期刊导航
期刊开放获取
河南省图书馆
退出
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
5
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式:
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立
被引量:
18
1
作者
李川
谭亚娣
+7 位作者
陈颖钰
胡巧云
马艳
张桂荣
钦博
晁彦杰
陈焕春
郭爱珍
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期40-45,共6页
实验旨在建立牛重组IFN-γ(BovIFN-γ)的ELISA检测技术,为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞,从培养细胞中提取总RNA,经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA,进一步克隆至pET28a,转化大肠杆菌,经...
实验旨在建立牛重组IFN-γ(BovIFN-γ)的ELISA检测技术,为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞,从培养细胞中提取总RNA,经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA,进一步克隆至pET28a,转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出预期大小(18kD左右)组氨酸标记蛋白,经鉴定为BovIFN-γ;以纯化的重组BovIFN-γ为免疫原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得4株能稳定分泌抗BovIFN-γ单克隆抗体的细胞株,分别命名为A7、A10、G6与G10。免疫球蛋白亚类鉴定证明杂交瘤细胞所分泌的抗体均为IgG1,腹水效价在1:2^10×100~1:2^11×100之间。Western-blot分析显示,4株单抗均能特异性结合重组BovIFN-γ。ELISA试验表明,4株单抗只与融合蛋白BovIFN-γ反应,而不与非相关性蛋白Ag85B、ESAT-6-CFP-10、GM-CSF等发生反应。选取A10细胞株分泌的单克隆抗体、纯化的多克隆抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗免IgG,建立了检测BovIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法。实验结果表明,此方法检测敏感性达到2ng/mL,特异性良好,为进一步建立灵敏、特异的病原感染诊断方法奠定了基础。
展开更多
关键词
牛IFN-γ
单克隆抗体
ELISA
克隆
表达
下载PDF
职称材料
牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
被引量:
3
2
作者
李超
林祥梅
+2 位作者
梅琳
李全芬
韩雪清
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第1期72-76,共5页
建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进...
建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进一步优化ELISA反应条件。结果表明,获得一株能稳定分泌抗BovIFN-γMcAb的杂交瘤细胞株A12E9,分泌单克隆抗体腹水效价为1∶107,属于IgG1亚类,具有良好的特异性;所建立的双抗体夹心ELISA方法,BovIFN-γ最低检测限为40 ng/mL,与其他蛋白不发生交叉反应,表现出良好的特异性。该方法为建立牛结核病的γ-干扰素诊断方法奠定了基础。
展开更多
关键词
牛γ-干扰素
单克隆抗体
双抗体夹心ELISA
下载PDF
职称材料
牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆
被引量:
4
3
作者
潘志明
孙辉
王运吉
《大连轻工业学院学报》
2005年第2期106-109,共4页
根据牛γ干扰素(bovIFN γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段,将RT PCR产物克隆到pMD18 T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovI...
根据牛γ干扰素(bovIFN γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段,将RT PCR产物克隆到pMD18 T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovIFN γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体pGEX 4T 1中,将pGEX 4T 1/bovIFN γ转化到大肠杆菌中DH5α中。
展开更多
关键词
大肠杆菌
Γ-干扰素基因
克隆
IFN-γ
聚合酶链式反应
限制性酶切分析
脾脏淋巴细胞
PCR产物
序列设计
cDNA
总RNA
基因序列
表达载体
基因片段
逆转录
一步法
特异性
T载体
引物
测序
下载PDF
职称材料
牛γ干扰素基因的克隆及在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达
被引量:
2
4
作者
张红燕
许新花
+1 位作者
张苓花
王运吉
《大连轻工业学院学报》
2004年第4期260-264,共5页
利用RT PCR扩增奶牛γ干扰素基因bovIFN γ。测序和序列分析表明,bovIFN γcDNA由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸,N 端的23个氨基酸为信号肽,含有2个潜在的N 糖基化位点。理论相对分子质量为19393.48,理论等电点为9.63。构建转化载...
利用RT PCR扩增奶牛γ干扰素基因bovIFN γ。测序和序列分析表明,bovIFN γcDNA由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸,N 端的23个氨基酸为信号肽,含有2个潜在的N 糖基化位点。理论相对分子质量为19393.48,理论等电点为9.63。构建转化载体pPIC9K/bovIFN γ,并转化至巴斯德毕赤酵母GS115中,获得重组酵母菌GS115/bovIFN γ。
展开更多
关键词
IFN-Γ
Γ干扰素
GS
基因
表达
转化载体
克隆
巴斯德毕赤酵母
信号肽
等电点
下载PDF
职称材料
牛γ-干扰素基因的克隆及序列分析
被引量:
2
5
作者
武玉梅
郝永清
+1 位作者
张爱荣
史冬艳
《畜牧与饲料科学》
2009年第3期18-19,21,共3页
根据GenBank中已公布的牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因序列设计引物,应用一步法逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以从牛外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,扩增出γ-干扰素成熟肽基因片断,并对其进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,...
根据GenBank中已公布的牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因序列设计引物,应用一步法逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以从牛外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,扩增出γ-干扰素成熟肽基因片断,并对其进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,试验所设计引物可以成功用于扩增牛γ-干扰素成熟肽基因片段,所扩增序列与GenBank中已有序列同源性达99.77%。
展开更多
关键词
牛γ-干扰素
RT-PCR法
克隆
序列分析
下载PDF
职称材料
题名
牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立
被引量:
18
1
作者
李川
谭亚娣
陈颖钰
胡巧云
马艳
张桂荣
钦博
晁彦杰
陈焕春
郭爱珍
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期40-45,共6页
基金
武汉市科技攻关课题(No.20066002056)
国家"十五"科技攻关奶业重大专项(No.2002BA518A24)~~
文摘
实验旨在建立牛重组IFN-γ(BovIFN-γ)的ELISA检测技术,为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞,从培养细胞中提取总RNA,经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA,进一步克隆至pET28a,转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出预期大小(18kD左右)组氨酸标记蛋白,经鉴定为BovIFN-γ;以纯化的重组BovIFN-γ为免疫原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得4株能稳定分泌抗BovIFN-γ单克隆抗体的细胞株,分别命名为A7、A10、G6与G10。免疫球蛋白亚类鉴定证明杂交瘤细胞所分泌的抗体均为IgG1,腹水效价在1:2^10×100~1:2^11×100之间。Western-blot分析显示,4株单抗均能特异性结合重组BovIFN-γ。ELISA试验表明,4株单抗只与融合蛋白BovIFN-γ反应,而不与非相关性蛋白Ag85B、ESAT-6-CFP-10、GM-CSF等发生反应。选取A10细胞株分泌的单克隆抗体、纯化的多克隆抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗免IgG,建立了检测BovIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法。实验结果表明,此方法检测敏感性达到2ng/mL,特异性良好,为进一步建立灵敏、特异的病原感染诊断方法奠定了基础。
关键词
牛IFN-γ
单克隆抗体
ELISA
克隆
表达
Keywords
bovine IFN-γ (
bovifn-γ
), monoclonal antibody, ELISA, cloning, expression
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
S854.43 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
被引量:
3
2
作者
李超
林祥梅
梅琳
李全芬
韩雪清
机构
中国检验检疫科学研究院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011年第1期72-76,共5页
基金
质检公益项目牛结核新型检测方法研究及疫病监测(2007GYJ018)
文摘
建立牛结核病的γ-干扰素(BovIFN-γ)免疫学检测方法。本研究利用rBovIFN-γ抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,通过淋巴细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备抗BovIFN-γ的单克隆抗体,在McAb及多克隆抗体的基础上建立双抗体夹心ELISA,并进一步优化ELISA反应条件。结果表明,获得一株能稳定分泌抗BovIFN-γMcAb的杂交瘤细胞株A12E9,分泌单克隆抗体腹水效价为1∶107,属于IgG1亚类,具有良好的特异性;所建立的双抗体夹心ELISA方法,BovIFN-γ最低检测限为40 ng/mL,与其他蛋白不发生交叉反应,表现出良好的特异性。该方法为建立牛结核病的γ-干扰素诊断方法奠定了基础。
关键词
牛γ-干扰素
单克隆抗体
双抗体夹心ELISA
Keywords
bovifn-γ
monoclonal antibody
double antibody sandwich ELISA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆
被引量:
4
3
作者
潘志明
孙辉
王运吉
机构
大连轻工业学院生物与食品工程学院
出处
《大连轻工业学院学报》
2005年第2期106-109,共4页
文摘
根据牛γ干扰素(bovIFN γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段,将RT PCR产物克隆到pMD18 T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovIFN γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体pGEX 4T 1中,将pGEX 4T 1/bovIFN γ转化到大肠杆菌中DH5α中。
关键词
大肠杆菌
Γ-干扰素基因
克隆
IFN-γ
聚合酶链式反应
限制性酶切分析
脾脏淋巴细胞
PCR产物
序列设计
cDNA
总RNA
基因序列
表达载体
基因片段
逆转录
一步法
特异性
T载体
引物
测序
Keywords
bovifn-γ
gene
clone
PMD18-T vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S828 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
牛γ干扰素基因的克隆及在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达
被引量:
2
4
作者
张红燕
许新花
张苓花
王运吉
机构
大连轻工业学院生物与食品工程学院
出处
《大连轻工业学院学报》
2004年第4期260-264,共5页
文摘
利用RT PCR扩增奶牛γ干扰素基因bovIFN γ。测序和序列分析表明,bovIFN γcDNA由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸,N 端的23个氨基酸为信号肽,含有2个潜在的N 糖基化位点。理论相对分子质量为19393.48,理论等电点为9.63。构建转化载体pPIC9K/bovIFN γ,并转化至巴斯德毕赤酵母GS115中,获得重组酵母菌GS115/bovIFN γ。
关键词
IFN-Γ
Γ干扰素
GS
基因
表达
转化载体
克隆
巴斯德毕赤酵母
信号肽
等电点
Keywords
clone
gene expression
bovifn-γ
pichia pastorisGS115
分类号
TS252.51 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
牛γ-干扰素基因的克隆及序列分析
被引量:
2
5
作者
武玉梅
郝永清
张爱荣
史冬艳
机构
内蒙古农业大学动物科学与医学学院
出处
《畜牧与饲料科学》
2009年第3期18-19,21,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30160183)
教育部博士点基金资助项目(20070129003)
文摘
根据GenBank中已公布的牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因序列设计引物,应用一步法逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以从牛外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,扩增出γ-干扰素成熟肽基因片断,并对其进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,试验所设计引物可以成功用于扩增牛γ-干扰素成熟肽基因片段,所扩增序列与GenBank中已有序列同源性达99.77%。
关键词
牛γ-干扰素
RT-PCR法
克隆
序列分析
Keywords
bovifn-γ
RT-PCR method
cloning
sequence analysis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立
李川
谭亚娣
陈颖钰
胡巧云
马艳
张桂荣
钦博
晁彦杰
陈焕春
郭爱珍
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
18
下载PDF
职称材料
2
牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
李超
林祥梅
梅琳
李全芬
韩雪清
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2011
3
下载PDF
职称材料
3
牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆
潘志明
孙辉
王运吉
《大连轻工业学院学报》
2005
4
下载PDF
职称材料
4
牛γ干扰素基因的克隆及在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达
张红燕
许新花
张苓花
王运吉
《大连轻工业学院学报》
2004
2
下载PDF
职称材料
5
牛γ-干扰素基因的克隆及序列分析
武玉梅
郝永清
张爱荣
史冬艳
《畜牧与饲料科学》
2009
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部