维生素E和辅酶Q10对大鼠内耳组织线粒体DNA 4834 bp缺失突变的预防作用

目的 研究维生素E、辅酶Q10对大鼠线粒体DNA 4 834缺失突变的预防作用。方法Wistar大鼠 4 6只 ,采用抽笼法随机分为 3组 ,实验组 (A组 ,18只 )阿霉素 1mg/kg腹腔注射 ,每周 2次 ,共 3个月 ,同时给予维生素E 5 0mg/kg和辅酶Q10 10mg/kg灌胃 ,每天 1次 ;生理盐水对照组 (B组 ,18只 )在给予阿霉素的同时予以生理盐水灌胃 ;空白对照组 (C组 ,10只 )仅给予生理盐水灌胃。提取内耳组织总DNA ,利用巢氏聚合酶链反应技术检测内耳组织线粒体DNA 4 834bp缺失突变的发生情况 ,并检测血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化。结果 A组大鼠线粒体DNA 4 834bp缺失突变发生率为 2 3 0 8% (3/ 13) ,B组为 6 8 75 % (11/ 16 ) ,C组为 0 (0 / 8) ,经Fisher′s精确概率检验 ,单侧检验 ,A组和B组之间差异有显著性 (P =0 0 18) ,A组和C组之间差异无显著性 (P =0 2 15 )。A组血清谷胱甘肽过氧化物酶活性较B组高 ,差异有显著性 (校正t′检验 ,单侧检验 ,t′=6 4 74 ,P <0 0 1) ;A组和C组之间差异无显著性 (校正t′检验 ,双侧检验 ,t′ =1 92 0 ,P >0 0 5 )。结论 维生素E和辅酶Q10具有增加机体对自由基的清除能力 ,保护内耳组织线粒体DNA ,降低 4 834bp缺失突变发生率的作用。

正常妊娠和原因不明习惯性流产者HLA-G基因14bp缺失多态性研究

为研究HLA-G基因3’非翻译区14 bp缺失多态性在习惯性流产患者和正常妊娠妇女中的差异,分别提取患者蜕膜和正常女性外周血DNA。PCR扩增HLA-G基因第8外显子,产物经9%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并经EB染色后在凝胶成像仪下观察。显著性检验用SAS软件包进行四格表χ2分析。结果显示:(1)-14 bp和+14 bp等位基因频率在两组间无显著性差异;(2)与正常对照组相比,RSA患者组中-14 bp/+14 bp杂合子的比例显著升高(χ2=4.7690,P=0.0290)。结果提示,中国人群HLA-G 14 bp缺失多态性在维持正常的妊娠中可能有重要作用。

电离辐射致人外周血有核细胞mtDNA 4977bp缺失水平分析

采集6名正常人外周血,体外进行60Coγ射线单次照射,剂量分别为0、1、2、3、4和5 Gy。照射后2小时采用实时定量PCR方法检测60Coγ射线诱发的人外周血有核细胞mtDNA 4977bp缺失(ΔmtDNA4977)和mtDNA总拷贝数(mtDNAtotal),探讨用ΔmtDNA4977为指标进行辐射事故生物剂量估算的可能性。结果表明,在0～5 Gy照射剂量范围内,6名健康人mtDNA样品中的mtDNAtotal拷贝数、ΔmtDNA4977拷贝数和ΔmtDNA4977缺失率在照射后明显高于未照射(0 Gy)的mtDNA样品(p<0.05),但各照射剂量组间未见明显差异(p>0.05)。提示电离辐射能够诱发人外周血mtDNA样品中4977bp缺失的累积和mtDNA总拷贝数的增加,但ΔmtDNA4977水平与受照剂量间未见明显的剂量-效应关系。

实时定量PCR分析健康人外周血线粒体DNA 4977 bp缺失

目的:用实时定量PCR方法分析健康人外周血线粒体DNA4 977 bp的缺失情况。方法:收集27例年龄在17～44岁的健康人外周血,用荧光实时定量PCR方法对每个样品同时检测线粒体DNA 4 977 bp缺失的量和无4 977 bp缺失的量,进行定量分析。结果:在27例健康人外周血样品中,线粒体DNA4 977 bp缺失的阳性率为70.37%(19/27);19例有线粒体DNA4 977 bp缺失的样品,其扩增产物的CT值在第35个循环到第39个循环之间;无线粒体DNA 4 977 bp缺失的扩增产物的CT值在第15个循环到第21个循环之间;不同年龄组间线粒体DNA 4 977 bp缺失和无线粒体DNA4 977 bp缺失的量均无统计学差异。结论:本文中超过2/3的健康人外周血含有线粒体DNA 4 977 bp的缺失;在有该缺失的样品中大约每106～107拷贝中携带有一个线粒体DNA4 977 bp缺失;随年龄的增长外周血中线粒体DNA 4 977 bp的缺失未显示出累积现象。

广西壮、苗族和越南京族人线粒体DNA 9 bp缺失频率的分析

目的探讨广西壮、苗族和越南京族人的mtDNA V区的遗传多态性。方法PCR—PAGE扩增和检测COⅡ与tRNA^Lys基因之间的片段，随机选择部分PCR扩增产物进行测序予以确认。结果在广西壮、苗族和越南京族人样本中只发现标准型和短型两种类型的扩增产物。广西壮、苗族和越南京族人的9bp缺失频率分别为20．83％、33．01％和33．31％。结论来自不同地区种族和人群的9bp缺失频率有所不同。研究结果支持中国南方人群与越南人在遗传上有较为密切的关系。

卵母细胞mtDNA4977bp缺失在卵巢储备功能下降中的研究

目的检测卵巢储备功能下降患者卵母细胞线粒体DNA(mtDNA)4977 bp缺失,探讨其对卵巢储备功能下降患者生育潜能的可能影响。方法选取湘雅医院生殖中心2008年3～9月行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的不育患者80例,按卵巢储备功能状态分为卵巢储备功能下降(DOR)和卵巢储备功能正常(NOR)两组,胚胎移植日收集两组患者成熟未受精MII卵母细胞110枚,DOR组46枚,NOR组64枚。采用聚合酶链反应(PCR)定性检测mtDNA 4977 bp缺失,比较两组患者卵母细胞mtDNA 4977 bp缺失率。结果 DOR组与NOR组比较,卵母细胞具有较高的mtDNA 4977 bp缺失率(48.8%vs 18.8%,P<0.05),两者比较差异有显著性。Logistic回归分析显示,患者年龄对两组患者mtDNA4977 bp的检测结果无影响。结论 DOR患者卵母细胞mtDNA4977 bp缺失率增高,可能与其卵母细胞发育潜能下降相关。

PPP1R3基因3′非翻译区5bp缺失/插入多态性与安徽汉族人2型糖尿病相关性研究

目的 研究 1型蛋白磷酸酶骨骼肌特异糖原靶向调节亚单位 (PPP1R3)基因 3′ UTR 5bpD/I多态性与 2型糖尿病 (T2DM )及其中间表型的相关性。方法 选取安徽省合肥地区汉族T2DM患者 16 0例 ,健康成人 10 6例 ,运用聚合酶链反应片段长度多态性技术进行基因型测定。结果 ①PPP1R3基因 3′ UTR 5bpD/I多态性的基因型及等位基因频率在T2DM与健康对照组间分布差异没有显著性 (P >0 0 5 ) ;②不同基因型组间空腹血糖、血压、空腹胰岛素、胰岛素敏感指数、体重指数、腰臀围比差异均无显著性 ,糖尿病组中基因型D/D的餐后 2h血糖显著低于基因型D/I、I/I(P=0 0 32 )。结论 PPP1R3基因 3′ UTR 5bpD/I多态性与安徽汉人

PUVA治疗诱导皮肤线粒体DNA 4977 bp缺失突变累积的研究

为探讨线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)4977bp缺失突变与皮肤光老化之间的关系,采用三条引物PCR的方法检测长波紫外线光化学疗法(PUVA)治疗的银屑病患者背部非皮损区皮肤mtDNA4977bp缺失突变的累积。结果发现,在PUVA治疗期间3～21天、治疗后1～6个月和治疗后6个月以上的各组活检标本中,发生4977bp缺失突变的mtDNA占总mtDNA比例分别为0.06,0.12和0.19,和未经PUVA治疗的对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。表明线粒体DNA4977bp缺失突变累积与皮肤光老化密切相关,可能作为衡量皮肤紫外线损伤程度的分子生物学标志。

人外周血线粒体DNA4977bp缺失与电离辐射相关性研究

目的探讨电离辐射诱导的线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失与辐射生物剂量的相关性。方法用巢式聚合酶链反应(PCR)方法扩增mtDNA4977bp缺失片断,同时扩增mtDNA序列中相对稳定区域的片断作为内参照,代表总mtDNA的量。通过琼脂糖凝胶电泳分离目的片段,并经凝胶图像分析系统获得灰度值,得出mtDNA4977bp缺失片断与代表总mtDNA的片段的灰度比值。结果通过对琼脂糖凝胶电泳图像和灰度值的比较,可得出照射剂量在0.2～3.0Gy时,灰度比值基本呈增加趋势;而剂量在4.0～10.0Gy时,比值变化较大且无规律性。结论在相对较低剂量照射时,mtDNA4977bp缺失的量与受照剂量呈一定相关性,当照射剂量≥4.0Gy时,这种剂量效应关系较不稳定。

X射线致人外周血线粒体DNA 4977bp缺失的时效关系研究

采集2名25岁健康男性外周血进行不同剂量(0～10 Gy)单次X射线照射,于照后取不同时间点(2、12、24、48和72 h)培养的细胞提取基因组DNA,利用实时定量PCR检测不同时间点线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失情况,探讨X射线致人外周血mtDNA 4977bp缺失的时间效应关系。结果表明,受照剂量为5 Gy时,随着照射后培养时间的增加,mtDNA 4977bp缺失拷贝数、mtDNA总拷贝数和mtDNA 4977bp缺失率均有增加趋势。培养时间为24 h和72 h时,在0～10 Gy剂量范围内mtDNA 4977bp缺失拷贝数、mtDNA总拷贝数和mtDNA 4977bp缺失率随着受照剂量的增加而增加。提示X射线诱发的mtDNA 4977bp缺失和mtDNA总拷贝数具有时间和剂量累积性。

卵丘颗粒细胞mtDNA拷贝数及4977bp缺失在卵巢储备功能减退中的研究

目的分析卵巢储备功能减退(DOR)患者卵丘颗粒细胞线粒体DNA(mtDNA)拷贝数和4977 bp缺失情况,初步探讨DOR患者卵丘颗粒细胞mtDNA结构是否完整。方法选取2019年4月至2020年10于河北省生殖医院行IVF/ICSI-ET治疗的不孕症患者33例,根据卵巢储备功能情况分为DOR组(17例),卵巢储备功能正常(NOR)组(16例),比较两组患者的一般情况、实验室指标及妊娠结局。于取卵日挑选患者卵泡液中的卵冠丘复合体后,分别收集每位患者卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞团,用线粒体分离试剂盒提取卵丘颗粒细胞的线粒体后提取mtDNA,采用实时定量PCR检测卵丘颗粒细胞mtDNA的拷贝数和4977 bp缺失情况,比较两组患者mtDNA 4977 bp缺失率及拷贝数的差异。结果两组患者的体质量指数(BMI)、基础性激素水平无统计学差异(P>0.05);DOR组的女方年龄显著高于NOR组(P<0.05),DOR组基础窦卵泡数(AFC)显著低于NOR组(P<0.05)。两组患者卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率、临床妊娠率、种植率均无统计学差异(P>0.05);DOR组促性腺激素(Gn)天数、Gn用量、平均获卵数和受精率显著低于NOR组(P<0.05)。DOR组mtDNA拷贝数(1.04±0.48)略低于NOR组的mtDNA拷贝数(1.13±0.52),但两者尚无显著性差异(P>0.05);且DOR组和NOR组的卵丘颗粒细胞mtDNA均未检测到4977 bp缺失。结论DOR患者卵丘颗粒细胞mtDNA拷贝数并未明显减少,也未见4977 bp片段缺失;其可能与DOR患者临床结局较差并无直接关联。

云南大理白族和汉族弱精子症患者精子mtDNA 4977 bp缺失相关性研究

探讨云南大理白族和汉族弱精子症患者精子线粒体DNA(mtDNA) 4977 bp缺失的相关性。收集云南大理白族弱精子症患者137例,汉族弱精子症患者121例,正常对照组大理白族和白族精子活力正常人各120例,提取精液基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)技术进行精子mtDNA4977bp缺失的研究。结果显示,120例正常对照的大理白族精子活力正常人中有10例(8.33%)存在mtDNA4977 bp缺失;而137例大理白族弱精子症患者中有89例(64.96%)存在mtDNA 4977 bp缺失。两组4977 bp缺失频率比较有极显著性差异(P <0.01)。120例正常对照的汉族精子活力正常人中有7例(5.83%)存在mtDNA 4977 bp缺失;121例大理白族弱精子症患者中有85例(70.25%)存在mtDNA 4977 bp缺失。两组4977 bp缺失频率比较差异有极显著性(P <0.01)。同时发现大理白族弱精子症患者与汉族弱精子症患者mtDNA 4977 bp缺失频率无显著性差异(P> 0.05)。大理白族和汉族人群mt DNA 4977 bp缺失与弱精子症的发病有明显的关联,提示mtDNA 4977 bp缺失在弱精子症的发生中可能起重要作用。

胃癌细胞系和胃癌组织中线粒体DNA 4977 bp缺失及其生物学意义

目的 明确线粒体DNA 4 977bp大片段缺失在胃癌细胞系、胃癌组织及胃癌患者血清中的频率 ,为胃癌的早期临床诊断寻找简便准确的分子标记。方法 运用Primer shiftPCR和直接测序的方法对 13个胃癌细胞系、5 2对胃癌组织及对应的癌旁正常组织 (年龄从 2 8～ 78岁 )、4 0例胃癌患者血清及 4 0名正常人血清进行筛查。取 10例胃癌组织的石蜡切片 ,采用显微切割技术在同一患者的切片上同时分离 3种组织 (包括胃粘膜正常腺体、肠化上皮及胃癌组织 )对mtDNA 4 977bp缺失进行了分析比较。结果 在 13个胃癌细胞系中 12个有mtDNA 4 977bp缺失 (缺失率为 92 3% ) ,5 2例胃癌组织中 38例有缺失 (缺失率为 73 1% ) ,5 2例癌旁正常组织中 2 7例有缺失 (缺失率为 5 2 % ) ,4 0名胃癌患者血清中 17例有缺失 (缺失率为 4 2 5 % ) ,4 0名正常人血清中 8例有缺失 (缺失率为2 0 % )。胃癌组织和癌旁正常组织mtDNA 4 977bp缺失差异有显著意义 ,癌组织mtDNA4 977bp缺失率与胃癌的分型和患者的性别没有关联。胃癌患者血清与正常人血清mtDNA 4 977bp缺失差异也有显著意义。 10例显微切割组织中 2例肠化上皮及胃癌组织中有缺失 ,而胃粘膜正常腺体未见缺失。结论 线粒体DNA 4 977bp大片段缺失可能在胃癌发生和胃粘膜病变演化及?

线粒体基因组4977bp异质性缺失与高原肺水肿易感性无关

目的研究线粒体基因组4 977 bp大片段异质性缺失与高原肺水肿(high altitude pulmonary edema,HAPE)易感性的关系。方法选择本室收集的HAPE标本36例及与其匹配的健康对照标本36例,采用定量PCR(SYBR)的方法研究线粒体基因组4 977 bp大片段异质性缺失与高原肺水肿易感性的关系。结果在高原肺水肿的病例组及对照组中均没有发现4 977 bp异质性缺失。结论线粒体基因组4 977 bp异质性缺失与高原肺水肿易感性无关。

健康人周围全血线粒体DNA4977bp缺失的实时定量聚合酶链反应检测

目的了解健康人周围全血线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失(ΔmtDNA4977)情况。方法采集60名年龄20～80岁的健康人周围血,用实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测ΔmtDNA4977和总mtDNA(mtDNAtotal)的量并进行分析。结果在60名健康人周围血样品中,ΔmtDNA4977的检出率为45%(27/60),ΔmtDNA4977率在0%～3.076×10-5%,年龄和性别不影响ΔmtDNA4977水平(P>0.05)。结论在健康人周围血中,ΔmtDNA4977水平较低,且未显示出年龄依赖性累积现象。

电离辐射致线粒体DNA 4977 bp缺失质粒构建及其鉴定

目的建立电离辐射诱导的人线粒体DNA(mtDNA)4977 bp缺失片段和对照DNA片段的稳定质粒,用于线粒体基因组相关研究。方法对无mtDNA 4977 bp缺失的正常人外周血进行离体照射10 Gy60Coγ射线,提取细胞总DNA,用巢式PCR扩增mtDNA 4977 bp缺失片段,普通PCR扩增对照ND1基因片段。PCR产物经纯化后构建质粒;提取质粒DNA,DNA样品经酶切、纯化后测序,将测序结果进行BLAST分析。结果PCR扩增的跨mtDNA 4977 bp缺失的DNA片段和ND1基因片段大小与预期值是吻合的。对制备的质粒DNA样品进行测序,结果经BLAST分析,两种质粒DNA与人线粒体序列同源性在99%以上。结论本研究中所构建的质粒是成功的,可以用于人mtDNA4977 bp缺失的定性或定量研究。

广东地区汉族群体线粒体DNA 9bp序列缺失频率研究

旨在研究中国广东省部分地区汉族人群线粒体DNA Region Ⅴ 9bp序列缺失情况。采用PCR-PAGE和直接测序法对3个群体144份样本mtDNA Region Ⅴ进行序列分析。结果只检测到标准型和短型(即9bp缺失)两种多态。广东汉族人群的平均缺失频率为21.5%,广州、东莞和湛江汉族人群的缺失频率依次为20.8%、19.2%和25.0%。由此得出,广东汉族人群mtDNA9bp缺失频率较高,与其它地区汉族群体存在一定的差异。

碳离子辐射引起Hela细胞线粒体DNA 4977 bp的缺失

背景:线粒体DNA4977bp缺失的累积对衰老的多细胞动物来说是一个显著的特征,同时也与各种肿瘤细胞的转移和凋亡有关。目前的研究已证明辐射可特异性地诱导此缺失的产生,有望将其作为新的DNA水平的辐射损伤生物剂量标记。目的:用聚合酶链反应方法检测碳离子辐射引起的Hela细胞线粒体DNA4977bp突变缺失,并观察碳离子辐射剂量及辐射时间与线粒体DNA4977bp缺失的相关性。设计、时间及地点:细胞DNA水平的对照实验,于2008-10/11在甘肃省兰州市近代物理研究所完成。材料:人宫颈癌细胞Hela细胞株。方法:Hela细胞经2～8Gy的碳离子辐射后,于2～24h各个时间点分别提取包含线粒体DNA的全基因组DNA,并用聚合酶链反应法扩增线粒体DNA4977bp缺失的特异片段,通过限制反应模板浓度和聚合酶链反应循环数的方法进行定性分析。主要观察指标:碳离子辐射剂量及辐射时间对线粒体DNA4977bp缺失的影响。结果:经2Gy辐照处理的Hela细胞在2,4,8,24h4个时间点的检测中均无聚合酶链反应阳性产物,8Gy辐照处理的Hela细胞在12,16,24h3个时间点可检测到线粒体DNA4977bp缺失,且随时间延长而累积。辐照后12hHela细胞在8Gy辐照处理后可检测到线粒体DNA4977bp缺失,辐照后16和24hHela细胞在6,8Gy辐照处理后可检测到线粒体DNA4977bp缺失。结论:碳离子辐射引起的Hela细胞线粒体DNA4977bp缺失存在剂量相关性,且其累计程度可能与辐射时间有关。

线粒体DNA 4977 bp缺失和彗星分析评价肿瘤细胞的辐射敏感性

目的 探讨mtDNA4977bp缺失和彗星分析用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性.方法 选取3种不同肿瘤细胞株:肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7).采用MTT法检测肿瘤细胞经γ射线照射后的存活分数(SF);巢式PCR法测肿瘤细胞的mtDNA 4977bp缺失率;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测肿瘤细胞的DNA断裂水平.结果 用MTT法发现HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞.8 Gy照射后HepG2和EC-9706 mtDNA 4977 bp缺失率明显高于MCF-7细胞(P＜0.05),证实HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞.多种方法分析结果说明3种肿瘤细胞在8 Gy照后表现出的辐射敏感性差异有统计学意义.结论 多种生物学指标的综合应用,可能更加客观准确地评价肿瘤细胞的辐射敏感性.

妇科肿瘤组织中线粒体DNA4 977 bp缺失及生物学意义

目的明确线粒体DNA4 977bp大片段缺失在妇科肿瘤组织及对应患者血清中的频率,为妇科肿瘤的早期临床诊断寻找简便、准确的分子标记。方法运用引物转化PCR的方法对25例妇科恶性肿瘤患者(观察组)、13例癌旁正常组织(对照组)和25例妇科良性肿瘤患者(对照组)的肿瘤组织及对应患者术前血清标本mt DNA 4 977 bp缺失进行分析比较。结果在19例卵巢良性肿瘤中12例有缺失(缺失率为63%),6例子宫肌瘤患者正常内膜均没有缺失(缺失率为0),6例卵巢癌均无缺失(缺失率为0),7例子宫颈癌和癌旁正常组织各3例有缺失(缺失率为43%),6例子宫内膜癌中5例有缺失(缺失率为83%),6例外阴癌癌组织缺失率为100%,癌旁正常组织无缺失。妇科恶性肿瘤患者血清中没有缺失,25例妇科良性肿瘤患者血清中4例有缺失(缺失率为16%)。结论妇科恶性肿瘤中线粒体DNA4977 bp大片段缺失的不同发生率提示检测这种缺失可能会成为区分不同妇科肿瘤的分子标记物。检测妇科肿瘤患者血清mt DNA4 977bp大片段缺失对预测妇科肿瘤的发生没有临产意义。