牛卵巢黄体状况与腔前卵泡采集数量的关系

:根据牛离体卵巢黄体的不同状况 ,将 31枚卵巢分为 5种类型 ,并采用机械方法分离腔前卵泡 ,观察不同黄体状况卵巢与腔前卵泡采集数量的关系。结果表明 ,火山口型、圆锥型和蘑菇型 3种大黄体的卵巢腔前卵泡采集量多 ;扁平片状和表面无黄体型卵巢腔前卵泡采集量较少。具有黄体状况的卵巢初级卵泡 ( Pm)采集数量多于无黄体类型卵巢 ;原始卵泡 ( Pf)以 3种黄体较大的卵巢采集数量最多 ;次级卵泡 ( Sc)则以黄体为火山口型卵巢为最多。说明卵巢黄体状况不同 ,其腔前卵泡采集数量有所不同。

水牛腔前卵泡的分离方法

为确定水牛腔前卵泡的有效分离方法 ,作者取用来自屠宰场 31头水牛的 6 1个卵巢 ,先用剪刀去掉髓质部 ,然后分别用梳刮法、剪碎法和显微分离法分离回收腔前卵泡。结果发现 ,使用梳刮法时 ,平均每个水牛卵巢回收所得的腔前卵泡数 (15 2 35± 4 4 81)明显高于剪碎法 (32 6 2± 14 81)和显微分离法 (8 95± 3 4 4 ) ,且其平均每个卵巢的处理时间 (39 0 5± 4 2 7min)明显少于剪碎法 (4 6 4 3± 4 15min)和显微分离法 (4 4 5 5± 7 82min)。梳刮法分离所得的腔前卵泡中 ,以原始卵泡最多 (占 4 1 2 5 % ) ,其次为初级卵泡 (占 38 79% ) ,而次级卵泡最少 (仅占 19 95 % )。用梳刮法获得的腔前卵泡在体外培养 72h后 ,存活率为 5 6 38% ,与剪碎法(4 8 91% )及显微分离法 (5 9 34% )没有显著差异。用梳刮法处理 10头黄牛的 2 0个卵巢 ,平均每个卵巢可分离获得 1195 2 0± 6 85 0 0个腔前卵泡 ,明显多于水牛的 15 2 35± 4 4 81个腔前卵泡。由此可见 。

卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系

用简单机械分离法处理了 12 7枚成年牛卵巢。结果显示 ,在外观正常的卵巢中 ,腔前卵泡的采集数量与卵巢的大小成正相关关系 ,而有无黄体与腔前卵泡的采集数量无明显关系 ;卵巢上不同大小的可见卵泡的数量和分布与腔前卵泡的采集量有关。卵巢上可见卵泡分布均衡 ,大、中、小卵泡均有分布 ,小卵泡不过多以及无大卵泡 ,但中、小卵泡较多的 ,无论是否有黄体存在 ,均可获得较多腔前卵泡。而卵巢表面脂肪化、卵巢充血、有弥散性片状黄体及幼稚卵巢的 。

猪腔前卵泡机械分离研究

本研究以分离到的卵泡数量、分离时间和卵泡在体外培养3 d后的存活率为指标比较了两种机械方法分离猪腔前卵泡的效果。结果表明:用针刮法分离猪腔前卵泡的数量(Φ<50μm:203600±59000;50μm≤Φ≤150μm:29.40±10.34;Φ>150μm:9.30±3.29)极显著(P<0.01)高于剪碎法(Φ<50μm:18900±12000;50μm≤Φ≤150μm:13.95±3.70;Φ>150μm:4.95±1.61),而且针刮法16.16±1.43 min分离时间比剪碎法(20.30±1.48)min短,(P<0.01)。体外培养3 d后,腔前卵泡存活率在两种方法之间没有明显差异。说明应用针刮法分离猪腔前卵泡能有效保护卵母细胞和颗粒细胞的正常形态以及基膜的完整性,从而使分离到的猪腔前卵泡维持正常的生理活性。

牛卵巢腔前卵泡的机械分离试验

机械方法处理胎牛、犊牛和成年牛卵巢可以获得大量的腔前卵泡。胎牛卵巢用眼科手术剪刀剪碎（Ｍ１）或用组织切碎机切碎（Ｍ２），犊牛和成年牛卵巢用组织切碎机切碎，经悬浮吹打和过滤，平均每只卵巢可获得腔前卵泡胎牛为３２８２（Ｍ１）和５６８８（Ｍ２），犊牛为２１００，成年牛为３５２．在所分离的胎牛和犊牛卵巢卵泡中原始卵泡和初级卵泡占绝大部分，而成年牛卵巢卵泡主要是初级卵泡和次级卵泡。不论是胎牛、犊牛或成年牛。

牛腔前卵泡的简易机械分离方法

采用两种机械法分离牛腔前卵泡。方法一 (M -1) ,皮肤移植刀切割、剪碎、过滤镜下直接捡卵法。方法二 (M -2 ) ,皮质片剪碎、离心、悬浮、过滤镜下捡卵法。M -1平均每卵巢采卵数为 46 9个± 18 2个 ,M -2为 6 8 4个± 12 5个 ;处理时间M -1为 2 5 4min± 6 7min ,M -2为 46 3min± 16 8min ,两种方法采集腔前卵泡数量及处理时间均存在显著差异。平均每小时采集卵泡数分别为 99 5和 87 2个 ,M -1多于M -2。两种方法获得腔前卵泡大小分布规律也有明显差异 ,M -1采集腔前卵泡直径为 6 0～ 15 0 μm ,绝大部分是次级卵泡 ,而M -2获取腔前卵泡则偏小。总的看来 ,M -1处理时间短 ,回收效率高 ,方法简便 ,且分离卵泡直径较大 ,适于体外培养 ,是机械分离牛腔前卵泡的一种理想方法。

二种分离液对牛腔前卵泡卵母细胞体外培养效果观察

本实验通过２种无血清分离液，采用机械方法分离牛腔前卵泡卵母细胞，体外培养７ｄ，观察其体外培养效果结果表明，Ｍ１９９Ｈｅｐｅｓ组腔前卵泡卵母细胞发育率为６３．４％，ＰＢＳ组为３０．３％，二者差异极显著（Ｐ＜０，０１）；第７ｄ 卵泡平均增长直径以Ｍ１９９Ｈ＿组好于ＰＢＳ组，分别为（２８． ７± ２１． ２）μ和（２１． ６± ８． ０）μｍ，次级卵泡（Ｓｃ）增长速率大于初级卵泡（Ｐｍ）

水牛胎牛、青年牛和成年牛腔前卵泡的分离及培养

本研究采用梳刮的机械法分离水牛胎牛、青年牛和成年牛腔前卵泡,并分别进行培养。每个胎牛、青年牛和成年牛的卵巢分别获得943.43±143.13、249.50±40.11和128.50±19.99个腔前卵泡,从胎牛卵巢获得的腔前卵泡,其数量明显多于青年牛和成年牛(P<0.01)。培养72h后青年牛和成年牛的腔前卵泡存活率分别为52.67%、52.03%,而胎牛仅有34.69%的腔前卵泡能够存活,其数量明显低于青年牛和成年牛(P<0.05)。结果表明,青年牛卵巢分离得到的腔前卵泡数量较多,且培养成活率高,是进行水牛腔前卵泡分离培养等研究的理想试验材料。

绵羊卵巢腔前卵泡体外机械分离与采集的一种新方法

这是一种新的机械分离卡拉库尔羊卵巢腔前卵泡的方法:将Ф3mm带有钢丝的电线一端去掉胶皮,暴露内部钢丝并将其压成扁形,常规灭菌处理。用带胶套的镊子将卵巢夹住,用钢丝刮擦其表面后用PBS溶液冲洗两次,然后收集冲洗液;将刮过的卵巢置于培养液中用组织剪剪成不同大小的碎片,用网筛过滤,收集滤液,滤液和冲洗液在37℃培养箱中静置15分钟后,在90倍以上体视显微镜下镜检检卵。这种方法有效地提高了检卵率,每小时可达57.11枚±4.32枚(n=5小时)。

简易机械法分离牛腔前卵泡的超微结构研究

电镜研究发现,简易机械法分离得到的腔前卵泡有1-3层颗粒细胞,卵泡外层为颗粒细胞,包有一层厚的糖蛋白基底膜,外无卵泡膜,其颗粒细胞及卵母细胞超微结构特征与卵巢皮质片中的腔前卵泡一致。卵母细胞为球形或卵圆形,有一大而偏离中心的核,核内有一显著核仁,各细胞器均匀分布于细胞质中,卵母细胞中有大量线粒体及其它细胞器遍布卵胞质,卵母细胞质膜上有突起将卵母细胞表面的微绒毛与邻近的颗粒细胞相连。超微结构研究结果表明,本法获得的牛腔前卵泡没有受到分离过程的机械伤害。

分离方法及卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响

【目的】探讨影响猪腔前卵泡分离的因素,建立有效分离猪腔前卵泡的方法。【方法】以猪次级卵泡为对象,比较4种分离方法和11种卵巢状况对猪次级卵泡采集数量的影响。【结果】针刮法分离猪次级卵泡的数量（（14.37±2.29）枚）极显著高于剪碎法（（5.62±2.67）枚）、显微分离法（（8.28±2.53）枚）和酶消化-机械分离法（（8.86±1.91）枚）,而且针刮法的处理时间（（15.29±1.82）min）较其他3种方法短（（20.51±1.99）min（、59.24±4.59）min（、40.59±2.67）min）,分离得到的次级卵泡体外培养3 d后,存活率在针刮法（53.29%）、剪碎法（51.08%）、显微分离法（49.87%）之间无明显差异,但均极显著高于酶消化-机械分离法（28.31%）。从不同质量卵巢中采集的次级卵泡数量有较大差异,质量为〉3.0～≤8.0 g（（15.36±2.32）枚）的卵巢得到的次级卵泡数量较≤3.0g（（6.31±2.19）枚）和〉8.0 g（（7.83±2.71）枚）多。卵巢有无黄体与次级卵泡的采集数量无明显关系;卵巢上不同大小的可见卵泡数量和分布与腔前卵泡的采集数量相关,卵巢上可见卵泡均衡分布,中、小卵泡较多而无大卵泡,无论黄体存在与否,均可获得较多次级卵泡。【结论】针刮法是分离猪次级卵泡的一种有效方法;在分离卵泡时,要选择质量在3.0～8.0 g,且有可见中、小卵泡均衡分布而无大卵泡的卵巢。

新疆卡拉库尔羊腔前卵泡体外机械分离与采集的一种新方法

采用一种新方法机械分离卡拉库尔羊卵巢的腔前卵泡:用Φ3mm的钢丝内芯刮擦卵巢表面,用PBS溶液冲洗,收集冲洗液;将刮过的卵巢用组织剪剪碎,经不同直径的网筛过滤,在90倍以上体视显微镜下镜检检卵。这种方法提高了检卵率,每小时可达57.11±4.05枚(n=5小时)。