银杏内酯B对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨银杏内酯B(GB)对牛主动脉平滑肌细胞 (SMC)增殖的影响及可能机制。方法 细胞的增殖由3H 胸腺嘧啶核苷掺入试验确定 ,应用流式细胞术测定细胞周期 ,用MTT法和乳酸脱氢酶活性检测观察细胞代谢的变化。结果 无论是否用血管紧张素II诱导 ,GB与银杏内酯A和B的混合物均呈浓度依赖性地抑制SMC的增殖 ,其机制与阻止细胞进入有丝分裂期有关。结论 GB可抑制动脉壁SMC的增殖 。

甘糖酯对培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖的影响

应用牛脑微血管平滑肌细胞(BCMSMCs)体外培养技术,观察了酸性多糖药物甘糖酯(PGMS)对10％小牛血清(FCS)、白细胞介素1(IL-1)致BCMSMCs过度增殖的影响。将培养的5～8代细胞接种于96孔板,正常组加入含10％FCS的MEM培养液(或含有50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),给药组分别加入含有PGMS0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mg/ml浓度的10％FCS培养液(或50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),以结晶紫染色,MTT比色,测定72h后细胞生长情况。结果显示,与10％FCS组和IL-1组比较,PGMS组BCMSMCs的增殖受到明显抑制(P<0.01),提示PGMS对10％FCS和IL-1引起的BCMSMCs异常增殖具有明显的抑制作用。

TGF-β对动脉钙化的影响

目的 :探讨转化生长因子 - β(TGF- β)在动脉钙化中的作用。方法 :建立体外动脉钙化的模型 ,培养钙化血管平滑肌细胞 ,在培养液中加入 TGF- β,观察钙沉积及细胞碱性磷酸酶的变化 ,同时观察钙化过程中骨间质蛋白骨钙素分泌情况。结果 :1μg/ L 的 TGF- β作用 10 d后 ,钙化细胞的钙沉积为 1.95± 0 .5 6 μm ol/ L,较钙化对照组 (1.71±0 .0 5 μm ol/ L)增加了 14.4% ,细胞碱性磷酸酶的活性为 5 46± 118IU/ L,比钙化对照组 (16 5± 6 3IU/ L)增加了2 95 % ,这种作用在第 8天达到高峰 ,以后略有下降。在钙化加重的同时 ,骨钙素分泌亦明显增加 ,达 0 .37± 0 .0 4ng/ L;而 TGF- β对非钙化的细胞无上述作用。结论 :1μg/ L 的 TGF- β可以促进钙化血管平滑肌细胞的钙化过程。

甲壳胺对AngⅡ所诱导的乳牛基底动脉平滑肌增殖的影响

本文采用血管紧张素 (Ang )所诱导的乳牛基底动脉平滑肌细胞 (BAVSMCS)增殖模型 ,以 MTT法观察甲壳胺对 BAVSMCS增殖的影响 ,[3 H]Td R掺入法观察甲壳胺对乳牛基底动脉平滑肌细胞 DNA的合成 ,还观察了甲壳胺对乳牛基底动脉平滑肌细胞总蛋白的影响。结果表明 :甲壳胺对 Ang 所诱导的BAVSMCS增殖有浓度和时间依赖性抑制作用 ;可浓度依赖性抑制 Ang 所诱导 BAVSMCS的 DNA合成增加作用 ;还可抑制 Ang 所诱导 BAVSMCS蛋白合成增多作用。提示甲壳胺可抑制 Ang 所诱导的 BAVSM-CS增殖作用。

高磷对牛血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素影响的实验研究

目的:观察不同磷浓度(Pi)对培养的牛主动脉血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素水平的直接影响,并探讨高磷血症诱导血管钙化的机制。方法:用不同Pi的培养液体外培养牛主动脉平滑肌细胞,用甲o-酚酞络合酮方法测定钙含量,放射免疫法测定培养上清液中骨钙素的浓度,BCA(Bicinchoninicacid)法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙沉积、骨钙素的浓度。结果:与相当于正常血磷(1.5mmol/L)的培养基中钙沉积相比,在相当于高磷血症(2.0mmol/L)的培养基中,钙沉积显著增加犤培养6天,Pi2.0mmol/L组为(77.19±11.69)μg/mg蛋白;Pi1.5mmol/L组为(25.77±1.75)μg/mg蛋白,P<0.01犦,呈时间和剂量依赖性。vonKossa钙染色,Pi2.0mmol/L组培养的平滑肌细胞中见大量的黑色颗粒沉积,而Pi1.5mmol/L组中很少。同样,与Pi1.5mmol/L组相比,Pi2.0mmol/L组培养上清液中骨钙素的水平明显增高犤Pi2.0mmol/L组为(1.50×10-2±2.60×10-3)ng/μg蛋白,Pi1.5mmol/L组为(2.98×10-3±8.38×10-4)ng/μg蛋白,P<0.001犦。结论:高磷可直接刺激平滑肌细胞的钙沉积和骨钙素产生增加,促进血管钙化的发生。高磷血症是血管钙化发生的独立因素。

海洋贝类提取物对血管平滑肌细胞增殖的影响

采用 2 0 %胎牛血清 (FBS)、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)所诱导的大鼠 VSMCs增殖模型 ,观察了海洋贝类提取物 (ESs)对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的影响。将培养的 5～ 8代细胞接种于 96孔板 ,除正常组加入含 0 .4 % FBS的 M199培养液外 ,其他组均加入含 2 0 % FBS培养液 (或含 5 0 ng/ ml b FGF的 0 .4 % FBS培养液 ) ,同时给药组分别加入含有 2 5、5 0、10 0 μl/ ml浓度的 ESs,孵育 4 8h后 ,以细胞计数、结晶紫染色及 MTT比色法测定 VSMCs生长情况。结果表明 ,与模型组比较 ,ESs各剂量组 VSMCs的增殖受到明显抑制 (P<0 .0 5、P<0 .0 1)。ESs对 2 0 % FBS和 b FGF所致的 VSMCs增殖具有明显抑制作用 。

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向平滑肌样细胞分化过程中myocardin的表达

目地探讨血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化为平滑肌细胞的可行性及myocardin在此过程中的表达变化。方法采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞,血小板源性生长因子BB(50μg/L)联合高浓度胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞,分别于诱导前,及诱导4d和8d后用免疫细胞化学法检测细胞平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin的表达。结果免疫组织化学显示,诱导前及诱导4d和8d时,平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin三种蛋白的表达逐渐增强,平均灰度值逐渐降低,不同时间点之间比较差异有显著性(P<0.05)。结论血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清可有效诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化。Myocardin在此分化过程中可能起了重要作用。