blot法检测其对B16黑素瘤细胞的增殖和迁移能力及其相关分子表达的影响。结果表明,经表达和纯化获得的HIF-1α纳米抗体分子质量约为16 ku,没有跨膜结构,具有亲水性。通过Western Blot和免疫组织化学验证了其具有良好的抗原结合性。在增殖试验和划痕试验中,与对照组相比,HIF-1α纳米抗体抑制了B16细胞的增殖和迁移,下调了靶基因VEGF的表达,并使细胞增殖和迁移相关蛋白Ras、ERK、RAC和RAF的表达量下调。预测HIF-1α纳米抗体进入B16细胞内,与抗原结合,通过下游靶基因VEGF下调RAs、ERK、RAC、RAF的表达,从而对细胞增殖和迁移起抑制作用,可作为黑色素瘤治疗的新靶点。

乙酰肝素酶和整合素α5β1蛋白在葡萄胎组织中的表达及其临床意义

目的:观察乙酰肝素酶(HPA)蛋白和整合素α5β1蛋白在人良、恶性葡萄胎组织中的表达情况,阐明其在良、恶性葡萄胎发生发展中的作用。方法:选择人正常胎盘绒毛组织50例(正常胎盘绒毛组)、良性葡萄胎组织40例(良性葡萄胎组)和恶性葡萄胎组织17例(恶性葡萄胎组)。采用免疫组织化学SP法检测各组组织中HPA和整合素α5β1蛋白的阳性表达率和阳性表达强度,Western blotting法分别检测各组组织中HPA和整合素α5β1蛋白表达水平,Spearman等级相关分析法分析良、恶性葡萄胎组织中HPA蛋白和整合素α5β1蛋白表达的相关性。结果:良性葡萄胎组和恶性葡萄胎组组织中HPA和整合素α5β1蛋白阳性表达率、阳性表达强度和表达水平高于正常胎盘绒毛组(P<0.05);恶性葡萄胎组组织中HPA和整合素α5β1蛋白阳性表达率、阳性表达强度和表达水平高于良性葡萄胎组(P<0.05)。在良、恶性葡萄胎组织中HPA蛋白与整合素α5β1蛋白的表达均呈正相关关系(r=0.506,P<0.05;r=0.555,P<0.05)。结论:联合检测HPA和整合素α5β1蛋白的表达可成为良性葡萄胎和恶性葡萄胎鉴别诊断的预测指标。

阳江天然高本底辐射地区居民外周血P53蛋白表达的研究

目的探讨天然高本底辐射照射对当地居民外周血中P53蛋白表达的影响。方法选取35名阳江天然放射高本底地区（HBRA）男性居民作为暴露组，邻近地区（CA）男性居民35名作为对照组，应用Western Blotting法测定两组人群外周血中P53蛋白含量。结果HBRA居民和CA居民外周血P=53蛋白相对含量分别为（0．992±0．155）和（1．055±0．170），两者差异无统计学意义（P〉0．05）；经年龄、吸烟、饮酒、射线接触调整后，与CA居民相比HBRA居民P53蛋白表达下降，但差异无统计学意义（OR=1．241，95％CI0．407～3．783）。结论低水平电离辐射长期作用人体，其外周血中P53蛋白有一定程度的降低，但尚不能判断长期小剂量辐射与P53表达高低的关系。

5-HMF抑制A375细胞增殖的信号转导通路

通过Caspase活性检测和Western blotting法对ROS介导的A375细胞凋亡和G0/G1细胞周期阻滞中相关蛋白进行分析。结果表明:5-HMF通过清除细胞内ROS激活了DNA损伤介导的P53磷酸化、AKT通路和MAPKs通路,这些通路共同作用于相应的下游底物,激活外源性的死亡受体通路和内源性的线粒体通路导致细胞的凋亡,其中,5-HMF通过上调线粒体中的促凋亡因子、下调抑凋亡因子并活化Bid而激活內源性途径;此外,P53、AKT等也可以抑制或增强G0/G1期主要调控因子的表达,导致G0/G1期阻滞,证明了5-HMF可抑制A375细胞增殖的信号转导通路。

E-选择素、整合素β_1、免疫球蛋白超家族成员在人胃癌细胞中的表达及其意义

目的了解E-选择素(E-selectin)、整合素β(1Integrinβ1)、免疫球蛋白超家族成员(ICAM-1)在人胃癌细胞中的表达水平,探讨这3种细胞粘附分子与胃癌的关系。方法采用NothernBlotting法和ELISA法检测胃癌细胞、正常胃上皮细胞和人脐静脉内皮细胞上E-selectin、Integrinβ1及ICAM-1的表达水平并进行比较。结果胃癌细胞、正常胃上皮细胞和血管内皮细胞均有E-selectin、Integrinβ1及ICAM-1的表达。但胃癌细胞3种粘附分子表达水平均高于正常胃上皮细胞和人脐静脉内皮细胞,差别均有显著性意义(P<0.05)。结论E-selectin、Integrinβ1、ICAM-1可能与胃癌细胞转移有关。

绵羊肺腺瘤病毒内蒙株衣壳蛋白在真核细胞中的表达

为构建绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte Sheep Retrovirus,JSRV)内蒙株衣壳蛋白(CA)基因真核表达载体,采用含HA标签的引物,通过PCR方法从重组原核表达质粒上扩增CA-HA融合基因片段,将其克隆至真核表达载体上。构建的真核表达质粒通过脂质体法转染293细胞和Hela细胞,用间接免疫荧光和Westhern blotting法检测目的蛋白的表达。结果表明,成功地构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CA-HA,并转染的293细胞和Hela细胞内观察到特异性荧光和检测到目的基因的表达产物,说明CA基因在真核细胞内获得表达。本试验为建立特异性的诊断试剂盒奠定了基础。

JNK/SAPK信号转导系统在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨JNK/SAPK信号转导系统在三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡过程中的作用.方法:采用MTT法观察不同浓度的As2O3对人类肝癌细胞株HepG2细胞生长的抑制作用;以流式细胞术观察细胞的凋亡率及生长周期的变化;以Western blot法检测p-MEK4、JNK、p-JNK、Caspase-3及PARP蛋白在As2O3作用下及SP600125阻断JNK信号转导通路情况下的表达.结果:各浓度As2O3均能明显抑制肝癌细胞HepG2增殖,且具有剂量依赖性和时间依赖性;流式细胞术(FCM)分析显示,As2O3能够诱导肝癌细胞HepG2凋亡且具有时间依赖性,细胞滞留于G2/M期(0,24,48,72h百分率分别为7.22%±1.50%,11.56%±0.73%,33.8%±1.62%,46.02%±0.11%);Western blotting结果显示,As2O3诱导肝癌细胞HepG2凋亡伴随着Caspase-3和PARP的活化;As2O3作用于HepG2细胞10min后p-MEK4和p-JNK蛋白表达开始增加,20min达到高峰,30min开始减少,总JNK蛋白的含量无明显改变,MEK4和JNK的激活早于细胞凋亡;用SP600125预处理HepG2细胞株后,可以明显减少Caspase-3和PARP的活化.结论:As2O3可以体外通过诱导细胞凋亡抑制肝癌细胞株HepG2的增殖,细胞凋亡通过Caspase-3途径实现.JNK信号转导通路参与了As2O3诱导的HepG2凋亡反应,并位于Caspase-3的上游.

三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度的As2O3对人类肝癌细胞株HepG2生长的抑制作用;以流式细胞术观察细胞的凋亡率;以Westernblot法检测JNK、p-JNK、Caspase-3及PARP蛋白在As2O3作用下及SP600125阻断JNK信号转导通路情况下的表达。结果:As2O3对体外生长的肝癌细胞HepG2具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡。Westernblot结果显示,As2O3诱导肝癌细胞HepG2凋亡伴随着Caspase-3和PARP的活化;AS2O3作用于HepG2细胞10min后p-JNK蛋白表达开始增加,20min达到高峰,30min开始减少,总JNK蛋白的含量无明显改变,JNK的激活早于细胞凋亡;用SP600125预处理HepG2细胞株后,可以明显减少Caspase-3和PARP的活化。结论:As2O3通过诱导细胞凋亡抑制肝癌细胞株HepG2的增殖,细胞凋亡通过Caspase-3途径实现。JNK信号转导通路参与了As2O3诱导的HepG2凋亡反应,并位于Cas-pase-3的上游。

静脉注射脂多糖上调小鼠肺及肝CD14和Toll-like受体4表达

目的观察静脉注射脂多糖(lipopolysacchafide,LPS)致小鼠肺、肝组织及血液中LPS受体CD14、Toll-like receptor 4(TLR4)表达的变化.方法BALB/C小鼠随机分为5组,尾静脉注射LPS(7 mg/kg),分别于注后0、2、6、12和24 h取血及肺、肝组织.采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western Blot法分别检测肺和肝组织中CD14和TLR4 mRNA及蛋白表达,血清CD14(sCD14)蛋白表达.结果CD14和TLR4 mRNA在肺、肝组织中固有表达,LPS可使肺组织CD14和TLR4表达明显上调(P＜0.05),高峰出现在2-6 h(P＜0.05),24 h降至基础水平;而肝组织的变化明显滞后于肺,12 h达高峰(P＜0.05),24 h仍高于基础水平(P＜0.05).蛋白的变化与mRNA基本一致.血清CD14的表达则随时间延长而增加.结论LPS进入体内可诱导肺、肝和血液中内毒素受体CD14和TLR4的表达.不同组织中内毒素受体表达的时间差异表明肺是内毒素血症中较早受损的器官,肺组织损伤可能进一步引发肝损伤.

亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的影响

目的观察胆固醇转运复合物中关键蛋白亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而分析亲环素A在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法采用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot、免疫荧光法检测亲环素A蛋白的表达水平;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化。结果75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,亲环素A的蛋白表达逐渐减弱,48 h、72 h分别较未处理组下降了54.5%±6.3%、59.8%±5.9%(P<0.05)。间接免疫荧光定位检测发现氧化型低密度脂蛋白显著抑制RAW264.7细胞中亲环素A在胞膜、胞浆中的表达,且随着处理时间的延长作用更明显。细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值由未处理组的28.3%±1.2%上升至48 h的42.3%±5.9%(P均<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化过程中,亲环素A的表达下调与细胞胆固醇蓄积密切相关。

大鼠重症急性胰腺炎发病机制中p38丝裂原活化蛋白激酶的作用

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺组织中的变化规律,探讨p38 MAPK特异性抑制剂CNI1493对SAP 的保护作用. 方法:50 g/L牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立雄性SD 大鼠SAP模型,随机分为SO组(假手术组,n=30)、SAP—NS组(n=25)及SAP—CNI1493组(n=25),各组大鼠质量相似.Western blot法检测大鼠胰腺组织磷酸化p38 MAPK的表达;ELISA方法检测血清IL-1β,TNF-α水平:光镜下评估胰腺组织病理学积分. 结果:SO组胰腺组织存在磷酸化p38 MAPK弱表达, SAP—NS组造模后15 min时磷酸化p38 MAPK的表达即显著增高至峰值,3 h后开始下降,6 h时磷酸化p38 MAPK活性与SO组相似.SAP—NS组和SAP-CNI1493 组Western blot检测15,30 min条带光密度值5 200±360, 3 500±250和4 910±320,2 500±340,SAP—CNI1493组15,30 min时胰腺组织磷酸化p38 MAPK的表达显著低于SAP—NS组(P<0.01).SAP-CNI1493组3,6 h时间点血清IL-1β,TNF-α水平及3 h时间点胰腺组织病理学积分均显著低于SAP—NS组(P<0.01). 结论:p38 MAPK信号转导通路与牛磺胆酸钠大鼠SAP 发病机制有关,CNI1493预处理可能通过抑制p38 MAPK的激活、减少炎症细胞因子的产生而改善腓炎病理改变的严重程度.

叉头框M1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨叉头框M1(FOXM1)在结直肠癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测297例结直肠癌组织和80例对应癌旁正常组织中FOXM1的表达;Western blot法检测20例新鲜结直肠癌组织及对应癌旁组织中FOXM1的表达。结果 FOXM1在结直肠癌组织中的阳性率(70.97%)显著高于癌旁组织(17.50%,P<0.01);FOXM1表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移、脉管内癌栓转移、远处转移和TNM分期有关(P<0.05);与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、分化程度、CEA、CA199等无关(P>0.05)。结直肠癌组织中FOXM1蛋白相对表达量(0.855±0.063)明显高于相应癌旁组织(0.150±0.041,P<0.01)。FOXM1阳性患者的3年生存率明显低于阴性患者(P<0.01),且FOXM1为结直肠癌预后的独立性危险因素。结论 FOXM1蛋白在结直肠癌组织中过表达,且与患者临床病理特征、预后等因素有关,可能在结直肠癌的发生、转移等过程中起重要作用,有望成为结直肠癌新的肿瘤标志物和潜在的治疗靶点。

乙醇对大鼠骨骼肌胰岛素信号传递分子表达的影响

目的 探讨乙醇对大鼠骨骼肌葡萄糖摄取能力和胰岛素受体 (IR)、胰岛素受体底物 1(IRS1)和胰岛素受体底物 2 (IRS2 )及葡萄糖转运体 4(glut4)表达的影响。方法 雄性Wistar大鼠 2 0只 ,随机分为对照组和饮酒组 ,每组 10只。饮酒组每天乙醇灌胃 1次 ,乙醇量为 5g (kg·d) ;对照组每天蒸馏水灌胃 1次 ,蒸馏水量 5g (kg·d)。喂养时间 5个月。测大鼠空腹血糖和胰岛素、口服糖耐量 2h血糖 ;体外胰岛素刺激实验检测骨骼肌糖摄取能力 ;用RT- PCR和Westernblot法测定IR、IRS1和IRS2mRNA和蛋白表达水平 ,Real- timePCR测定glut4mRNA水平。结果 与对照组相比 :(1)饮酒组大鼠空腹血糖、空腹血胰岛素和口服糖耐量 2h血糖未见差异 ;(2 )饮酒组大鼠骨骼肌细胞基础和胰岛素刺激后糖摄取能力显著下降 (P <0 . 0 5 ) ;(3 )饮酒组大鼠骨骼肌glut4mRNA水平显著下降 (饮酒组 :△CT =5 . 3 7± 0 .2 4,对照组 :△CT =4. 86± 0 .3 1,P <0 .0 1) ;(4 )饮酒组大鼠骨骼肌IR、IRS1和IRS2mRNA及蛋白水平明显增加 (P <0 . 0 5 )。结论 长期摄入乙醇可以通过下调glut4表达而损害大鼠骨骼肌胰岛素敏感性 ,而胰岛素受体及其底物 1、2表达呈代偿性上调。

幽门螺杆菌感染者胃黏膜中内质网分子伴侣Grp94的表达

目的:探讨幽门螺杆菌感染对胃黏膜组织中内质网分子伴侣Grp94mRNA及蛋白水平表达的影响及意义.方法:应用半定量RT-PCR方法及Westernblot方法检测感染与未感染幽门螺杆菌的胃黏膜组织中Grp94mRNA及蛋白的表达情况.结果:未感染组28例,Grp94mRNA表达量为0.424±0.055,感染组32例,Grp94mRNA表达量为0.882±0.082.两组相比感染组Grp94mRNA的表达量明显高于未感染组(P<0.01);未感染组Grp94蛋白表达量为0.427±0.036,感染组Grp94蛋白表达量为0.671±0.072,两组相比感染组Grp94蛋白表达量明显高于未感染组(P<0.01).结论:幽门螺杆菌感染可使胃黏膜增加Grp94mRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护作用.

肾小球上皮细胞分泌肾上腺髓质素抑制系膜细胞增殖

目的 探讨肾上腺髓质素 (AM)及其受体CRLR在培养的大鼠肾小球上皮细胞 (GEC)和系膜细胞(MsC)的表达 ,以及AM对MsC生长的影响。方法 采用RT PCR法分别制备AM及CRLR探针 ,Northernblot法检测其在GEC和MsC的表达 ,[3H]胸腺嘧啶掺入法测定MsC增殖情况。结果 AM仅表达于GEC ,不表达于MsC ,而其受体CRLR的表达则相反。含有AM的GEC培养上清可抑制MsC生长 ,而CRLR阻断剂CGRP8-37可部分消除此抑制作用。结论 GEC可通过合成和分泌AM抑制MsC增殖 ,提示AM作为一种重要的旁分泌因子 ,以保持肾小球微环境稳定 。

KISS-1和基质金属蛋白酶-9蛋白在胃癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因KISS-1及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与胃癌侵袭、转移的关系,为研究胃癌的转移机制及临床治疗提供理论基础。方法采用免疫组织化学法检测36例胃癌组织及36例正常胃黏膜组织中KISS-1及MMP-9蛋白的表达情况,分析其与胃癌患者各临床病理指标的关系及二者表达的相关性;采用Western blot法检测不同侵袭能力胃癌细胞株BGC-823(高侵袭)和MKN-28(低侵袭)中KISS-1和MMP-9蛋白的表达。结果KISS-1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组织(P<0.05),并且其低表达与淋巴结转移密切相关(P<0.05);MMP-9蛋白在胃癌组织中的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织(P<0.05),并且其高表达与胃癌的浸润深度和淋巴结转移均密切相关(P<0.05);KISS-1与MMP-9蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。KISS-1蛋白在高侵袭胃癌细胞株中的表达低于低侵袭细胞株,但差异无统计学意义(P>0.05);MMP-9蛋白在高侵袭胃癌细胞株中的表达高于低侵袭细胞株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KISS-1蛋白的低表达和MMP-9蛋白的高表达可能与胃癌的浸润、转移有关,二者有望成为判定胃癌侵袭和转移能力的指标。

胃癌组织中TRAP1的表达及意义

目的探讨TRAP1蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法运用免疫组化PV法检测60例胃癌和20例癌旁组织中TRAP1的表达,采用Western blot法检测10例新鲜胃癌及癌旁组织中TRAP1的表达。结果免疫组化PV法及Western blot法检测结果均显示TRAP1在癌旁组织中极少表达,在胃癌组织中表达增高,差异有显著性(P<0.01),TRAP1表达与患者性别、年龄、分化程度、浸润深度等无关,与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.01)。结论 TRAP1在胃癌中高表达,可能参与胃癌的发生、发展。

热休克因子1及多种热休克蛋白在人良性脑膜瘤中的表达

目的探讨人良性脑膜瘤细胞中热休克因子1(HSF1)及热休克蛋白(HSP)HSP27、HSP70和HSP90的表达。方法应用免疫组化法和western blot法检测15例人脑膜瘤原代培养细胞中HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白的表达。结果15例人脑膜瘤中,HSF1蛋白以单体形式存在(分子量为80kD左右),阳性率为100%(15/15),HSP27、HSP70和HSP90阳性率分别为40%(6/15)、46.7%(7/15)和53.3%(8/15)。结论人良性脑膜瘤存在HSF1蛋白表达,而HSP27、HSP70和HSP90组成型表达水平低。

血清EB病毒特异性DNA酶抗体与鼻咽癌分期的关系

目的 :探讨血清非洲淋巴细胞瘤病毒特异性 DNA酶 ( Epstein-Barr virus-specific deoxynuclease,EBV-DNase)抗体与鼻咽癌 ( nasopharyngeal carcinoma,NPC)分期的关系。方法 :用 Western Blot法检测 2 64例 NPC血清 ,按“92分期法”对所有血清进行分期 ,分别计算各 T、N、M期及临床病期的 EBV-DNase抗体阳性率并进行统计学处理。 结果 :NPC各 T、N、M组及临床分期组血清 EBV-DNase抗体阳性率均无显著差异 ( P>0 .0 5 )。 结论 :早期 ( 期 ) NPC血清 EBV-DNase抗体阳性率与 ～ 期血清无明显差异 ,EBV-DNase抗体有可能成为