嗜热脂肪芽孢杆菌pgiB基因上游452bp序列的功能分析

用化学诱变剂N 甲基 N′ 硝基N 亚硝基胍进行随机诱变 ,获得了穿梭启动子探测质粒pPGV5的温度抗性突变型pPGV5 (tr6 5 ) ,序列分析发现质粒上卡那霉素核苷转移酶基因kan的 +2 3 8位碱基发生了G→T的单点突变。以来自嗜热脂肪芽孢杆菌FDTP 3菌株的耐热邻苯二酚 2 ,3双加氧酶基因pheB作为报道基因 ,构建了转录融合质粒pPGVPB45 2 ,用高压电穿孔法将其转化嗜热脂肪芽孢杆菌 ,通过报道蛋白活性的分析 ,证明了嗜热脂肪芽孢杆菌T5 2 1菌株的 6 磷酸葡萄糖异构酶同工酶基因pgiB上游含启动子样序列的 42

土壤中弓形虫半套式PCR检测方法的建立

根据NCBI上公布的弓形虫RH株的529bp基因序列(登录号:AF146527)用Primer Premier 5.0设计3条特异性引物TX1、TX2和TX3,建立土壤中弓形虫的半套式PCR检测方法,并将引物TX1与TX3扩增产物克隆到pMD18-T载体上进行测序.结果表明:该方法能扩增出约350bp的片段,TX1与TX3扩增片段约520bp,克隆到pMD18-T载体上的521bp片段与所选取的弓形虫RH株的目的基因序列相似性100%.该检测方法特异性强,以犬新孢子虫、牛微小隐孢子虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、牛链球菌、猪链球菌、蒙氏肠球菌基因组为模板均未扩增出条带;灵敏性高,检测极限为20fg弓形虫DNA;在22份土壤样品中检出3份阳性样品.