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牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析
被引量:
2
1
作者
董媛
于鸿绪
+4 位作者
陈国良
鲍东博
崔嘉芮
刘磊
王会岩
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022年第4期1233-1243,共11页
【目的】扩增牛妊娠相关蛋白19(bovine pregnancy-associated glycoprotein 19,BoPAG19)基因,构建真核表达载体,并检测其在HEK-293F细胞中的表达。【方法】根据BoPAG19基因序列(GenBank登录号:NM_176628)体外合成BoPAG19基因,PCR扩增目...
【目的】扩增牛妊娠相关蛋白19(bovine pregnancy-associated glycoprotein 19,BoPAG19)基因,构建真核表达载体,并检测其在HEK-293F细胞中的表达。【方法】根据BoPAG19基因序列(GenBank登录号:NM_176628)体外合成BoPAG19基因,PCR扩增目的基因,经双酶切后与真核表达载体pcMV3连接,构建pcMV3-BoPAG19重组质粒。采用Lipofectamine■2000将重组质粒瞬时转染至HEK-293F细胞,SDS-PAGE法鉴定细胞培养上清中BoPAG19蛋白的表达,采用亲和层析法纯化BoPAG19蛋白。通过在线工具分析BoPAG19蛋白的疏水性、跨膜区域、信号肽、B细胞抗原、二级结构、三级结构和蛋白相互作用。【结果】成功构建pcMV3-BoPAG19重组载体,目的基因长约1200 bp,表达蛋白约60 ku。生物信息学分析显示,BoPAG19蛋白编码380个氨基酸,其中含量最高的是丝氨酸(Ser),占比9.2%,含量最低的是色氨酸(Trp),占比1.6%;分子式为C_(1937)H_(3028)N_(524)O_(532)S_(15),理论分子质量为41.8 ku,等电点为9.62,不稳定指数为40.75,在水中不稳定,脂肪系数为91.53,消光系数为52370 mol^(-1)·cm^(-1),具有水溶性;含有1个信号肽,无跨膜区域,有6个糖基化位点和11个B细胞表位;二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链占比分别为18.95%、6.32%、42.37%和32.37%,三级结构预测结果与二级结构一致。与BoPAG19互作的蛋白包括APLP2和APP,可能参与了妊娠期的神经调节。【结论】试验成功表达、纯化了BoPAG19蛋白,并分析了BoPAG19的生物信息学特征,为BoPAG19蛋白的结构和功能研究,以及BoPAG19诊断奠定基础。
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关键词
牛妊娠相关蛋白
19
(
bopag
19
)
真核表达
生物信息学
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职称材料
题名
牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析
被引量:
2
1
作者
董媛
于鸿绪
陈国良
鲍东博
崔嘉芮
刘磊
王会岩
机构
吉林医药学院检验学院
动物疫病预防控制中心
吉林农业大学生命科学学院
吉林医药学院抗体工程科技协同创新中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022年第4期1233-1243,共11页
基金
吉林省教育厅(JJKH20210501KJ)
吉林省卫健委(2020Q029)
+1 种基金
吉林省大学生创新创业训练计划(202013706060)
吉林省科技厅技术攻关项目(20190301088NY)。
文摘
【目的】扩增牛妊娠相关蛋白19(bovine pregnancy-associated glycoprotein 19,BoPAG19)基因,构建真核表达载体,并检测其在HEK-293F细胞中的表达。【方法】根据BoPAG19基因序列(GenBank登录号:NM_176628)体外合成BoPAG19基因,PCR扩增目的基因,经双酶切后与真核表达载体pcMV3连接,构建pcMV3-BoPAG19重组质粒。采用Lipofectamine■2000将重组质粒瞬时转染至HEK-293F细胞,SDS-PAGE法鉴定细胞培养上清中BoPAG19蛋白的表达,采用亲和层析法纯化BoPAG19蛋白。通过在线工具分析BoPAG19蛋白的疏水性、跨膜区域、信号肽、B细胞抗原、二级结构、三级结构和蛋白相互作用。【结果】成功构建pcMV3-BoPAG19重组载体,目的基因长约1200 bp,表达蛋白约60 ku。生物信息学分析显示,BoPAG19蛋白编码380个氨基酸,其中含量最高的是丝氨酸(Ser),占比9.2%,含量最低的是色氨酸(Trp),占比1.6%;分子式为C_(1937)H_(3028)N_(524)O_(532)S_(15),理论分子质量为41.8 ku,等电点为9.62,不稳定指数为40.75,在水中不稳定,脂肪系数为91.53,消光系数为52370 mol^(-1)·cm^(-1),具有水溶性;含有1个信号肽,无跨膜区域,有6个糖基化位点和11个B细胞表位;二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链占比分别为18.95%、6.32%、42.37%和32.37%,三级结构预测结果与二级结构一致。与BoPAG19互作的蛋白包括APLP2和APP,可能参与了妊娠期的神经调节。【结论】试验成功表达、纯化了BoPAG19蛋白,并分析了BoPAG19的生物信息学特征,为BoPAG19蛋白的结构和功能研究,以及BoPAG19诊断奠定基础。
关键词
牛妊娠相关蛋白
19
(
bopag
19
)
真核表达
生物信息学
Keywords
bovine
pregnancy-associated
glycoprotein
19
(
bopag
19
)
eukaryotic expression
bioinformatics
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析
董媛
于鸿绪
陈国良
鲍东博
崔嘉芮
刘磊
王会岩
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2022
2
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