Bradford法测定牛奶中蛋白质含量

采用Bradford法与传统的凯氏定氮法测定牛奶中蛋白质含量并进行比较,Bradford法方便快捷,成本低廉。通过试验对比验证,添加的尿素或者三聚氰胺对测定无影响,与微量凯氏定氮法比较,两者的结果有相关性。

Bradford法测定土壤球囊霉素相关蛋白的影响因子

土壤球囊霉素相关蛋白(glomalin-related soil protein,GRSP)是评价土壤健康的重要指标。研究了土样粒径、贮存条件和高温提取后离心延误时间3个影响因子对采用Bradford法测定GRSP含量的作用效果。结果表明,土样粒径对易提取GRSP(EEG)的提取测定影响显著,过0.074 mm孔径筛土样中提取出的EEG含量高于过0.149、0.25、1 mm孔径筛的土样;总GRSP(TG)含量的测定结果对土样粒径的变化没有明显响应,测定TG含量可采用过1 mm孔径筛的土样。贮存条件影响EEG和TG含量的测定,有机质含量低的土样室温保存18个月条件下测得的EEG含量低于-20℃保存条件下;有机质含量高的土样室温保存条件下测得的EEG含量高于-20℃保存条件下;室温保存条件下3个有机质含量水平的土样TG含量均高于-20℃保存条件下。不同样品保存方式间3个有机质含量水平的土样EEG或TG含量差异均显著。为减小有机质降解等的影响,宜低温保存土样。提取后延误离心将导致EEG含量测定值降低,因此延误时间以控制在1 h之内为宜;离心延误2 h内不同延误时间之间测得的TG含量无显著差异。

水的酸碱度对Bradford法检测蛋白质含量的影响

目的探讨水酸碱度的变化对Bradford法检测蛋白质含量的影响。方法用pH分别为4.0(pH=4.0组)、7.0(pH=7.0组)和10.0(pH=10.0组)的双蒸水配置Bradford法所需要的试剂,绘制标准曲线,检测标准蛋白浓度,比较水的酸碱度的变化对标准曲线的影响。结果pH=4.0组和pH=7.0组的标准曲线拟合度较pH=10.0组标准曲线拟合度明显增高;pH=4.0组和pH=7.0组检测的蛋白质含量与已知蛋白浓度相比差别无统计学意义(P>0.05);pH=10.0组检测蛋白质的含量与已知蛋白浓度、pH=7.0组和pH=4.0组相比差别均有统计学意义(P<0.05),pH=7.0组和pH=4.0组检测蛋白质含量的准确性高于pH=10.0组。结论双蒸水酸碱度的变化可以影响Bradford法检测蛋白质含量的精确度。

微量Bradford法测定提纯禽结核菌素蛋白含量

研究用96孔微量板Bradford法测定提纯禽结核菌素蛋白含量。通过不同浓度的待测禽结核菌素与考马斯亮蓝G-250溶液混合后，在595nm光波下测定各孔样品的OD值。微量Bradford法检测禽结核菌素的线性范围是50—1000μg／mL，相关系数为0．999，最低定量限为50μg／mL。试验用3支禽结核菌素国际参照品，分别配制成125、250、500μg／mL三种不同浓度，每支每种浓度测定4次，计算实际测得的蛋白质浓度。结果显示，批内相对标准偏差为1．6％～4．4％；批间相对标准偏差0．7％-2．2％。研究结果表明微量Bradford法可作为测定禽结核菌素蛋白含量的一种方法。

螺旋霉素中蛋白含量的测定方法(Bradford法)及验证

建立螺旋霉素中蛋白含量的测定方法。用0.9%NaCl溶液为溶剂,采用Bradford法,于波长595nm处比色,螺旋霉素中蛋白含量的最小检测限:5μg/mL。

用BRADFORD法测定蛋白质含量适宜条件的探讨

在１４～２４℃温度范围内，随着温度上升，蛋白质含量实测值与理论值差异逐渐减少；温度高于２４℃时，实测值与理论值基本一致．２４℃时，反应时间少于３ｍｉｎ，实测值低于理论值；反应时间长于３ｍｉｎ，实测值与理论值基本一致．所以Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量的适宜条件是温度不低于２４℃，反应时间不少于３ｍｉｎ．

三种酶纯化常用试剂对Bradford法的干扰研究

为了研究常用酶纯化试剂对考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量的影响,试验以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白,探索硫酸铵、乙醇和丙酮对该方法的干扰规律和消除这些干扰的方法,然后在丙酮沉淀脂肪酶试验中进行验证。结果表明:硫酸铵对蛋白质含量测定值影响较小,而高浓度的丙酮、乙醇造成测定值偏高数倍;将蛋白质样品稀释5倍可基本消除丙酮、乙醇的干扰。在验证试验中,将上清液稀释5倍,然后测定蛋白质含量,解决了随着丙酮浓度升高,沉淀和上清液蛋白质含量测定值同时增加的问题。说明稀释是解决高浓度乙醇、丙酮对Bradford法干扰的有效方法。

Bradford定量法在蛋白质组学中应用的优化研究

Bradford法具有成本低、灵敏度高和测定快速简便的特点,是目前应用最广泛的蛋白质定量方法之一。为使Bradford法更适合在蛋白质组学研究中应用,针对双向电泳样品对经典Bradford法进行了优化。通过分析0～1 000μg范围内蛋白质含量与吸光度的关系,确定Bradford法的线性范围在0～100μg之间。通过分析不同体积蛋白质裂解液(lysis)、lysis各组分以及不同表面活性剂的干扰程度,发现lysis的干扰程度与其体积呈正相关;通过在有无lysis两种条件下连续测定蛋白质样品吸光度的变化,发现lysis会降低蛋白质-染料复合物的稳定性,较适宜的测定时间为反应后3～30 min;将显色液中磷酸含量提高至10.2%(w/V)可提高蛋白质-染料复合物的稳定性。由于相同含量蛋白质样品在有无lysis两种条件下,吸光度值有较大差异,因此在制作标准曲线时,在标准蛋白样品和对照中都应加入相应体积的lysis。通过将加样体积从100μL减小为10μL并比较不同加样体积所得标准曲线,发现加样体积调整可减小数据波动性,改善标准曲线线性关系,同时可省去对样品的稀释步骤,简化操作。

威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定方法研究

目的 建立威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定的最佳方法。方法 以氨基酸分析仪测定的威廉环毛蚓提取物中的氨基酸含量为指标,对蛋白质含量检测方法 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法进行对比评价。结果 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法测定威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(上清液)结果分别为27.03%、45.85%、31.58%、11.11%,威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(混悬液)的结果分别为38.44%、52.39%、44.06%、11.56%。采用氨基酸分析仪法测定得到威廉环毛蚓提取物中游离氨基酸含量为4.18%,将威廉环毛蚓提取物蛋白质酸水解之后测定总氨基酸含量为48.53%。结论 在威廉环毛蚓提取物样品溶液的处理方式上,与样品上清液相比,样品混悬液的测定结果更接近样品中蛋白质的真实含量。以牛血清白蛋白(BSA)为对照品,相较于Lowry法2、改良Lowry法和Bradford法,BCA法更适宜用于威廉环毛蚓提取物中的蛋白质含量测定。

4种常用蛋白浓度测定方法的比较

目的比较4种常用蛋白浓度测定方法的准确性及各自的影响因素。方法采用Lowry法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、Bradford法等4种常用蛋白浓度测定方法对几种样品进行对比试验。结果研究了蛋白质样品中的添加物对不同方法的影响,采用BCA法测定PEG-IL-6的蛋白浓度以及采用Bradford法测定变性液中的蛋白浓度不仅准确而且重复性好。结论确定PEG-IL-6的最佳蛋白浓度测定方法为BCA法,而包涵体变性液中的蛋白浓度只能用Bradford法测定。

人参蛋白四种提取方法的比较研究

通过对人参蛋白的四种提取方法(盐析法、丙酮沉淀法、聚乙二醇沉淀法、中空纤维膜过滤法)进行比较,采用SDS-PAGE电泳法、Bradford蛋白纯度检测法获得相关数据。结果表明,聚乙二醇沉淀法和中空纤维膜过滤法收率最高;中空纤维膜过滤法与盐析法纯度最好;中空纤维膜过滤法的电泳条带最完整清晰。

SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究

目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异。结果:用7.5%分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异。结论:利用SDSPAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础。

采用超滤前处理考马斯亮蓝法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量

目的:药品中外源性残留蛋白不仅影响药品质量,且严重威胁人用药安全。青霉素G酰基转移酶(简称PGA)是酶法工艺生产β-内酰胺抗生素过程中所用关键催化酶,有必要对其进行研究并严格控制终产品中的蛋白残留量。已有方法采用凝胶过滤法(GFC)对残留蛋白进行前处理,但该法存在富集效率低等诸多问题。本文探讨并尝试建立一种不同方式和原理的蛋白分离、富集方法,采用超滤前处理结合考马斯亮蓝(Bradford)法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量。方法:采用Amicon?Ultra-15型超滤管(15 mL,截留分子量为3 kDa)对阿莫西林供试液进行前处理,离心力为5000 g(7000rpm),对溶液进行净化并对蛋白进行浓缩富集,再采用Bradford法对浓缩液进行蛋白定量测定,检测波长为595 nm。结果:该法具有较好的专属性;蛋白浓度在1.0~100.0μg·mL-1(r=0.9921)内校正曲线(lg A^lg C)的线性关系良好;回收率>72%(n=3×3);Bradford法最低检出限为0.1μg·mL-1,相当于0.0001%;Bradford法的精密度≤5.0%。结论:该方法准确、可靠,相比于已有方法,蛋白富集量更大、操作简便、设备要求低,可用于酶法工艺阿莫西林中残留蛋白的测定,对酶法工艺半合成抗生素中残留蛋白的质控及酶法工艺稳定性监测提供了一定技术指导。

几种蛋白质含量测定方法的比较研究

目的 :为培养的肝细胞及神经元蛋白质含量测定选择最佳方案。方法 :采用三种较为常用的蛋白质含量测定方法 :Bradford、Lowry和Bio-radDC法分别对培养的小鼠肝细胞、神经元细胞的全细胞蛋白质提取样品进行测定 ,并对结果进行比较。结果 :蛋白质含量测定及重复性实验对比分析可见 ,用Bradford、Lowry和Bio -radDC法测定肝细胞蛋白质样品 ,结果均较稳定 ;测定神经元蛋白质样品 ,Bradford和Bio -radDC法较稳定 ,Lowry法不稳定。结论 :肝细胞蛋白含量测定宜采用Bradford法 ,神经元蛋白含量测定宜采用改良Bio -radDC法。

活性污泥胞外聚合物中蛋白质定量方法的评价

胞外聚合物(EPS)中蛋白质的准确定量对研究活性污泥性质具有重要意义。为对EPS中蛋白质定量方法的选择提供依据,系统评价了Modified Lowry法、BCA法、Bradford法的测试性能,包括测试范围、准确度、精密度及对EPS中部分组分(Ca^2+、Mg^2+、还原性糖、腐殖酸)的抗干扰性。结果表明:Modified Lowry法在蛋白质浓度为1~10、10~100 mg/L时与吸光度的线性相关性较好(R2>0.99),BCA法和Bradford法的测试范围较Modified Lowry法更宽;Modified Lowry法的准确度和精密度均最高,BCA法次之,Bradford法最低;Modified Lowry法受Ca^2+、Mg^2+和还原性糖干扰,BCA法受还原性糖和腐殖酸干扰,Bradford法受腐殖酸的干扰。因此,EPS中蛋白质定量方法的选择应从样品性质(蛋白质浓度范围、干扰物质种类及浓度)和测试方法性能(测试范围、准确度、精密度和抗干扰性)2个方面综合考虑。

紫苏饼粕分离蛋白中蛋白质含量测定方法比较

以凯氏定氮法结果为标准,比较常用的3种蛋白质定量方法,建立紫苏饼粕分离蛋白中蛋白质含量的测定方法。凯氏定氮法、Lowry法、BCA法、Bradford法的测定结果分别为86.52%±0.51%、89.71%±0.79%、94.64%±1.06%、85.88%±0.51%。经比较分析,Bradford法精确度高,重现性好,消耗样品量少,用时短,操作简单,可以准确简便地测定紫苏饼粕分离蛋白中的蛋白质含量。

3种方法测定大鼠肝微粒体蛋白含量的比较

目的:比较Folin-酚(Lowry)法、双辛可宁酸(BCA)法、考马斯亮蓝(Bradford)法测定蛋白含量的的准确性及适用性。方法:采用上述3种蛋白浓度测定方法测定标准小牛血清蛋白(BSA)含量,考察其灵敏度、准确度、精密度、线性范围及影响因素,并用于大鼠肝微粒体蛋白含量的测定。结果:3种方法线性及相关度都较好,线性范围以BCA法最宽,Bradford法次之,但Lowry法、BCA法精密度及准确度都优于Bradford法,抗离子干扰能力也明显优于Bradford法。结论:BCA法测定肝微粒体蛋白浓度较准确、稳定,但Lowry法操作简单,原料经济,准确性及稳定性也较好,更适合于实验室研究使用。

常量法和微量法测定蛋白质含量综合性实验设计

蛋白质含量测定是生物化学和分子生物学研究中最常用的分析方法之一。该文以Bradford法为基础,利用紫外分光光度计(常量法)和多功能酶标仪(微量法)分别进行蛋白质含量测定。在此基础上,总结了常量法和微量法在测定蛋白质含量中的异同点。结果表明:常量法适合样品数量少、体积大的体系;而微量法则可以大大提高测试效率,特别适宜样品数量多、体积少的体系表征。由于微量法在相同条件下可同时完成多个样品的测试,具有更高的测量准确性。两种方法在实验中的综合运用可大大提高实验效率,有助于学生掌握Bradford法测定蛋白质含量的原理,认识常量法和微量法测定蛋白质含量的共性及特性,提高学生对紫外分光光度计和多功能酶标仪工作原理及工作特点的认识,显著提升学生的实验能力和逻辑思维能力,为从事相关科研工作奠定基础。

重组人白介素-11蛋白浓度两种测定方法比较

在基因工程蛋白药物开发研究过程中,选定恰当、准确的蛋白浓度测定方法非常重要。本文比较Lowry法和Bradford法测定重组人白介素11蛋白浓度结果,认为选用Bradford法是可行的,但中国药典三部蛋白浓度测定方法中没有收录Bradford法,建议在中国药典三部修订时收录该方法。

流动注射光度法测定黄酒中蛋白质的含量和分子量分布

将流动注射技术引入Bradford蛋白质测定法,利用Sepadex G-100凝胶层析柱分离黄酒中的蛋白质,可直接测定蛋白质的含量和分子量分布.成品酒(熟酒)为5.32 g/L(6.86 g/L);高分子蛋白质(FW>25000)占10.52%(13.08%);中分子蛋白质(FW:25000～5000)占49.12%(54.12%);小分子蛋白质(FW<5000)占40.36%(32.80%),并得到黄酒中蛋白质含量与分子量分布的曲线谱图,可监控和预测黄酒的品质.