进出口动物源性产品中牛羊成分的检测方法

加强对进出口动物源性产品,特别是反刍动物源性产品的严格管理是防止疯牛病传播的有效途径。本文详述了饲料、保健品和化妆品等动物源性产品中动物源性成分,特别是牛羊源性成分的检测方法的研究现状,对显微检测、PCR检测、免疫学检测和近红外检测等目前用于检测动物源性成分的主要方法进行了评述,并对进行该类项目检测时检测方法的使用原则提出了建议。

保健品中牛羊源性成分的PCR检测

本文根据牛、羊线粒体mtDNA中的保守序列,设计了针对牛羊源性成分检测的特异性扩增引物,通过聚合酶链反应技术 (Polymerase Chain Reaction, PCR)建立了保健品中牛羊源性成分的快速检测方法。通过内切酶DpnII和SspI可分别对牛羊成分的扩增结果进行进一步验证,该方法对牛源性成分的检测低限为0.05%,对山羊和绵羊源性成分的检测低限分别为0.005%和和0.5%,可作为保健品中牛羊源性成分检测有效方法,也可作为保健品及动物源性产品中成分真伪鉴别的准确、可靠方法。

动物产品中牛、羊源性成分多重PCR检测方法的建立

以肉骨粉、鱼粉、猪肉干和鱼肉干为研究对象,异硫氰酸胍法提取总DNA,18S rDNA片段的扩增结果表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质。应用梯度PCR技术对牛、羊源性成分检测的退火温度进行了优化,在单一PCR检测技术的基础上分别进行了18S rDNA片段和牛、羊源性成分的多重PCR分析,得到了预期的结果。试验表明,本文建立的多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,对动物产品牛、羊源性成分检测具有重要意义。

动物油脂中DNA的提取及牛、羊源性成分的PCR检测

用异硫氰酸胍法提取鱼油、加入牛肉DNA的鱼油、加入山羊肉DNA的鱼油和牛油中的DNA。18SrDNA片段以及牛、羊源性成分的PCR扩增结果表明,建立的动物油脂DNA提取方法是可行的。用建立的DNA提取方法提取3份送检鱼油的DNA,牛、羊源性成分的PCR检测结果均为阴性。

实时荧光PCR技术检测肉骨粉中牛羊源性成分的方法

建立了从肉骨粉中提取DNA的稳定、简便易操作的方法。根据牛、羊线粒体DNA基因片段设计特异性引物和TaqMan探针,建立了实时荧光PCR技术检测肉骨粉中牛、羊源性成分的快速、特异、敏感的方法。

快速、高效的羊绒羊毛织品DNA提取方法的建立

目的:建立一种快速、高效的羊绒羊毛纺织品DNA提取的方法。方法:采用chelex-100法的3种处理、试剂盒法分别提取羊绒羊毛织品的DNA,用18S rDNA片段、山羊和绵羊源性成分PCR扩增结果来比较提取效果。结果:试剂盒法提取DNA的效果优于chelex-100法,整个提取过程约需2h。9种供试材料均提取到DNA,且含有山羊和/或绵羊源性成分,与显微镜观察结果的符合率为100%。结论:建立的试剂盒法是一种快速、高效的适用于羊绒羊毛织品DNA提取的方法,为应用分子生物学方法鉴别山羊绒和绵羊毛奠定了基础。

动物产品及饲料中牛源和羊源性成分PCR检测方法的优化

以牛肉、山羊肉为试验材料,对动物产品及饲料中牛源、羊源性成分 PCR检测方法进行了优化。结果,牛源性成分的最低检测限可达 10μg/g,羊源性成分的最低检测限达 0. 1μg/g。PCR检测和酶切鉴定结果表明,在水平测试的混合饲料粉中可检出牛源、羊源性成分。

二重实时荧光PCR方法检测山羊和绵羊源性成分

本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cytb基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针。通过对引物和探针浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法。所建方法灵敏性高、特异性好,对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测,结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分。实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮等动物源性产品的山羊和绵羊源性成分鉴定。

应用多重PCR同时检测牛、羊源性成分

我们选择了3对引物A,B,C。A可扩增大多数脊椎动物(哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类和鱼类)细胞色素b基因上一个371bp的区段,B可扩增位于牛mtDNAD-loop区段内的一个274bp的区段,C可扩增羊mtDNA基因上一个199bp的区段。由于3对引物扩增的产物分别相差约100bp左右,可通过琼脂糖凝胶电泳分离来并观察结果,建立了基于内对照的同时检测牛、羊源性成分的三重PCR方法。

荧光定量PCR方法鉴别牛、羊奶粉

建立了应用荧光定量PCR技术鉴别牛、羊奶粉的方法。本方法无需进行奶粉的DNA提取,奶粉经核酸释放剂处理后可直接进行荧光定量PCR检测,并且该方法可对奶粉中牛、羊源性成分进行鉴别。

陕西省反刍动物饲料产品和动物源性饲料中牛羊源成分检测

实时PCR对陕西省7个地市生产、经营和使用的反刍动物饲料产品和动物源性饲料产品(原料)进行了牛羊源成分检测调查。结果表明,235家反刍动物养殖场(户)合格率为98.72%,53家饲料生产企业合格率为96.22%,40家饲料经营企业合格率为100%;合计抽查328家饲料企业(场、户),总合格率为98.47%。400批次反刍动物饲料产品和动物源性饲料产品合格率为98.75%。其中反刍动物饲料产品364批次,合格率为98.63%;动物源性饲料产品36批次,合格率为100%。而其中不合格的5批次产品中2批次样品牛羊源性成分均检出,3批次样品仅检出牛源性成分。

运用SYBR Green Ⅰ熔解曲线法检测饲料中牛、羊源性成分的研究

试验旨在建立SYBR GreenⅠ熔解曲线法对饲料中牛、羊源成分进行检测,以SYBR GreenⅠ为荧光染料,通过优化PCR反应体系,提高了检测灵敏度。在随机抽检的145批样品中,与国标法(GB/T20190-2006)相比,SYBR GreenⅠ熔解曲线法的准确性达到了100%,此方法可作为饲料中牛羊源成分检测的一种方法。

应用两种PCR方法检测饲料中牛、羊源性成分

对普通PCR和实时(realtime)PCR两种方法在饲料中牛、羊源性成分检测中的应用进行了比较。分别设计并合成相应的引物和探针,对饲料中的牛、羊源性成分进行检测。结果表明,用普通PCR最低可以从饲料中检出0.1%的牛、羊源性成分,realtime PCR最低可以从饲料中检出0.01%的牛、羊源性成分。

牛海绵状脑病与牛羊源成分的检测

疯牛病不仅给全球畜牧经济造成重大损失,而且还严重危害着人类的健康,而造成疯牛病传播的主要原因则是由于携带有致病因子的牛羊肉骨粉饲料及牛羊制品在各国之间的贸易往来。因而加强对进口饲料产品中牛羊源成分的检测是防止疯牛病流行的重要措施。本文就疯牛病的流行病学、病原学、病理变化与诊断以及牛羊源成分检测方法的研究进展作以简述。

多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分

根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测,数据显示两者检测结果符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本试验方法不需电泳、酶切和测序,即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分,检测效率提高近3倍;灵敏度更高,比国标方法灵敏10倍;适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。

动物产品及饲料中牛源和羊源性成分三重荧光PCR检测方法的建立

为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成3种动物源性成分的检测。用该方法对16种不同源性的动物DNA进行检测,结果表明能特异地鉴别检测出牛、山羊和绵羊源性成分,且敏感性比现行国标PCR法高100倍。该方法适用于饲料、肉制品、奶制品等动物源性产品的检测。