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HPLC Analysis of α-lactalbumin and β-lactoglobulin in Bovine Milk with C_4 and C_(18) Column 被引量:1
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作者 Kong Xiao-yu Wang Jing +4 位作者 Tang Yan-jun Li Dan-dan Zhang Nan-nan Jiang Jin-dou Liu Ning 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2012年第3期76-82,共7页
Reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method with C4 column and C18 column for analyzing β-lactoglobulin and α-lactalbumin in bovine milk was developed and the performance and characteris... Reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method with C4 column and C18 column for analyzing β-lactoglobulin and α-lactalbumin in bovine milk was developed and the performance and characteristic of two columns were compared. Shiseido Proteonavi C4 column (250 mm×4.6 mm×5μm) and Shiseido CAPCELL PAK SG 300 C18 column (250 mm× 4.6 mm×5 μm) were used in the experiment. Phase A was composed of 0.1% (V/V) trifluoroacetic acid (TFA) in ultrapure water and Phase B (organic phase) was composed of 0.1% TFA in acetonitrile. Gradient elution was taken. Flow rate was 1 mL min-1. The detection wavelength was 215 nm. The injection volume was 20 μL and the column temperature was 30℃. The results showed that linear relationship was good and recovery of α-lactalbumin and β-lactoglobulin was 86.12%-104.38%, C18 column had stronger ability to resist acid and more stable, and the method with C4 column had excellent sensitivities and good separation. 展开更多
关键词 RP-HPLC bovine milk α-lactalbumin Β-LACTOGLOBULIN C4 column C18 column
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牛18ku-bFGF基因真核表达载体构建与鉴定
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作者 陈绍红 刘华忠 +1 位作者 尚江华 乐小炎 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期142-144,共3页
将牛18ku-bFGF基因全编码序列插入质粒pEGFP-N1中,构建真核表达载体pCMV-bFGF,并用菌落PCR、酶切和测序等方法对重组质粒进行了鉴定。研究结果表明,检测结果均一致于预期,表明牛18ku-bFGF基因全编码序列已正确插入到载体中。
关键词 18ku-bfgf 真核表达载体 构建 鉴定
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牛妊娠相关糖蛋白18重组载体构建、表达条件优化和生物信息学分析
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作者 董媛 李汶柯 +3 位作者 孟桂先 刘磊 尹茉莉 王会岩 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期31-39,共9页
为了制备牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18),并预测其理化性质和功能,本试验优化密码子并合成boPAG 18基因,构建pET30a-boPAG18重组质粒。以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的蛋白质表达量为指标,优化装液量、诱导剂浓度、诱导时间和诱导... 为了制备牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18),并预测其理化性质和功能,本试验优化密码子并合成boPAG 18基因,构建pET30a-boPAG18重组质粒。以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的蛋白质表达量为指标,优化装液量、诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度条件,采用亲和层析法纯化boPAG18,SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定。预测boPAG18的疏水性、信号肽、修饰位点、结构和蛋白相互作用。结果显示,经双酶切鉴定,pET30a-boPAG18重组质粒构建成功,boPAG 18基因1143 bp,表达蛋白约38 kDa。确定最佳表达条件为在OD 600 nm值为0.6,装液量为40 mL,IPTG终浓度为0.2 g/L,37℃诱导4 h。纯化的boPAG18纯度高达98%,浓度为2.63 mg/mL。该蛋白分子式为C_(1923)H_(3007)N_(519)O_(541)S_(17),分子质量为42.6 ku,等电点为9.31,亲水性平均值为-0.041,为两性蛋白,蛋白质不稳定指数为42.41,在水中不稳定;脂肪系数为88.43,有381个氨基酸;消光系数为47370 mol-1·cm-1,半衰期为30 h。boPAG18前15个氨基酸为信号肽,无跨膜区域;有糖基化修饰位点57个,磷酸化修饰位点68个,B细胞抗原表位13个,二级结构中α-螺旋占比19.42%、β-转角占比5.77%、无规则卷曲占比44.88%、延伸链占比29.92%;有7个相互作用蛋白,可能参与了母体在妊娠期的泌乳、抗菌和神经保护等调节功能。本试验为深入研究boPAG18的结构和功能提供了数据支持。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白18(boPAG18) 重组质粒 优化 生物信息学 功能预测
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牛IL-18基因的克隆及遗传进化分析 被引量:4
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作者 张林 金宁一 +5 位作者 马鸣潇 李昌 金明兰 郑敏 金扩世 夏志平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期68-71,共4页
目的:克隆牛白细胞介素18(IL-18)全基因,并对其进行序列分析。方法:从ConA刺激培养的牛外周血淋巴细胞提取总RNA,利用巢式RT-PCR方法扩增出牛IL-18全长cDNA,将其克隆到pMD18-T载体上,测序后进行序列分析。结果:成功地克隆到了牛IL-18全... 目的:克隆牛白细胞介素18(IL-18)全基因,并对其进行序列分析。方法:从ConA刺激培养的牛外周血淋巴细胞提取总RNA,利用巢式RT-PCR方法扩增出牛IL-18全长cDNA,将其克隆到pMD18-T载体上,测序后进行序列分析。结果:成功地克隆到了牛IL-18全基因,序列分析表明,实验中所克隆到的牛IL-18序列与GeneBank所登录的牛IL-18核苷酸序列及其推导氨酸序列同源性分别是99.5%和99%。与人、猕猴、野猪、山羊属、马等核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性分别在84.9%-99.5%和74.9%-99%之间,研究结果在国内还未见报道。结论:成功地从牛外周血中克隆到了牛IL-18的基因,其全长为598 bp。 展开更多
关键词 牛白细胞介素18 克隆 序列分析
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延边黄牛白细胞介素18基因的克隆及序列分析
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作者 张立霞 高旭 +3 位作者 宋建臣 孙平杰 夏晓辉 许应天 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期55-59,共5页
本试验旨在扩增延边黄牛白细胞介素18(IL-18)全长cDNA,并对其序列进行进化分析。根据GenBank中已公布的牛IL-18cDNA序列设计1对引物,利用RT-PCR从刀豆蛋白(ConA)和植物分裂素(PHA)双重刺激36h活化的延边黄牛脾淋巴细胞中扩增出牛IL-18全... 本试验旨在扩增延边黄牛白细胞介素18(IL-18)全长cDNA,并对其序列进行进化分析。根据GenBank中已公布的牛IL-18cDNA序列设计1对引物,利用RT-PCR从刀豆蛋白(ConA)和植物分裂素(PHA)双重刺激36h活化的延边黄牛脾淋巴细胞中扩增出牛IL-18全长cDNA,进行PCR、酶切和测序鉴定,并做进化分析及二级结构预测。扩增出延边黄牛IL-18全长cDNA,大小为760bp,其中有两个氨基酸突变。进化分析结果显示,延边黄牛IL-18与牛、山羊、绵羊、马和猪的同源性较高,均大于90%,与同种群牛的同源性最高,而与原鸡的同源性最低,为51.1%。本研究确定了IL-18的种群差异,并预测了二级结构特性,为进一步研究延边黄牛IL-18的基因表达、生物活性及其作为佐剂的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛白细胞介素 RT-PCR 进化分析
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PRiME HLB固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱法快速检测牛肝中18种促生长剂类药物残留 被引量:16
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作者 王智 施宗伟 +5 位作者 郗存显 曹淑瑞 王国民 唐柏彬 郑佳 母昭德 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1219-1223,1229,共6页
建立了PRiME HLB固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)高通量快速检测牛肝中8种激素、6种β-受体激动剂及4种抗生素类促生长剂药物的方法。分别对色谱分离条件、MS/MS检测参数及样品前处理进行了优化。样品经β-葡萄糖醛苷酶/... 建立了PRiME HLB固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)高通量快速检测牛肝中8种激素、6种β-受体激动剂及4种抗生素类促生长剂药物的方法。分别对色谱分离条件、MS/MS检测参数及样品前处理进行了优化。样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酯酶酶解后,以甲醇和乙腈-甲醇(90∶10,体积比)分步提取后,直接通过PRiME HLB净化,收集流出液氮气吹干后以乙腈-水(3∶7,体积比)复溶,供UPLC-MS/MS检测。结果表明18种化合物在1.0~100.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.990;方法检出限(LOD)为0.07~0.78μg/kg,定量下限(LOQ)为0.23~2.58μg/kg。在3个加标水平下(0.5、1.0、5.0μg/kg)的回收率为67.5%~102.0%,相对标准偏差(RSD)均小于15%。该方法简单、快速、准确,适用于动物组织中多种促生长剂类药物的同时检测。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 PRIME HLB固相萃取 促生长剂 牛肝
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不同十八碳脂肪酸对奶牛乳腺上皮细胞增殖及甘油三酯合成的影响 被引量:5
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作者 崔瑞莲 王加启 +4 位作者 卜登攀 魏宏阳 南雪梅 胡菡 周凌云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1064-1070,共7页
本研究旨在探讨外源添加十八碳脂肪酸对体外培养的泌乳奶牛乳腺上皮细胞增殖及甘油三酯合成的影响。以体外培养泌乳奶牛乳腺上皮细胞为模型,添加不同浓度的硬脂酸、油酸、亚油酸及亚麻酸于38℃培养24h;采用MTT法检测细胞增殖情况,采用... 本研究旨在探讨外源添加十八碳脂肪酸对体外培养的泌乳奶牛乳腺上皮细胞增殖及甘油三酯合成的影响。以体外培养泌乳奶牛乳腺上皮细胞为模型,添加不同浓度的硬脂酸、油酸、亚油酸及亚麻酸于38℃培养24h;采用MTT法检测细胞增殖情况,采用甘油三酯检测试剂盒检测培养基中甘油三酯的含量。结果,与对照相比,200、400μmol.L-1的硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸均能显著或极显著抑制细胞的增殖(P<0.05或P<0.01);甘油三酯的检测结果显示,在0~100μmol.L-1的添加范围内,4种十八碳脂肪酸均能显著或极显著的增加培养基中甘油三酯的含量(P<0.05或P<0.01),且培养基中甘油三酯的含量随各十八碳脂肪酸添加量的增大而增大。结果提示,较高浓度(200、400μmol.L-1)的硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸能抑制细胞增殖;而在泌乳奶牛乳腺上皮细胞生长增殖不受抑制的条件下(脂肪酸添加浓度为0~100μmol.L-1),甘油三酯的合成与各十八碳脂肪酸添加剂量呈正相关。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 十八碳脂肪酸 细胞增殖 甘油三酯
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盾糙璃眼蜱传播的牛泰勒虫分离鉴定及生物学特性 被引量:4
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作者 刘爱红 关贵全 +5 位作者 刘军龙 李有全 马米玲 牛庆丽 殷宏 罗建勋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期17-20,共4页
自新疆伊宁地区黄牛体表采集的盾糙璃眼蜱饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。经血涂片检查发现,于感染后第21天,病牛血液中出现一种以圆环形与卵圆形为主的泰勒虫。经形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们为环... 自新疆伊宁地区黄牛体表采集的盾糙璃眼蜱饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。经血涂片检查发现,于感染后第21天,病牛血液中出现一种以圆环形与卵圆形为主的泰勒虫。经形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们为环形泰勒虫。将此饱血成蜱经实验室饲喂条件下,孵化出的幼虫分别饲喂于牛与家兔两种不同的动物,结果在饱血若虫阶段所有的蜱均从两种动物体表脱落,不再叮咬,饥饿成蜱又更换另一宿主,证明其是二宿主蜱。 展开更多
关键词 盾糙璃眼蜱 牛梨形虫 形态学 18SrRNA基因 生物学特性
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金黄色葡萄球菌聚集因子A基因与牛IL-18基因真核共表达载体的构建与表达 被引量:1
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作者 陈智 刘少宁 +4 位作者 曹丙蕾 孔娜 李宏梅 胡敬东 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期766-769,788,共5页
参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE... 参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE/ClfA/BoIL-18。在Cellfectin Reagent的作用下转染293T细胞,用间接免疫荧光试验检测ClfA和BoIl-18蛋白。结果表明,重组质粒pBUDCE/ClfA/BoIL-18在293T细胞中同时表达了ClfA和BoIL-18蛋白。该重组载体的成功构建为研究ClfA和BoIL-18重组共表达产物的生物学活性及其防治奶牛金黄色葡萄球菌性乳腺炎的作用奠定基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 乳腺炎 聚集因子A 牛白介素18 真核表达
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焦磷酸测序和HRM法对BLAD CD18基因多态性的检测
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作者 周莉 贾广乐 +1 位作者 李桂兰 张映 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期315-316,共2页
奶牛白细胞黏附缺陷症(bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD)是一种常染色体隐性致死性的遗传性疾病,由CD18基因单碱基突变(A→G)引起,导致白细胞表面的β2整合素表达明显减少或缺乏而引起临床发病。由于BLAD有害基因多以杂合的... 奶牛白细胞黏附缺陷症(bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD)是一种常染色体隐性致死性的遗传性疾病,由CD18基因单碱基突变(A→G)引起,导致白细胞表面的β2整合素表达明显减少或缺乏而引起临床发病。由于BLAD有害基因多以杂合的状态存在,携带者并不发病,加之对此病认识和重视不够,在进口活牛时不可避免地引入潜在的BLAD携带者。该病一旦被发现时,其已经在畜群中进行了长时期的传播,严重影响奶牛的生产性能。 展开更多
关键词 临床发病 牛时 BLAD CD18 HRM 携带者 bovine 焦磷酸测序 基因多态性 常染色体隐性 遗传性疾病
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牛瑟氏泰勒虫不同靶基因PCR检测方法的比较 被引量:4
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作者 金超 贾立军 +3 位作者 王妍 王娜 莫添添 张守发 《畜牧与兽医》 北大核心 2011年第2期1-3,共3页
为筛选出检测牛瑟氏泰勒虫更为特异、敏感的PCR方法,本试验以牛瑟氏泰勒虫p23和p33基因、HSP70基因及18S rRNA基因为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,4种靶基因引物对牛瑟氏泰勒虫... 为筛选出检测牛瑟氏泰勒虫更为特异、敏感的PCR方法,本试验以牛瑟氏泰勒虫p23和p33基因、HSP70基因及18S rRNA基因为靶基因进行PCR检测,并从其敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,4种靶基因引物对牛瑟氏泰勒虫的检测均有较高的特异性,当牛瑟氏泰勒虫基因组DNA浓度为127 ng/μL时,p23、p33、HSP70及18S rRNA4种基因的最小检测量分别为1×105、1×105、1×104和1×106copies/μL;检测临床样本阳性检出率分别为30.19%(16/53)、39.62%(21/53)、47.17%(25/53)和54.72%(29/53)。表明以18SrRNA基因为靶基因的PCR方法从敏感性和临床检出率上明显优于其他3种基因。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 p23 P33 HSP70 18S RRNA PCR
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奶牛瘤胃上皮细胞分离培养与鉴定 被引量:5
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作者 姜茂成 詹康 +2 位作者 严康 赵倩明 赵国琦 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期80-86,共7页
在体外分离培养奶牛瘤胃上皮细胞,可为奶牛瘤胃生理功能和吸收机制研究和永生化奶牛瘤胃上皮细胞奠定基础。通过胰蛋白酶消化法从奶牛瘤胃组织中分离出瘤胃上皮细胞,并通过免疫细胞化学的方法检测细胞角蛋白,CCK-8检测细胞生长曲线,β-... 在体外分离培养奶牛瘤胃上皮细胞,可为奶牛瘤胃生理功能和吸收机制研究和永生化奶牛瘤胃上皮细胞奠定基础。通过胰蛋白酶消化法从奶牛瘤胃组织中分离出瘤胃上皮细胞,并通过免疫细胞化学的方法检测细胞角蛋白,CCK-8检测细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞的衰老以及细胞染色体核型分析来鉴定瘤胃上皮细胞。结果表明:1)利用胰蛋白酶消化法可以稳定的培养出瘤胃上皮细胞并且能够在体外传代大约5代;2)通过在显微镜下进行细胞形态的观察呈单层"岛屿状";3)在荧光显微镜下细胞角蛋白抗原能够发出绿色荧光;4)奶牛瘤胃上皮细胞传至第5代,β-半乳糖苷酶被染成蓝色,同时,细胞出现衰老和停滞生长;5)染色体核型分析表明奶牛瘤胃上皮细胞的染色体数为60条。研究发现通过酶消化奶牛瘤胃组织能够获得奶牛瘤胃上皮细胞,但只能传至5代。 展开更多
关键词 奶牛瘤胃上皮细胞 永生化 细胞角蛋白18 染色体核型
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