人脑胶质瘤细胞原代培养实验模型的构建

目的:探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,提高原代培养的成功率,快速构建人脑胶质瘤细胞体外试验模型。方法:分别采用组织块培养法和酶消化法对12例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果;通过倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞的形态学特点;通过生长曲线的测定研究体外培养细胞的生长特性。结果:原代人脑胶质瘤细胞短期培养成功,并可传代。经组织块培养法成功率较低为33.3%;经酶消化法短期培养成功率为83.3%,明显高于组织块培养法。培养成功的细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期。结论:用酶消化法可进行人脑胶质瘤短期体外培养,且成功率较高,适宜建立体外细胞培养模型。

脑胶质瘤及其浸润组织中NF-κBp65和VEGF的表达

目的:探讨核因子NF-κBp65、血管内皮生长因子(VEGF)在脑胶质瘤及其浸润组织中的表达和意义。方法:应用免疫组化S-P法检测53例脑胶质瘤、26例脑胶质瘤周围浸润组织及5例正常脑组织中NF-κBp65及VEGF的表达。结果:NF-κBp65和VEGF表达强度均与脑胶质瘤恶性度有关(P<0.05);在恶性度高的脑胶质瘤周围的浸润组织中NF-κBp65和VEGF的表达也增强。脑胶质瘤中NF-κBp65表达与VEGF表达呈正相关(r=0.695 2,P<0.05)。结论:脑胶质瘤相关的癌蛋白NF-κBp65对VEGF表达具有正向调节作用,促进肿瘤血管的生成,使脑胶质瘤不断恶化。

人脑胶质瘤中COX-2表达及其与血管新生关系

目的检测COX-2、VEGF和CD34在人脑胶质瘤中的表达,探讨COX-2、VEGF与胶质瘤微血管密度及血管新生之间的关系及意义。方法用免疫组化SP法检测80例胶质瘤及10例正常脑组织中COX-2、VEGF和CD34的表达。结果COX-2与VEGF阳性细胞在坏死区周围及血管密集的区域分布密集,80例胶质瘤中二者表达的阳性率分别为68.8%和72.5%,正常脑组织中无表达;COX-2、VEGF的表达与MVD之间成正相关(r=0.927,r=0.939,P<0.05),COX-2与VEGF的表达成正相关(r=0.885,P<0.05),胶质瘤病理级别与COX-2、VEGF、MVD之间均成正相关(r=0.894,r=0.927,r=0.865,P<0.05)。结论COX-2和VEGF在胶质瘤的生长和进展过程中发挥重要作用,与其恶性度关系密切;COX-2可能通过上调VEGF的表达促进肿瘤组织血管新生。

VEGF_(165)正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节

目的构建 VEGF_(165)(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞 VEGF 在 mRNA 和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将 VEGF_(165) cDNA 从 pGEM-hVEGF_(165)克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒 pCDNA_3中,构建VEGF_(165)正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和 Sanger 双脱氧终止 DNA 测序法证明 VEGF_(165)正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将 VEGF_(165)正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用 RNA 斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测 VEGF mRNA 和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及 DNA 测序表明 VEGF_(165)正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后 VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P<0.05 vs 对照组,31.6%),转染反义表达载体后 VFGF mRNA 和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P<0.05 vs 对照组).结论成功地构建了 VEGF_(165)正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.

脑胶质瘤VEGF表达与动态增强MRI灌注成像的相关性研究

目的:探讨脑胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达与动态增强MRI灌注成像之间的相关性。材料与方法:对37例证实为脑胶质瘤的患者术前行动态增强MRI灌注成像,获得反映局部血流灌注的3个参数,rrCBV、rrCBF、TTP*,对术后的病理切片采用免疫组化法测定组织内VEGF的表达。分析VEGF与胶质瘤组织学级别的关系,并对血流动力学参数与VEGF表达间进行相关性检验。结果:VEGF在不同级别胶质瘤组中的表达具有显著性差异,VEGF与rrCBV、rrCBF具有明显的正相关,r分别为0.699和0.558。结论:VEGF作为促进胶质瘤血管生成最重要的调节因子,其表达程度的高低与分级密切相关,动态增强MRI灌注成像可以作为预测VEGF表达的一种新方法,从而为抗血管治疗提供依据。

垂体瘤转化基因和血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达及其相关性研究

目的:探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)和血管内皮生长因子(VEGF)在胶质瘤中的表达以及二者之间的相关性。方法:将40例胶质瘤患者手术标本按病理级别分为级8例,级10例,级13例,级9例,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG及VEGFmRNA的表达,免疫组化检测PTTG、VEGF蛋白的表达。结果:PTTG蛋白表达在～级的阳性率分别为37.5%,50.0%,76.9%,100.0%,其表达随着肿瘤级别的增高而增加(χ2=9.602,P<0.05);VEGF蛋白～级的阳性率分别为25.0%,40.0%,76.9%,88.9%,二者的表达均随着肿瘤级别的增高而增加(P<0.05)。PTTGmRNA的表达在～级分别为0.907±0.065、1.109±0.083、1.312±0.089、1.499±0.215,组间有极显著性差异(P<0.01);VEGFmRNA的表达在～级分别为1.024±0.118、1.139±0.057、1.415±0.094、1.693±0.128,组间有显著性差异(P<0.01)。PTTG、VEGF蛋白表达呈显著正相关(P<0.01)。结论:PTTG、VEGF的异常表达在胶质瘤中起协同作用,二者共同促进胶质瘤的发生发展。

血管抑素抑制G 422脑胶质瘤生长的实验研究

目的:研究血管抑素(AS)对荷G422脑胶质细胞系小鼠的治疗作用。方法:应用MTT法观察AS对血管内皮细胞系ECV-304和人脑胶质瘤细胞系TJ-905增殖的影响;建立G 422脑胶质瘤小鼠皮下移植模型。皮下注射AS,剂量为10mg/(kg·d)和50mg/(kg·d),连续治疗14天,观察瘤体比和抑瘤率变化。结果:AS对ECV-304细胞抑制作用呈量效依赖性关系,IC(50)=3.7mg/L。体内实验显示,50mg/(kg·d)剂量组抑瘤率达84.3％。结论:本研究为AS用于脑胶质瘤的治疗提供了实验依据,说明AS在肿瘤治疗中有广泛的应用前景。

人arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的抑制

目的:观察人arresten因子对人脐静脉内皮细胞HUVEC与LOVO细胞黏附的影响,探讨与之相关的黏附分子表达的变化。方法:半定量RT-PCR检测arresten对人脐静脉内皮细胞表达血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mrRNA的影响,Western-hlot检测VCAM-1蛋白表达的变化。孟加拉玫瑰红活细胞染色法观察arresten因子对内皮细胞与LOVO细胞黏附的影响。结果:RT-PCR及Western-blot结果表明VCAM-1在HUVEC细胞中高表达,但经过arresten因子处理的HUVEC细胞,其VCAM-1在mRNA水平及蛋白水平的表达均显著下降(P< 0．05)。孟加拉玫瑰红活细胞染色法显示arresten能抑制HUVEC细胞与LOVO细胞的黏附。结论:arresten因子通过降低内皮细胞VCAM-1的表达抑制内皮细胞与肿瘤细胞的黏附,这可能是其抑制肿瘤转移的一种途径。

人恶性胶质瘤细胞裸鼠脑原位移植瘤FPR表达与VEGF关系

目的观测甲酰肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞裸鼠脑原位移植瘤组织中的表达,以及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,探讨FPR在恶性胶质瘤血管生成过程中的作用。方法培养U87细胞,以立体定向注射技术制作U87裸鼠脑原位移植瘤模型;采用间接免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下分别观测FPR在U87细胞和移植瘤组织的表达;免疫组化方法检测VEGF在U87细胞裸鼠脑移植瘤上的表达。结果培养的U87细胞及其原位移植瘤组织均可见FPR表达,定位于瘤细胞胞膜,VEGF阳性着色主要位于胞质,两者阳性表达程度呈正相关性。结论人恶性胶质瘤细胞系U87细胞裸鼠脑原位移植瘤组织存在FPR表达,与VEGF的产生密切相关,在胶质瘤血管生成过程中可能起重要作用。

Caveolin-1对内皮细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究Caveolin-1蛋白在内皮细胞增殖中的作用,其与Ras-p42/44MAPK细胞信号通路的关系。方法:以腺病毒介导在内皮细胞中表达外源Caveolin-1蛋白,分析其对内皮细胞增殖和p42/44MAPK分子磷酸化水平的影响。结果:感染腺病毒表达外源Caveolin-1蛋白的内皮细胞中,血管内皮生长因子(VEGF)诱导的3H-胸腺嘧啶掺入量降低了35%(n=3,P=0.009),p42/44MAPK分子磷酸化水平降低了47.6%。结论:Caveolin-1蛋白抑制p42/44MAPK分子磷酸化水平,抑制内皮细胞增殖。

恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体表达及其活化后促瘤细胞增殖和血管生成因子产生的作用

背景与目的:趋化因子受体在多种病理过程中发挥重要作用,通过促进肿瘤细胞增殖、迁移或血管生成过程,进而在肿瘤发生、演进和转移中发挥极为重要的作用。本研究拟探讨甲酰化肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤细胞中的表达和激活后的功能活性。方法:以人恶性胶质瘤细胞U87和FPR-siRNA-U87细胞为研究对象,采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测人恶性胶质瘤细胞FPR的表达和定位;用FPR配体甲酰-甲硫酰-亮氨酰-苯丙氨酰胺(formy-Met-Leu-Phe,fMLF)激活FPR后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,双抗夹心酶联免疫(ELISA)吸附法检测细胞分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)水平,RT-PCR法检测细胞IL-8mRNA的水平。结果:恶性胶质瘤细胞U87有FPR表达,定位于细胞膜,FPR-siRNA-U87细胞不表达FPR;FPR激动剂fMLF对人恶性胶质瘤细胞具有明显的促增殖作用,U87细胞fMLF刺激组A值较对照组显著升高(P<0.05),FPR-siRNA-U87细胞fMLF刺激组A值与对照组相比无显著性差异(P>0.05);fMLF作为FPR的激动剂,在12h、24h、36h和48h等各时相点U87细胞的VEGF和IL-8蛋白水平均显著增加,以处理36h为观察时间点,U87细胞VEGF蛋白水平[(3.13±0.23)ng/ml]较对照组显著增加(P<0.05),IL-8蛋白分泌量为(7.54±0.53)ng/ml,较对照组显著增加(P<0.05);FPR-siRNA-U87细胞VEGF和IL-8蛋白分泌量分别为(1.26±0.05)ng/ml和(1.54±0.05)ng/ml,较对照组无明显改变(P>0.05);fMLF能显著上调U87细胞IL-8mRNA的表达,较对照组显著升高(P<0.05),FPR-siRNA-U87细胞IL-8mRNA水平与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:人恶性胶质瘤细胞膜存在功能性FPR受体,其活化后具有促瘤细胞增殖和分泌血管生成因子的作用。

缓激肽对大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞及胶质瘤细胞影响的体外研究

目的:体外探讨缓激肽(bradykinin,BK)的作用靶点细胞及BK选择性开放血脑屏障的可能机制。方法:通过免疫荧光测定脑血管内皮细胞、胶质细胞及C6细胞在不同剂量BK作用前后的细胞内钙离子变化,并且通过WesternBlot测定三组细胞的BKB2受体表达水平。结果:小剂量BK可以引起肿瘤细胞内的钙离子水平升高,而只有大剂量BK才能触发星形胶质细胞内的钙离子水平变化,脑血管内皮细胞对大、小剂量BK均无任何反应;三组细胞BKB2受体的WesternBlot整合密度值(integrateddensityvalue,IDV)分别为5000.12±1110.21(n=2)、18480.88±4119.86(n=3)和63032.13±2802.71(n=4),组间比较差异有统计学意义。结论:BK的直接作用靶点是星形胶质细胞及肿瘤细胞,两种细胞B2受体表达水平差异是小剂量BK选择性开放血肿瘤屏障的物质基础;BK可能通过某些细胞间信使起到调节脑血管内皮细胞通透性的作用。

人脑胶质瘤中CENP-F表达与VEGF及血管增生相关性

目的探讨着丝粒蛋白F(CENP-F)在人脑胶质瘤中的表达状况及其与血管内皮生长因子(VEGF)及微血管增生间的关系。方法采用SP免疫组化技术,检测60例胶质瘤及10例正常脑组织CENP-F、VEGF的表达,同时检测CD34了解微血管密度(MVD),并分析三者之间相关性。结果CENP-F、VEGF的表达及MVD在正常脑组织及胶质瘤中差异有显著性(P<0.05),CENP-F的表达及MVD在低级别组与高级别组胶质瘤之间存在显著差异(P<0.05),CENP-F、VEGF阳性者其MVD均高于CENP-F、VEGF阴性者,CENP-F胶质瘤中表达阳性者其中65.7%(23/35)VEGF表达阳性(P<0.05,r=0.247)。结论CENP-F、VEGF在胶质瘤中呈正相关性,CENP-F与胶质瘤微血管增生有相关性。

氨基胍抑制丙酮醛介导的脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤

目的:研究氨基胍对丙酮醛加重脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺糖缺氧损伤的保护作用。方法:在培养的HBMEC上,利用丙酮醛加重缺糖缺氧诱导的损伤,通过MTT检测细胞活力,LDH释放检测细胞死亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot检测晚期糖基化终产物的形成,观察氨基胍的作用和机制。结果:丙酮醛呈浓度依赖地诱导细胞损伤,在2 mmol/L时细胞的存活率为56.1%,而丙酮醛合并缺糖缺氧后,细胞的损伤率增加到90.0%。氨基胍(1 mmol/L)能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导的LDH释放和AnnexinV/PI的形成。进一步研究发现氨基胍能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导晚期糖基化终产物的形成。结论:氨基胍对丙酮醛加重HBMEC的缺糖缺氧损伤具有保护作用,这可能与其抗糖基化作用有关。

VEGF在脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

【目的】研究血管内皮生长因子（VEGF）在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤恶性程度及预后的关系。【方法】应用免疫组化方法检测120例脑胶质瘤标本中VEGF表达，并结合临床资料进行统计学分析。【结果】VEGF的表达在低级别组（Ⅰ～Ⅱ级）与高级别组（Ⅲ-Ⅳ级）之间存在显著差异（P〈0．05）；单因素预后分析显示VEGF的表达与患者的术后总生存期（OS）及无进展生存期（PFS）相关（P〈0．05），VEGF的高表达预示较短的OS和PFS；多因素C0x比例风险回归模型分析显示VEGF是独立的不良预后的危险因素。【结论】VEGF在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的病理分级有关，而且是脑胶质瘤预后的不利因素。

AQP4、VEGF与成年人脑胶质瘤的瘤周水肿程度的相关性

【目的】探讨水孔蛋白4(AQP4)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)与成年人脑胶质瘤的瘤周水肿程度的相关性。【方法】选取2017年1月至2020年2月本院保存的80例成年人脑胶质瘤组织标本(观察组),同时选取50例正常脑组织作为对照组,采用免疫组化染色检测AQP4、VEGF表达,分析不同级别瘤周水肿患者AQP4、VEGF阳性表达情况。【结果】观察组VEGF、AQP4阳性表达率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。高级别脑胶质瘤患者VEGF、AQP4阳性表达率明显高于低级别脑胶质瘤患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同患者性别、年龄、高血压、糖尿病、高脂血症、肿瘤直径、肿瘤数、肿瘤部位比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随着瘤周水肿级别的增加,VEGF、AQP4阳性表达率明显升高(P<0.05)。Spearman秩相关分析显示,脑胶质瘤组织AQP4与VEGF阳性表达呈正相关(rs=0.451,P<0.05)。【结论】成年人脑胶质瘤组织AQP4、VEGF阳性表达率显著升高,与病理级别、瘤周水肿程度有关。