养殖长臀[鱼危]肌肉营养成分分析与品质评价

为探究养殖长臀[鱼危](Cranoglanis bouderius)肌肉的营养成分和品质,对其肌肉营养成分进行了检测,并与野生长臀[鱼危]和几种常见经济鱼类进行了对比分析。结果显示:养殖长臀[鱼危]肌肉中的水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分质量分数分别为74.98%、16.33%、7.62%和1.13%;其肌肉中共检测出17种氨基酸,必需氨基酸指数(EAAI)为69.37%,呈味氨基酸质量分数(DAA)为28.24%,符合FAO/WHO推荐的理想蛋白质标准;氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)显示,养殖长臀[鱼危]的第一限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸(Met+Cys),第二限制性氨基酸为缬氨酸(Val);其肌肉中共检测出15种脂肪酸,不饱和脂肪酸质量分数为68.33%,且含有二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。对比分析结果表明,长臀[鱼危]是一种高蛋白、口感好、营养丰富的优质淡水鱼类,养殖群体的营养成分和品质与野生群体相比差异不大,具有推广的潜力和价值。

珠江水系不同地理居群长臀鮠肉质品质的对比分析

通过对广西西江和广东佛山九江两水域中长臀鮠(cranoglanis bouderius)的肌肉常规营养成分、氨基酸和脂肪酸组成以及肉质品质进行对比分析,结果显示,西江长臀鮠和九江长臀鮠总氨基酸(TAA)分别为64.79%和72.17%,鲜味氨基酸(DAA)分别25.36%和28.27%,九江长臀鮠的TAA和DAA含量明显高于西江长臀,但对比二者必需氨基酸和鲜味氨基酸同总氨基酸的比值并无显著差异;从脂肪酸组成来看,西江长臀鮠饱和脂肪酸的含量为32.39%,大于九江长臀鮠的30.39%,而不饱和脂肪含量67.61%,小于九江长臀鮠的69.61%;西江长臀鮠的肌纤维直径和pH大于九江长臀,肌肉硬度、弹性、咀嚼力和回复性都小于九江长臀鮠。

长臀遗传多样性的微卫星标记分析

利用55对微卫星引物对珠江和海南长臀鮠基因组DNA进行了扩增，有23对能扩增出清晰条带，其中有11对在珠江长臀鮠中表现多态性，9对在海南长臀中表现多态。这些多态性位点的等位基因数在2—4之间，平均等位基因数2．91个。结果显示：珠江长臀鮠的平均观测杂合度（Ho）是0．45，平均期望杂合度（He）是0．46，平均多态信息含量（PIC）为0．377；海南长臀鮠的平均观测杂合度（舶）和平均期望杂合度（He）分别是0．58、0．53，平均多态信息含量（PIC）为0．426。两群体间的遗传相似度为0．875、遗传距离为0．133。

长臀性腺发育及其组织结构观察

采用常规石蜡组织切片和长期数据统计观察分析,对长臀精卵巢发育和周年变化特点以及其繁殖习性进行了探讨。依据精卵巢外形以及组织学特征,将长臀性腺发育分为6个时期,其中Ⅰ期性腺只出现在一龄以内的个体,Ⅱ期性腺将持续一年左右时间,经过Ⅲ期、Ⅳ期约一年的发育,长臀进入Ⅴ期发育至成熟并首次产卵排精。性成熟个体精卵巢发育只有后五期。长臀约3龄达性成熟,繁殖期是4—6月,5月为繁殖高峰期。长臀个体性腺发育不同步,但为一次产卵型。

17β-雌二醇和甲基睾酮对离体长臀鮠脑垂体促性腺激素分泌的影响

性类固醇激素对性腺发育期间的鱼类促性腺激素(GTH)分泌有负反馈作用,而对性未成熟的鱼类GTH分泌有正反馈作用。本实验选取性腺发育中期的长臀(Cranoglanisbouderius)进行研究,将实验用鱼分成4组(实验重复3次,每组共用6尾鱼,):①持续性17β-雌二醇(17β Estradiol,E2)处理;②E2在注入促性腺激素释放激素类似物(Analogueofgonadotropin releasinghormone,GnRH-A)脉冲刺激的处理;③持续性甲基睾酮(17α methyltestosterone,MT)处理;④MT在注入GnRH-A脉冲刺激的处理;采用离体灌流孵育和GTH放射免疫测定的方法研究E2和MT对长臀脑垂体GTH分泌的影响。持续性的E2(1μmol/L)处理能显著性地抑制长臀脑垂体碎片基础GTH的分泌,而持续性的MT(1μmmol/L)处理能抑制长臀脑垂体碎片基础GTH的分泌,同时E2和MT处理能抑制GnRH-A刺激的GTH分泌,而高浓度的E2和MT处理(10μmol/L)要比低浓度的E2和MT处理(0 1μmol/L)对长臀脑垂体碎片基础GTH释放抑制能力强。这些结果表明,在离体实验中,E2和MT对性腺发育中期的长臀脑垂体的GTH的分泌具有负反馈的作用,并且可能直接参与了长臀脑垂体的GTH调节。

长臀的AFLP分析

采用AFLP分子标记技术对珠江长臀和海南长臀共60个个体(每个群体30个)进行了遗传多样性研究。选取的18对引物组合均能扩增出清晰、可重复的扩增产物,扩增带型差异明显。两个群体均表现出较高的多态位点比例和特异性条带数。群体内个体间的遗传相似度(平均值)珠江长臀种群为0.9462±0.0237,海南长臀为0.9465±0.0226,海南长臀比珠江长臀略高。群体间的遗传相似度是0.9367±0.0231,小于两个群体内的遗传相似度,两群体的遗传距离是0.0634±0.0230。根据遗传相似度绘制了UPGMA聚类图。研究结果表明:珠江长臀和海南长臀间的遗传差异属于种内差异,两者同属一个有效种。

螺旋藻对海南长臀鮠抗氧化和脂代谢指标的影响

试验旨在分析螺旋藻对长臀鮠血清和肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)、血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的影响。选用450尾平均体重为(6.32±0.62)g的长臀鮠为试验对象,设置5组,每组3个重复,饲养60 d。结果显示:添加螺旋藻对血清MDA的影响不显著;1%添加组的肝脏CAT最高,比对照组提高了41.23%;2%添加组的肝脏SOD、血清CAT活力最高,分别提高了4.69%和36.94%;3%添加组的血清SOD和肝脏MDA水平最优,前者提高了78.15%,后者降低了71.38%;试验组血清TC和TG水平有下降的趋势,其中2%组TC下降最多(29.23%);TG则以3%组下降最多(18.75%),2%组次之。由此可见,饲料中添加螺旋藻能一定程度上改善抗氧化水平和调节脂代谢,以2%添加量作用效果最好。

基于线粒体细胞色素b基因全序列的海南长臀鮠南渡江种群遗传变异分析

测定了海南南渡江15尾海南长臀鮠（Cranoglanis bouderius multiradiatus）的cytb基因全序列1138bp，发现3个可变位点和1个简约信息位点，共检测到4种单倍型。海南长臀鮠Cytb基因具有典型的起始密码子（ATG）和不完全终止密码子（T＊＊），共编码379个氨基酸，密码子第三位点G的含量仅2.9%，而C和A的含量分别为39.1%和38.5%，在第二位点上T的使用频繁高达41.3%，表明cytb基因在密码子碱基的使用具有偏倚性。海南长臀鮠基于Kimura-2-parameter模型的单倍型间遗传距离为0.0009~0.0017，在NJ系统树中没有明显的谱系结构，单倍型多样性（0.600）和核苷酸多样性（0.0006）都较低，表明海南长臀鮠遗传多样性非常贫乏，应及时采取有效措施保护海南南渡江种群。

海南长臀鮠肌肉营养品质分析

为了对长臀鮠(Cranoglanis bouderius)的肌肉营养价值做出综合评判,对该种鱼的营养需要量的制定和计算提供依据,利用常规肌肉营养测试方法测定分析了长臀鮠的肌肉营养成分。试验结果表明长臀鮠肌肉(鲜样)中粗蛋白质量分数17.86%,粗脂肪质量分数14.27%,水分质量分数65.70%,灰分质量分数2.06%,碳水化合物质量分数0.11%。肌肉中含有18种氨基酸,总量为68.71%,其中8种人体必需氨基酸总量是26.84%,占氨基酸总量的39.06%;4种鲜味氨基酸总质量分数为26.66%;肌肉中含有16种脂肪酸,其中EPA与DHA质量分数分别为1.86%和2.85%。表明长臀鮠是营养价值较高,提供高能,肉味鲜美的高品质淡水鱼类。

基于线粒体Cytb和COⅠ基因对珠江、海南和红河长臀鮠群体遗传结构分析

为了解3个种群的野生资源状况,并对3个种群的物种有效性进行分析,采用Cytb和COⅠ基因序列测定技术,分析了珠江水系、海南水系和越南红河水系长臀鮠种群的群体遗传结构及其变异,结果发现,三个群体平均遗传距离分别为0.003(cytb)和0.002(coⅠ);94尾个体分别存在35(Cytb)和13(COⅠ)个变异位点,分别检测出24(Cytb)和13(COⅠ)个单倍型,总群体单倍型多样性(Hd)分别为0.875(Cytb)和0.787(COⅠ),平均核苷酸差异数(K)分别为3.194(Cytb)和1.328(COⅠ),核苷酸多样性指数(Pi)分别为0.00295(Cytb)和0.00213(COⅠ)。珠江长臀鮠单倍型多样性(Hd)和核苷酸多样性(Pi)最高,海南最低;对长臀鮠群体进行历史动态分析,三个种群各自无明显扩张趋于稳定,但将三个种群作为一个群体时发现长臀鮠可能在某一个时期产生了扩张。研究结果表明,三个种群遗传距离显著小于临界值2%,应为同一个种;长臀鮠野生资源较为贫乏,且海南群体最为严重。

基于线粒体控制区Dloop序列的长臀种群遗传结构分析

【目的】了解长臀Cranoglanis 3个种群的野生资源状况,并对3个种群的物种有效性进行分析。【方法】采用线粒体控制区Dloop基因序列测定技术,分析了珠江水系、海南水系和越南红河水系长臀种群的群体遗传结构及其变异。【结果】在检测的84个个体中共得到43个单倍型,呈现出较高的单倍型多样性与较为贫乏的核苷酸多样性,其中海南长臀C.multiradiatus群体的单倍型多样性(Hd=0.871)和核苷酸多样性(Pi=0.006 4)最低;Tajima’s D中性检验以及核苷酸不配对分析均表明,3个长臀群体趋于稳定,未经历过大规模的种群扩张。Fst分析发现,海南长臀同珠江长臀C.bouderius、红河长臀C.henrici产生了一定的遗传分化,而珠江和红河群体未发现明显遗传分化,从遗传距离来看,珠江和红河长臀净遗传距离为0.000。【结论】长臀野生资源较为贫乏,且海南群体最为严重;认为应将珠江长臀和红河长臀归为同一亚种长臀C.bouderius,而海南长臀作为长臀的另一个亚种。

促性腺激素释放激素类似物对长臀鮠脑垂体促性腺激素分泌的影响

采用离体灌流孵育技术和促性腺激素的放射免疫测定方法 ,对长臀 (Cranoglanisbouderius)脑垂体碎片促性腺激素的分泌进行了研究。结果表明 :持续的促性腺激素释放激素类似物 (GnRH A)能显著刺激退化期的长臀离体脑垂体碎片促性腺激素 (GTH)的分泌 ,并且长臀脑垂体碎片对持续的GnRH A刺激未表现出脱敏性 ,该结果与胡子鲇和鲇鱼相似 ,而与金鱼和鲤科鱼类不同 ;重复脉冲GnRH A刺激对长臀脑垂体碎片GTH分泌具有促进作用 ,而且存在剂量依存关系 ,与鲇鱼和鲤科鱼类相类似。上述结果表明在长臀的人工繁殖中可以用持续高浓度GnRH A刺激对长臀进行催熟和催产。

珠江长臀鮠含肉率及肌肉营养成分分析

对珠江长臀鮠[Cranoglanis bouderius(Richardson)]的含肉率和肌肉营养成分进行了测定。结果表明,长臀鮠含肉率平均为69.42%,粗蛋白15.47%,粗脂肪7.43%,水分75.38%,粗灰分1.15%;检测出的17种氨基酸,总量为64.20%(干样),其中人体必需氨基酸总量29.28%,占氨基酸总量的45.62%,必需氨基酸的构成比例基本符合FAO/WHO的标准,必需氨基酸指数为58.70;鲜味氨基酸含量为24.83%,占氨基酸总量的38.64%。长臀鮠是一种营养丰富、适合养殖推广的优质淡水鱼类。

长臀脑垂体和血清中促性腺激素的生殖周期变化

Changes in the pituitary and serum gonadotropin levels of Cranoglanis bouderius were studied at different stages of ovarian development. Based on African catfish gonadotropin (cfGTH) and its anti-serum (Racf), heterologous radio-immunoassay (RIA) for the gonadotropin (GTH) of Cranoglanis bouderius was developed. The pituitary GTH contents at the late development stage were significantly higher than that at the mature, ovulation or regressed stages, while serum GTH levels at maturation and ovulation were significantly higher than that at late development and regressed stages. Injection of gonadotropin-releasing hormone analogue (GnRH-A) stimulated GTH secretion. Domperidone (DOM) had no effect on the basal serum GTH level. Injection of GnRH-A and DOM significantly enhanced the GTH levels stimulated by GnRH-A alone. These results indicate that GTH release in Cranoglanis bouderius is under the dual regulation of gonadotropin releasing hormone (GnRH) and dopamine (DA) from the hypothalamus, but DA can only inhibit GTH release induced by GnRH and not basal GTH release.

长臀鮠胚胎发育的研究

催产4龄亲鱼,催产药物为LHRH-A,DOM,CPE,催产率66%,孵化率20%;长臀鮠成熟卵圆球形,透明,卵径平均(1.10±0.20)mm,为沉性卵,具黏性,受精卵孵化分为胚盘阶段、卵裂阶段、囊胚阶段、原肠阶段、神经胚期、器官分化阶段和孵化等7个阶段,当水温26-29℃时,孵化时间为96h10min。

枯草芽孢杆菌对海南长臀鮠生长性能、血清生化指标和热休克蛋白HSP70的影响

为研究枯草芽孢杆菌对海南长臀鲍生长性能、血液生化指标和热休克基因70（HSP70）的影响，本试验在饲料中添加不同浓度的枯草芽孢杆菌（0％、0-3％、0．6％、0．9％和1．2％），饲养（5．79-0．02）g的长臀能60d。结果表明：添加枯草芽孢杆菌对长臀鲍的存活率和肥满度无显著影响；0．9％组和1．2％组的终末体重、增重率和特定生长率分别比对照组显著提高了21．97％和23_14％、36．62％和39．24％、20．92％和22．88％，饵料系数显著下降23．91％和26．81％。枯草芽孢杆菌对长臀鲩血清葡萄糖、碱性磷酸酶和丙二醛的影响不显著；各试验组血清总蛋白均较对照组显著提高，其中1．2％组最高；0．3％组和0．6％组白蛋白显著提高；甘油三酯和总胆固醇均呈下降的趋势；0．9％组过氧化氢酶活性显著低于对照组41．89％（P〈0．05）；枯草芽孢杆菌的添加量越大对HSP70表达量的影响越大，当添加量达到0．6％以上时，出现显著提高的效果，其中以1．2％组提高幅度最大（121．10％）。综上所述，枯草芽孢杆菌可提高长臀跪增重率和特定生长率，降低饵料系数，提高血液蛋白水平，降血脂，增强抗应激能力等。建议枯草芽孢杆菌添加量为0．9％-1．2％。

促性腺激素释放激素类似物/地欧酮对长臀血清雌二醇和睾酮质量浓度的影响

采用放射免疫测定技术,对长臀鮠(Cranoglanis bouderius)在不同的性腺发育时期的血清雌二醇(E2)和睾酮(T)质量浓度变动,以及注射促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)/地欧酮(DOM)后的血清E2和T质量浓度变动进行了研究。结果表明:血清E2质量浓度在雌鱼的性腺发育期明显升高,在性腺成熟期开始下降,性腺退化期降到最低;血清E2质量浓度在雄鱼的性腺发育过程中缓慢升高,并持续保持较低质量浓度,到性腺退化期略有升高。血清T质量浓度在雌雄鱼的变化情况相似,性腺发育期明显升高,而在性腺成熟期开始降低,到退化期降到最低。注射GnRH-A能显著提高性腺处于不同发育时期的雌鱼的血清E2质量浓度和雄鱼的血清T质量浓度,注射多巴胺拮抗剂地欧酮(DOM)对血清E2和T质量浓度没有影响,但是GnRH-A和DOM联合注射能使雌雄鱼血清E2和T质量浓度提高,在性腺发育期尤为明显,这和GnRH-A+DOM促进血清GTH水平提高相一致。

海南长臀鮠人工繁殖与胚胎发育的研究

使用LHRH—A2＋DOM＋PG混合催产剂对从海南引进经池塘驯化养殖5冬龄的海南长臀鲍进行催产，并用日产80i光学显微镜观察胚胎发育过程。取得平均催产率88．9％，平均受精率82．3％，平均孵化率68．7％的效果。成熟的卵子为圆球形、淡黄色、粘性卵。在水温24．8～27．0℃条件下，其受精卵经细胞期、囊胚期、原肠期、体节出现期、器官出现期和出膜前期等多个发育时期孵化出膜，所需时间为82h 15min。拍摄了胚胎发育照片25幅。

长臀AFLP分析体系的建立

以珠江长臀(Cranoglanis bouderius)为试验材料,建立了长臀扩增酶切片段长度多态性(AFLP)分析体系,对其分析过程中的DNA提取、双酶切、单酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等步骤进行了检测,并对反应条件进行了优化。用PstI/TaqI、EcoRI/MseI等2组双酶切组合构建长臀的AFLP指纹图谱,条带清晰可辨,扩增信号强,得到清晰的长臀AFLP指纹图谱。