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Latest Advances in the Treatment of Post-stroke Limb Spasm with Botulinum Neurotoxin
1
作者 Shuhua Chen Lingjing Jin 《Journal of Advances in Medicine Science》 2018年第4期133-139,共7页
Objective: To describe the latest progress in the use of botulinum neurotoxin for post-stroke limb spasm. Methods: This paper looks up the relevant research literatures in recent years in PubMed, Web of Science, Sprin... Objective: To describe the latest progress in the use of botulinum neurotoxin for post-stroke limb spasm. Methods: This paper looks up the relevant research literatures in recent years in PubMed, Web of Science, Springer, Ovid, CNKI, WanFang databases and summarizes them. Results: The latest progress in the use of botulinum neurotoxin for post-stroke limb spasm was studied from the following aspects: the action mechanism of botulinum neurotoxin;efficacy evaluation;injection dose;target muscle selection;guiding technology;combination therapy. Conclusion: Botulinum neurotoxin is the first-line treatment for post-stroke limb spasm. We need to make continuous improvement and progress from the treatment period, injection dose, target muscle selection, guiding technology and efficacy evaluation to improve the quality of life of the majority of post-stroke survivors in China. 展开更多
关键词 botulinum neurotoxin POST-STROKE LIMB SPASM GUIDING technology Combination therapy Efficacy evaluation
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抗肉毒神经毒素A(BoNT/A)单克隆抗体的制备与鉴定(英文) 被引量:1
2
作者 王景林 康琳 贾宏丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期83-85,共3页
目的 :制备抗肉毒毒素A(BoNT/A)的单克隆抗体 (mAb)。方法 :用纯化的重组BoNT/A Hc片段免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2 /0融合 ,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系 ,及Western免疫印迹分析等方法对mAb进行特异性鉴定。结... 目的 :制备抗肉毒毒素A(BoNT/A)的单克隆抗体 (mAb)。方法 :用纯化的重组BoNT/A Hc片段免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2 /0融合 ,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系 ,及Western免疫印迹分析等方法对mAb进行特异性鉴定。结果 :获得 3株杂交瘤细胞株 :命名为4A8、2F7和 4F2 ,IgG亚类鉴定均为IgG1,腹水mAb的效价在 1× 10 -4~ 1× 10 -6之间。其中 ,4A8和 4F2能稳定分泌抗BoNT AmAb,并可特异性地识别重组BoNT/A和天然BoNT/A ,特别是 4A8可保护小鼠抵抗 10LD50 BoNT/A的攻击。结论 :成功地制备 3株特异性抗BoNT/AmAb ,并有 1株属于中和性mAb 。 展开更多
关键词 肉毒神经毒素A 肉毒杆菌毒素 单克隆抗体
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重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)突变体的构建、表达与活性分析
3
作者 宋孚洋 马臣杰 +3 位作者 高姗 康琳 王玉炯 王景林 《生命科学研究》 CAS CSCD 2011年第3期263-267,共5页
A型肉毒神经毒素的轻链(BoNT/A LC)是一种锌依赖性的金属内肽酶.通过X射线分析其结构并结合一些文献报道表明,轻链上的Arg362和Tyr365直接参与了酶的催化作用,而Glu350则处于其活性位点的中心位置.采用定点突变技术,对编码这3个关键性... A型肉毒神经毒素的轻链(BoNT/A LC)是一种锌依赖性的金属内肽酶.通过X射线分析其结构并结合一些文献报道表明,轻链上的Arg362和Tyr365直接参与了酶的催化作用,而Glu350则处于其活性位点的中心位置.采用定点突变技术,对编码这3个关键性的氨基酸位点的碱基进行突变(Arg362Ala、Tyr365Phe、Glu350Ala),获得了BoNT/A LC突变体.突变体蛋白与BoNT/A的底物蛋白SNAP-25进行切割反应,结果表明,未经突变的BoNT/A轻链蛋白能够特异性地识别SNAP-25蛋白上的Q197-R198位点,而突变体蛋白则完全无法识别该位点,不具有金属内肽酶活性,成功地去除了肉毒神经毒素的毒力,为下一步的全长肉毒神经毒素重组疫苗的研究打下了基础. 展开更多
关键词 肉毒神经毒素 轻链 突变
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A型肉毒神经毒素(BoNT/A)基因序列分析及其B细胞表位预测 被引量:1
4
作者 贾杨 阮承迈 王景林 《生物信息学》 2006年第2期53-56,61,共5页
比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素(BoNT/A)的基因组序列,发现其基因序列的一致性高迭92.2%-99.9%。基于保守性高的BoNT/A氨基酸序列,根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数,辅以对BoNT/A蛋白的二级结... 比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素(BoNT/A)的基因组序列,发现其基因序列的一致性高迭92.2%-99.9%。基于保守性高的BoNT/A氨基酸序列,根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数,辅以对BoNT/A蛋白的二级结构的分析,综合预测BoNT/A的B细胞表位。结果表明,BoNT/A轻链的142-150、284-292区段,轻链的284-292,重链的440-450、465-480、538-549、699-710、751-760、1087-1095、1224-1231、1263-1270区段是B细胞表位优势区的可能性较大。多参数方案井结合不同软件综合预测BoNT/A蛋白的B细胞表位,为进一步实验鉴定BoNT/A的B细胞表位及其多表位疫苗设计和研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肉毒梭菌 肉毒神经毒素 B细胞表位
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Prospective observational study to assess the validity of the functional disability score in patients with blepharospasm,hemifacial spasm and synkinesis treated with botulinum toxin injection
5
作者 Linda O.Okafor Aaron Jamison +1 位作者 Maribel Favor Raman Malhotra 《Annals of Eye Science》 2023年第3期41-47,共7页
Background:Benign essential blepharospasm(BEB),aberrant facial nerve degeneration and hemifacial spasm(HFS)are all examples dystonia which,though not life-threatening,can have a significant impact on patient quality o... Background:Benign essential blepharospasm(BEB),aberrant facial nerve degeneration and hemifacial spasm(HFS)are all examples dystonia which,though not life-threatening,can have a significant impact on patient quality of life.The need for reliable self-rating surveys to monitor functional disability is fundamental.The Blepharospasm Disability Index(BSDI)is already a widely utilised and validated selfrating score for blepharospasm whilst the functional disability score(FDS)requires further validation.The principle aim of this study is to repeat validation of the FDS against the BSDI,which has been validated by several groups since its original description but only in patients with BEB.Methods:A randomised blinded prospective cohort study was conducted at a single unit on 38 patients with BEB,aberrant facial nerve degeneration and HFS.Patients were blinded to complete the FDS followed by the BSDI or the BSDI followed by the FDS with a 30-minute interval.Results:Both the FDS and BSDI were found to be reliable with high internal consistency and test-retest reliability.Both scales were also found to be moderately correlated with the Jankovic disease severity score.Conclusions:This study is the first to use the FDS as a rating scale in patients with HFS and aberrant facial nerve degeneration.It is also the first study to formally validate the FDS as an acceptable rating scale for patients with dystonia and in particular it provides validation for its use in patients with HFS and aberrant facial nerve degeneration. 展开更多
关键词 BLEPHAROSPASM botulinum toxin(bont) DYSTONIA
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A型肉毒毒素注射治疗痉挛性斜颈的引导技术研究进展
6
作者 沈婷婷 吴乾昌 +3 位作者 刘晶 米宝明 阎俊 罗蔚锋 《临床神经外科杂志》 2024年第5期588-592,共5页
痉挛性斜颈(CD)是临床常见的一种局灶性肌张力障碍疾病,主要由于颈部肌肉不自主收缩引起的异常姿势或运动,大多数为特发性。CD的治疗方法有口服药物、A型肉毒毒素(BoNT-A)注射、手术等方法。BoNT-A注射起效快、持续时间长、副作用小、... 痉挛性斜颈(CD)是临床常见的一种局灶性肌张力障碍疾病,主要由于颈部肌肉不自主收缩引起的异常姿势或运动,大多数为特发性。CD的治疗方法有口服药物、A型肉毒毒素(BoNT-A)注射、手术等方法。BoNT-A注射起效快、持续时间长、副作用小、重复性好,是目前首选的治疗方法。然而不同研究中BoNT-A注射的疗效差异较大,为提高BoNT-A注射疗效,临床上各类引导技术应运而生,本文就各类BoNT-A注射引导技术的优势和不足进行综述。 展开更多
关键词 痉挛性斜颈 A型肉毒毒素 注射引导技术
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A型肉毒毒素Hc结构域在大肠杆菌中的高水平表达及免疫原性(英文) 被引量:11
7
作者 余云舟 孙志伟 +1 位作者 王双 俞炜源 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期812-817,共6页
对A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的全序列进行优化和人工合成,获得了全长1287bp,编码429aa的Hc基因。以pTIG-Trx为原核表达载体,实现了Hc在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化,该表达水平可占可溶性全菌总蛋白的36%~53%,经一步亲和层析... 对A型肉毒毒素受体结合区Hc基因的全序列进行优化和人工合成,获得了全长1287bp,编码429aa的Hc基因。以pTIG-Trx为原核表达载体,实现了Hc在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化,该表达水平可占可溶性全菌总蛋白的36%~53%,经一步亲和层析纯化可获得电泳级纯度的目的蛋白,在常规培养条件下,产量达到30mg/L以上。然后,纯化的重组蛋白Hc免疫小鼠后能够诱导产生高滴度特异性的抗体,也能诱导产生特异性的细胞免疫应答反应。小鼠体内A型肉毒毒素中和试验结果表明免疫组小鼠血清中含高滴度的体内中和抗体。结果表明,利用本实验的原核表达系统不仅能够高水平可溶性地表达A型肉毒毒素受体结合区Hc,而且重组Hc具有良好的免疫原性,可以用于制备治疗性抗毒素和作为亚单位候选疫苗用于预防A型肉毒毒素中毒。 展开更多
关键词 肉毒毒素 受体结合区Hc 可溶性表达 免疫原性
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鼠源抗B型肉毒毒素单链抗体噬菌体文库的构建筛选及抗体免疫学活性的初步研究 被引量:5
8
作者 杨秀清 王慧 +4 位作者 史晶 蔡昆 侯晓军 包士中 荫俊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1037-1041,共5页
B型肉毒毒素重链C-端片段(BoNTB/Hc)经金属螯和层析法纯化后免疫Balb/c小鼠,从其脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增,体外随机装配成单链抗体(scFv)。将其克隆至pCANTAB5E中... B型肉毒毒素重链C-端片段(BoNTB/Hc)经金属螯和层析法纯化后免疫Balb/c小鼠,从其脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,用抗体可变区混合引物进行全套抗体重、轻链可变区基因的扩增,体外随机装配成单链抗体(scFv)。将其克隆至pCANTAB5E中,构建单链抗体噬菌体抗体库。结果表明经过4轮"吸附-洗脱-扩增"的富集过程,筛选获得高亲和力的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。 展开更多
关键词 B型肉毒毒素 SCFV 噬菌体抗体库
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A型肉毒毒素调控钠离子通道Nav1.8缓解神经病理性疼痛的作用 被引量:7
9
作者 陈曦 郑淑慧 +1 位作者 胡昔权 刘先国 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期801-806,共6页
【目的】研究A型肉毒毒素(Bo NT/A)对腰5脊神经前根切断(L5 VRT)介导的神经病理性疼痛的影响,并进一步探讨其可能的内在作用机制。【方法】利用行为学测试方法观察Bo NT/A足底注射后对L5 VRT大鼠机械刺激撤足阈值的影响,采用Western blo... 【目的】研究A型肉毒毒素(Bo NT/A)对腰5脊神经前根切断(L5 VRT)介导的神经病理性疼痛的影响,并进一步探讨其可能的内在作用机制。【方法】利用行为学测试方法观察Bo NT/A足底注射后对L5 VRT大鼠机械刺激撤足阈值的影响,采用Western blot方法分析Bo NT/A对L5 VRT术后背根神经节(DRG)神经元中钠离子通道(Nav1.8)蛋白表达的影响,并进一步应用全细胞膜片钳技术观察Bo NT/A对DRG神经元中功能性Nav1.8电流密度的影响。【结果】一侧足底注射7、15 U/kg的Bo NT/A 1 d后可显著缓解L5 VRT介导的机械触诱发痛症状,且作用时间至少持续至给药后14 d;Bo NT/A可显著下调L5 VRT术后DRG神经元中Nav1.8蛋白表达水平,并可明显降低功能性Nav1.8电流密度。【结论】Bo NT/A可能通过下调DRG神经元中Nav1.8蛋白表达,降低功能性Nav1.8电流,发挥缓解神经病理性疼痛的作用。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 钠离子通道1.8 神经病理性疼痛 腰5脊神经前根切断
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多重聚合酶链式反应检测C、D型肉毒神经毒素基因 被引量:6
10
作者 王兴民 孟筱琦 王成怀 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期14-16,共3页
目的为了建立检测C、D型肉毒神经素基因的PCR方法。方法用人工合成的两对寡核苷酸引物于同一反应管中扩增C、D型肉毒素基因的一段DNA片断,建立了用于C、D型肉毒神经毒素基因检测的多重PCR方法。用多重聚合酶链式反应对... 目的为了建立检测C、D型肉毒神经素基因的PCR方法。方法用人工合成的两对寡核苷酸引物于同一反应管中扩增C、D型肉毒素基因的一段DNA片断,建立了用于C、D型肉毒神经毒素基因检测的多重PCR方法。用多重聚合酶链式反应对梭状芽胞杆菌属的10种26株菌进行了鉴定,并对其特异性及灵敏度进行了检查。结果当样本中同时含有C、D型的模板DNA时用该PCR系统可同时扩增出C、D型的目的片段,分别为999bp和404bp,其它各型肉毒酸梭菌及其它梭菌均为阴性,灵敏度较C、D型分别扩增偏低,C型为450pg,D型为10pg。结论该PCR系统可用于C、D型肉毒梭菌的鉴定。 展开更多
关键词 肉毒神经毒素 基因检测 C型 D型 聚合酶链反应
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抗A型肉毒毒素人源单链抗体融合蛋白的重组设计 被引量:3
11
作者 王慧 史晶 +3 位作者 孟露露 李佩真 白瑜 荫俊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期11-14,共4页
以获得的抗A型肉毒毒素单链抗体为模板,进行融合改构,将人IgG1的Fc片段连接到ScFv的C端,在大肠杆菌中实现抗体融合蛋白ScFv-Fc的表达,表达量30%以上,蛋白以包含体形式存在,经过体外变复性的抗体融合蛋白ScFv-Fc,进行Protein G Sepharos... 以获得的抗A型肉毒毒素单链抗体为模板,进行融合改构,将人IgG1的Fc片段连接到ScFv的C端,在大肠杆菌中实现抗体融合蛋白ScFv-Fc的表达,表达量30%以上,蛋白以包含体形式存在,经过体外变复性的抗体融合蛋白ScFv-Fc,进行Protein G Sepharose柱亲和层析纯化,纯度达90%~95%.体外活性检测结果表明,重组抗体融合蛋白ScFv-Fc可以特异结合A型肉毒类毒素抗原,其相对亲和力近似于母本单链抗体,其稳定性高于母本单链抗体. 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 单链抗体融合蛋白 相对亲和力 稳定性
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A型肉毒毒素保护性抗原基因的克隆及其结构分析 被引量:3
12
作者 王慧 荫俊 +2 位作者 袁斌 何君 王忠泽 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第4期325-328,共4页
以文献报道的 A型肉毒神经毒素基因全序列为标准 ,设计并合成一对引物 ,从肉毒梭菌中扩增含保护性抗原表位的肉毒毒素重链 C端 (Bo NTa Hc)基因片段 ,并将扩增产物进行限制性内切酶消化 ,与相同酶处理的克隆测序载体 p Bluescript KS( +... 以文献报道的 A型肉毒神经毒素基因全序列为标准 ,设计并合成一对引物 ,从肉毒梭菌中扩增含保护性抗原表位的肉毒毒素重链 C端 (Bo NTa Hc)基因片段 ,并将扩增产物进行限制性内切酶消化 ,与相同酶处理的克隆测序载体 p Bluescript KS( +)在体外连接 ,构建测序重组质粒 ,进行测序和基因结构分析 .结果 :PCR扩增获得了产物为 12 75 bp大小的 DNA片段 ,测序结果与 DNA数据库对照检索分析证明 ,此基因片段与 Genbank中的 Bo NTa Hc基因的同源性为 99%,可以认为克隆的基因即为 Bo NTa 展开更多
关键词 A型肉毒神经毒素 保护性抗原 克隆 基因结构分析 保护性抗原
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血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用 被引量:6
13
作者 高美玲 王红 +2 位作者 张彩云 兰婧 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2221-2227,共7页
目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A H... 目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。 展开更多
关键词 血清型A肉毒杆菌神经毒素重链 Neuro-2a细胞株 神经突起再生 细胞外信号调节激酶 蛋白激酶B
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A型肉毒神经毒素基因的PCR检测 被引量:5
14
作者 杨慧盈 王慧 +2 位作者 荫俊 包士中 史晶 《生物技术通讯》 CAS 2006年第1期37-39,共3页
目的:建立快速筛查A型肉毒毒素的PCR方法。方法:根据GenBank中报道的肉毒毒素基因序列,综合应用多种生物软件分析设计特异的检测引物,从提取的基因组DNA、热裂解产物和菌液等不同形式的模板中扩增大小为457bp的A型肉毒毒素特异基因片段... 目的:建立快速筛查A型肉毒毒素的PCR方法。方法:根据GenBank中报道的肉毒毒素基因序列,综合应用多种生物软件分析设计特异的检测引物,从提取的基因组DNA、热裂解产物和菌液等不同形式的模板中扩增大小为457bp的A型肉毒毒素特异基因片段,以肉毒梭菌其他血清型及破伤风梭菌为对照。结果:检测方法无交叉反应,灵敏度可达10pgDNA,3×103个菌。结论:建立的检测方法特异性强、灵敏度高,可以用于A型肉毒毒素基因的快速筛查。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 PCR检测 特异性 灵敏度
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肉毒毒素作用机制的研究进展 被引量:13
15
作者 叶婷 张雪平 《微生物学免疫学进展》 2017年第2期89-96,共8页
肉毒毒素(botulinum toxin,BTX)是肉毒梭状芽胞杆菌在生长繁殖过程中产生的一种外毒素,其通过抑制神经递质的释放而引起肌肉松弛型麻痹。在世界范围内,肉毒中毒的案例时有发生,病情严重的患者最终因呼吸衰竭而死亡。肉毒毒素相关产品在... 肉毒毒素(botulinum toxin,BTX)是肉毒梭状芽胞杆菌在生长繁殖过程中产生的一种外毒素,其通过抑制神经递质的释放而引起肌肉松弛型麻痹。在世界范围内,肉毒中毒的案例时有发生,病情严重的患者最终因呼吸衰竭而死亡。肉毒毒素相关产品在临床痉挛性疾病、腺体分泌过度、神经性疼痛的治疗及美容除皱等领域展现出广阔的应用前景。因而,肉毒毒素作用机制的研究在肉毒中毒的治疗以及临床新适应症的开发等方面具有重要意义。就肉毒毒素跨越小肠上皮细胞屏障的吸收及神经毒性作用机制的研究现状作一概述。 展开更多
关键词 肉毒毒素 肉毒神经毒素 小肠上皮 神经递质
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A型肉毒毒素通过调控大鼠背根神经节神经元中钠离子通道缓解神经病理性疼痛的研究 被引量:3
16
作者 陈曦 胡昔权 +1 位作者 张丽颖 阚宏俊 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1032-1037,共6页
目的:观察A型肉毒毒素(BoNT/A)对大鼠L5脊神经前根切断(L5 VRT)疼痛模型大鼠的镇痛效果,研究BoNT/A对未受损的背根神经节(DRG)神经元中不同类型钠通道电流和神经元兴奋性的影响。方法:建立L5 VRT神经病理性疼痛大鼠模型。实验大鼠分成3... 目的:观察A型肉毒毒素(BoNT/A)对大鼠L5脊神经前根切断(L5 VRT)疼痛模型大鼠的镇痛效果,研究BoNT/A对未受损的背根神经节(DRG)神经元中不同类型钠通道电流和神经元兴奋性的影响。方法:建立L5 VRT神经病理性疼痛大鼠模型。实验大鼠分成3组:假手术组(Sham)、VRT+生理盐水注射组(VRT+Saline)、VRT+BoNT/A注射组(VRT+BoNT/A)。造模后第5天给药,测量不同时间点各组大鼠机械撤足阈值和热撤足潜伏期的变化。电生理膜片钳方法观察BoNT/A对DRG神经元中不同类型钠通道电流的影响,电流钳检测神经元动作电位阈值变化情况。结果:足底皮下注射BoNT/A(7U/kg)可显著缓解L5 VRT介导的机械触痛敏和热痛敏症状(P<0.01);BoNT/A干预后可显著减小L5 VRT术后DRG神经元中河豚毒素敏感型(TTX-S)和河豚毒素抵抗型(TTX-R)钠通道电流密度(P<0.05);BoNT/A可升高VRT术后原本下降的神经元动作电位阈值(P<0.05)。结论:BoNT/A可减小未损伤DRG神经元中TTX-S和TTX-R钠电流,降低神经元兴奋性,缓解L5 VRT介导的神经病理性疼痛症状。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 神经病理性疼痛 背根神经节 钠离子通道 神经损伤
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A型肉毒神经毒素理化及生物学特性研究 被引量:4
17
作者 李小娟 张若晖 +4 位作者 苗承辉 苏娟 何星 崔保峰 张雪平 《微生物学免疫学进展》 2016年第4期7-11,共5页
目的探究A型肉毒神经毒素的理化及生物学特性,为A型肉毒神经毒素制品的研制提供依据。方法采用SDS-PAGE、HPLC测定A型肉毒神经毒素的纯度;采用毛细管凝胶电泳分析其在非还原条件及还原条件下各组分的相对分子质量;采用等电点聚焦电泳测... 目的探究A型肉毒神经毒素的理化及生物学特性,为A型肉毒神经毒素制品的研制提供依据。方法采用SDS-PAGE、HPLC测定A型肉毒神经毒素的纯度;采用毛细管凝胶电泳分析其在非还原条件及还原条件下各组分的相对分子质量;采用等电点聚焦电泳测定其等电点;对其N-末端氨基酸序列进行测序,并将测序结果与NCBI blast数据库中A型肉毒梭菌Hall株的氨基酸序列作比对,确证其各组分的成分;对A型肉毒毒素复合物及A型肉毒神经毒素进行口服毒性分析,并对3批A型肉毒神经毒素原液和其半成品进行生物学稳定性研究。结果 A型肉毒神经毒素纯度〉99.00%;非还原条件下其相对分子质量约为152 000,N-末端氨基酸序列ALNDLQINVN,为完整的A型肉毒神经毒素;还原条件下,由相对分子质量约为101 000、N-末端氨基酸序列为ALNDLQINVN的重链和相对分子质量约为101 000、N-末端氨基酸序列为PFVNKQFNYK的轻链组成;等电点为4.91;口服A型肉毒神经毒素的小鼠LD50为1.50×107U/kg,是其复合物的7.9倍;3批A型肉毒神经毒素原液在2~8℃放置28 d生物学活性无下降,平均比活性为2.13×108U/mg,是其复合物的7.1倍;3批半成品在18~26℃放置28 d生物学活性无下降。结论 A型肉毒神经毒素纯度较高,非还原条件下为单链,还原条件下裂解为轻链和重链,其原液及其半成品的生物学稳定性较好。 展开更多
关键词 A型肉毒神经毒素 A型肉毒毒素复合物 理化特性 生物学特性
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A型肉毒毒素轻链的原核表达、纯化及活性鉴定 被引量:4
18
作者 罗森 齐芬芳 +3 位作者 宫路路 刘昊 李涛 王慧 《生物技术通讯》 CAS 2015年第5期632-635,共4页
目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,... 目的:在大肠杆菌中表达、纯化A型肉毒毒素轻链(Bo NT/A LC),研究其生物学活性。方法:根据Gen Bank中报道的Bo NT/A LC基因序列设计特异引物,从肉毒梭菌中扩增Bo NT/A LC基因片段,构建重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,IPTG诱导目的蛋白高效表达,表达产物经Ni螯合亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论:构建了重组大肠杆菌p ET-32a Bo NT/A LC/BL21(DE3)Rosetta,原核表达获得高水平可溶性重组Bo NT/A LC,纯化得到纯度较高的蛋白质,重组Bo NT/A LC的酶活略高于A型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于Bo NT/A LC抑制剂高通量体外检测方法研究。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素轻链 金属内肽酶 原核表达
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聚合酶链式反应对食物中肉毒的检测 被引量:3
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作者 赵晋 郭宗琪 +1 位作者 杨小蓉 薛晴 《预防医学情报杂志》 CAS 2006年第1期113-115,共3页
目的用PCR方法鉴定肉毒食物中毒的病原菌。方法用1对人工合成的寡核苷酸引物护增A、B、E、F和G型肉毒神经毒素基因的一段264bp的DNA片段,并对2个食物中毒样品的增菌产毒培养液及分离的菌株进行检测。结果从食物中毒样品中检测出肉毒梭... 目的用PCR方法鉴定肉毒食物中毒的病原菌。方法用1对人工合成的寡核苷酸引物护增A、B、E、F和G型肉毒神经毒素基因的一段264bp的DNA片段,并对2个食物中毒样品的增菌产毒培养液及分离的菌株进行检测。结果从食物中毒样品中检测出肉毒梭菌。结论PCR方法能快速、准确的鉴定肉毒食物中毒样品中的病原菌。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 肉毒毒素 食物中毒
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B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定 被引量:3
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作者 罗森 陈芳红 +1 位作者 李涛 王慧 《生物技术通讯》 CAS 2018年第1期59-63,共5页
目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosett... 目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/BLC)并纯化,研究其生物学活性。方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/BLC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经His Trap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析。结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22b BoNT/BLC/BL21(DE3)Rosetta,BoNT/BLC表达量达到了细菌总蛋白的30%左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95%以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/BLC抑制剂高通量体外检测方法的研究。 展开更多
关键词 肉毒毒素 金属内肽酶 原核表达
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